劉艷麗，冉向陽，王縛鯤，賀政新,馬彥華

免疫系統(tǒng)是機體抵御外來病原體及有效防止腫瘤形成和生長的重要防線，其中淋巴細胞是構(gòu)成免疫系統(tǒng)的主要細胞類別，可分為許多表型與功能不同的群體;這些淋巴細胞亞群在免疫應(yīng)答過程中相互協(xié)調(diào)、相互制約，在維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定中起著重要的作用。在外界因素影響下，淋巴細胞可在數(shù)量、形態(tài)及組成比例方面發(fā)生變化，通過對淋巴細胞的檢測可了解機體的免疫狀態(tài)，對觀察病情和判斷預(yù)后具有指導(dǎo)意義。

大顆粒淋巴細胞(large granular lymphocyte, LGL)是一種胞質(zhì)豐富的大型淋巴細胞，細胞體積較大，直徑10～15 μm，核呈圓形或腎形，胞質(zhì)量豐富,胞質(zhì)內(nèi)含有大小不等(粗、細或塵樣)、數(shù)量不一的紫紅色嗜天青顆粒[1]。LGL在免疫監(jiān)視、免疫防御中起著重要作用，可作為評價機體自然殺傷免疫狀態(tài)的一個重要指標[2-3]。

電子對抗是為削弱、破壞敵方電子設(shè)備的使用效能，保護己方電子設(shè)備的使用效能而采取的各種措施和行動的統(tǒng)稱[4]?，F(xiàn)代戰(zhàn)爭條件下，電子對抗會貫穿整個戰(zhàn)斗過程，電磁輻射在戰(zhàn)場環(huán)境中幾乎無處不在，高強度電磁輻射對軍事作業(yè)人員的影響日益受到重視。電磁輻射是能量以電磁波形式從輻射源發(fā)射到空間的現(xiàn)象，研究發(fā)現(xiàn)電磁輻射可對機體造血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響，甚至誘發(fā)腫瘤[4-6]。本研究回顧性分析了某電子對抗部隊官兵外周血淋巴細胞數(shù)量及組成的變化情況，旨在了解電磁輻射對機體免疫功能的影響，以期為制定平戰(zhàn)時電磁輻射的防護標準提供依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2020年3—4月參加電子對抗部隊為期1個月軍事演習任務(wù)的某部官兵78例為研究對象。①納入標準：軍事演習前體檢身體、心理健康者；均接受強電磁輻射暴露1個月；對本研究知情并簽署同意書。②排除標準：檢測前1周有發(fā)熱、咽痛、全身乏力等癥狀者；1周內(nèi)有服藥情況；自身免疫性疾病史；乙肝表面抗原陽性。按上述納入標準最終選取45例接受強電磁輻射暴露1個月官兵為觀察組。同時選取同駐地無強電磁輻射暴露史體檢健康的官兵44例為對照組。2組性別、年齡、體重指數(shù)、吸煙史比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 2組納入者一般情況比較

1.2方法

1.2.1血細胞分析：分別于演習任務(wù)結(jié)束后第3、90天采集2組空腹靜脈血2 ml，EDTA-K2抗凝，取1 ml使用日本Sysmex XT-4000i全自動血細胞分析儀進行外周血細胞計數(shù)，包括白細胞數(shù)、淋巴細胞百分率及絕對值檢測；同時制備血涂片觀察LGL形態(tài)。采用配套試劑和配套質(zhì)控物進行檢測。另取1 ml用于外周血淋巴細胞亞群分析。

1.2.2LGL形態(tài)觀察:取適量的外周血制作頭、體、尾分明的血涂片，室溫自然干燥后，滴加5滴瑞氏-吉姆薩染液A液(貝索公司)，覆蓋整個血膜;1 min后滴加10滴瑞氏-吉姆薩染液B液，輕吹混勻，靜置染色15 min;流水沖去多余染液，干燥后于顯微鏡油鏡下觀察LGL形態(tài)。計數(shù)100個淋巴細胞中LGL數(shù)量，由血常規(guī)淋巴細胞絕對值可計算出LGL絕對值。為保證判斷標準和結(jié)果的一致性，該項檢查由同一位高年資細胞形態(tài)學專業(yè)技師完成。

1.2.3淋巴細胞亞群分析：使用Beckman Coulter XL4流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司)進行外周血淋巴細胞亞群分析，操作步驟嚴格按照儀器及試劑說明書進行。將淋巴細胞可分為總T細胞(CD3+)、CD4+T細胞(CD3+CD4+)、CD8+T細胞(CD3+CD8+)、B細胞(CD3-CD19+)及NK細胞(CD3-、CD16+/CD56+)，記錄各淋巴細胞亞群含量以百分比報告。FACS Lysing紅細胞裂解液，單克隆抗體：CD8-PE/CD4-FITC/CD3-PC5 標記三色熒光素抗體，CD3-FITC/CD(16+56)-PE標記抗體，CD19-ECD均購自美國Beckman Coulter公司。

2 結(jié)果

2.1LGL形態(tài)表現(xiàn) LGL體積較大，直徑為10～15 μm，核呈圓形或腎形，胞質(zhì)量豐富，胞質(zhì)內(nèi)含有大小不等(粗、細或塵樣)、數(shù)量不一的紫紅色嗜天青顆粒。見圖1。

圖1 顯微鏡下4個不同視野范圍的LGL形態(tài)(瑞氏-吉姆薩染色×1000)

2.2軍事演習結(jié)束后第3、90天血細胞及淋巴細胞亞群比較

2.2.1血細胞比較:與軍事演習結(jié)束后第3天比較，軍事演習結(jié)束后第90天2組白細胞、淋巴細胞百分比及絕對值、LGL百分比及絕對值差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與對照組比較，軍事演習結(jié)束后第3、90天，觀察組LGL百分比和絕對值均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；但2組間白細胞、淋巴細胞百分比及絕對值比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組納入者軍事演習結(jié)束后第3、90天血細胞數(shù)值比較

2.2.2淋巴細胞亞群比較:與軍事演習結(jié)束后第3天比較，軍事演習結(jié)束后第90天對照組淋巴細胞亞群各指標差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；觀察組總T細胞、CD8+T細胞減低，CD4+/CD8+比值及B細胞增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與對照組比較，觀察組軍事演習結(jié)束后第3、90天總T細胞、CD8+T細胞升高，CD4+T細胞、CD4+/CD8+比值及B細胞均降低(P<0.01)，但2組NK細胞比較差異統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 2組納入者軍事演習結(jié)束后第3、90天淋巴細胞亞群比較

3 討論

電磁輻射對生物體有致熱效應(yīng)和非致熱效應(yīng)，致熱效應(yīng)可使生物組織升溫，生物分子發(fā)生取向作用,熱作用到一定程度可引起嚴重損傷、變性。非致熱效應(yīng)可影響細胞膜的活動能力,從而影響細胞功能。電磁輻射對機體免疫功能的各個方面都可以造成影響，并且表現(xiàn)出明顯的雙向效應(yīng)，適宜、短期輻射可對免疫功能起到正向的調(diào)節(jié)作用；而短期內(nèi)過量的輻射或一定劑量的長期電磁輻射可抑制機體的免疫功能[7]。

電子對抗部隊作業(yè)官兵在日常訓練和軍事演習時均存在電磁輻射暴露可能；軍事演習接近于實戰(zhàn)環(huán)境，多種軍事裝備同時工作且防護條件及設(shè)施不如營區(qū)日常訓練時完備，導(dǎo)致在軍事演習中強電磁輻射暴露機會高于日常訓練時。本研究對剛剛完成為期1個月軍事演習任務(wù)的電子對抗部隊作業(yè)人員，演習結(jié)束后第3、90天進行血常規(guī)及淋巴細胞檢測，分別代表強了電磁輻射對電子對抗部隊官兵機體的短期和長期影響[8]。本研究結(jié)果顯示，與軍事演習結(jié)束后第3天比較，軍事演習結(jié)束后第90天，2組白細胞、淋巴細胞百分比及絕對值、LGL百分比及絕對值組間比較差異均無統(tǒng)計學意義。說明電磁輻射對電子對抗部隊官兵白細胞及淋巴細胞數(shù)量無顯著影響，與吳瓊等[8]、馬菲等[9]的研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示，軍事演習結(jié)束后第3、90天觀察組LGL百分比及絕對值顯著高于對照組。提示電磁輻射是導(dǎo)致LGL增高的主要因素，且外周血LGL增高不是一過性的，是持續(xù)存在的。

LGL是細胞形態(tài)學上的一種分類，操作人員的主觀判斷對結(jié)果影響較大，為做好LGL計數(shù)的質(zhì)量控制，本研究所有的LGL計數(shù)均由同一名資深細胞形態(tài)學專業(yè)技師完成，從始至終保持同一標準，保證了LGL檢驗結(jié)果的可靠性。本研究將胞質(zhì)中含有嗜天青顆粒但胞質(zhì)量少的直徑<10 μm小淋巴細胞排除在LGL之外[10]；結(jié)果顯示對照組演習結(jié)束后第3天的LGL百分比為(8.34±5.11)%，略低于張蒼新等[11]、鄒紅霞和王金環(huán)[12]分別報道的18～20歲男性人群(9.4±4.2)%及(11.41±5.63)%?？赡芘c所選擇人群的地域、個體差異及操作人員把握標準的尺度差異有關(guān)。

LGL特征是胞質(zhì)中出現(xiàn)多少不等的嗜天青顆粒，顆粒最主要的成分包括穿孔素和顆粒酶B，而穿孔素和顆粒酶B主要存在于細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞中，是殺傷靶細胞的主要效應(yīng)分子[13-14]。文獻報道，LGL包括80%的CD3-的NK細胞和20%CD3+的T細胞[15]；除具體NK細胞效應(yīng)外，還可分泌多種細胞因子參與調(diào)節(jié)T、B淋巴細胞，故一般認為LGL計數(shù)可反映機體自然免疫力的狀況。文獻報道，LGL數(shù)量減少可反映機體非特異免疫力降低；LGL升高意義不明，但可見于細菌或病毒感染、腫瘤、自身免疫性疾病、妊娠高血壓病、大顆粒淋巴細胞白血病等[16-19]。文獻報道，LGL長期升高即LGL計數(shù)>0.5×109/L且維持時間超過6個月并伴有貧血、反復(fù)感染等臨床癥狀需考慮LGLL[20]，其診斷需結(jié)合臨床表現(xiàn)及LGL免疫表型分析和TCR基因重排檢測等指標綜合確定。

淋巴細胞來源于骨髓干細胞，在不同部位分化成熟，包括多種形態(tài)相似而功能不同的細胞。機體的細胞免疫主要由T淋巴細胞介導(dǎo)，而體液免疫由B淋巴細胞介導(dǎo)，NK細胞是非特異性免疫的效應(yīng)細胞。CD3+T細胞數(shù)量及比值變化可直接反映機體免疫功能狀態(tài)[21]。CD4+T細胞能促進B細胞、T細胞和其他免疫細胞的增殖和分化，促進細胞免疫功能。CD8+T細胞包括抑制性T細胞(Ts)和細胞毒性T細胞(Tc)，Ts細胞在細胞免疫過程中主要發(fā)揮負向調(diào)節(jié)作用。當T細胞亞群數(shù)量和功能出現(xiàn)異常時，就會導(dǎo)致免疫紊亂并進一步使機體產(chǎn)生病理變化[22-23]。CD3+、CD4+T細胞及CD4+/CD8+比值降低被認為與機體免疫系統(tǒng)功能減弱有關(guān)，CD8+細胞升高可能抑制機體細胞免疫和體液免疫功能。本研究結(jié)果顯示，與軍事演習結(jié)束后第3天比較，觀察組軍事演習結(jié)束后第90天，總T細胞、CD8+T細胞減低，CD4+/CD8+比值及B細胞值增高。表明強電磁輻射能夠改變電子對抗部隊作業(yè)人員外周血淋巴細胞亞群的構(gòu)成比例，導(dǎo)致機體免疫力下降；脫離強電磁輻射環(huán)境后，機體免疫力得到了部分恢復(fù)。CD4+/CD8+比值及B細胞增高，說明機體在一定范圍內(nèi)具備自我調(diào)節(jié)能力。

綜上所述，對于強電磁輻射作業(yè)人員，在短期內(nèi)當外周血淋巴細胞數(shù)量尚未發(fā)生改變時，LGL數(shù)值及比例顯著增高；同時淋巴細胞亞群發(fā)生變化，導(dǎo)致機體免疫力下降；脫離強電磁輻射環(huán)境一段時間后機體免疫力可得到部分恢復(fù)。因此LGL和淋巴細胞亞群分析具備相對更高的靈敏度，可作為電磁輻射對特種作業(yè)人員影響的動態(tài)觀測指標。關(guān)于強電磁輻射作業(yè)人員的LGL與淋巴細胞亞群之間的對應(yīng)關(guān)系及意義，尚需進一步研究。