王雪芹，陽濤

（1.水產(chǎn)健康養(yǎng)殖四川省重點實驗室，四川 成都 610041；2.通威股份有限公司動物保健研究所，四川 成都 610041）

水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)作為人類動物蛋白質(zhì)的第三大來源，占全球人口蛋白質(zhì)消耗量的17%[1]。太平洋白蝦（Pacific white shrimp）和凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）是對蝦養(yǎng)殖業(yè)最大產(chǎn)量的代表（2019 年，全球產(chǎn)量達(dá)到4.1×106t，價值超過240 億美元）[2]。對蝦作為我國重要的經(jīng)濟(jì)和貿(mào)易出口水產(chǎn)品之一，越來越受到水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的重視。而近年來，隨著養(yǎng)殖水環(huán)境的惡化、養(yǎng)殖密度的提高、感染病原的不斷變異等，對蝦生產(chǎn)正受到多種疾病的威脅，如早期死亡綜合征（EMS）[3]、急性肝胰腺壞死?。ˋHPND）[4]、肝胰腺壞死綜合征（HPNS）[5]、白便綜合征（WFS）[6-7]等，這些疾病累積起來造成了蝦產(chǎn)量毀滅性的下降，其中WFS 危害最為嚴(yán)重，引起廣泛關(guān)注?，F(xiàn)針對WFS 的發(fā)病癥狀、流行特征、危害、病因研究、防治措施等5 個方面進(jìn)行闡述。

1 對蝦白便綜合征的發(fā)病癥狀和流行特點

患WFS 的蝦體主要表現(xiàn)癥狀為：蝦體出現(xiàn)空腸，空胃，肝胰腺腫大，嚴(yán)重者糜爛；對蝦排出體外的糞便細(xì)長呈白色棉線狀，有黏性，浮在水面，長期大量聚集會散發(fā)惡臭。病癥初期，對蝦體表無明顯病變，食欲減退。隨著病情加重，逐漸出現(xiàn)吃料慢甚至不吃料或蝦身瘦弱（殼肉分離），檢查病蝦可看見其腸道不飽滿，出現(xiàn)“斷腸”、空腸現(xiàn)象，肝胰臟開始萎縮、變小，外觀模糊，部分病蝦出現(xiàn)紅須、紅腿、腸道變粗等癥狀，水面漂浮的白便也增多。隨著病情進(jìn)一步發(fā)展，會出現(xiàn)少量病蝦游塘和偷死，此時病蝦生長緩慢，有的體重嚴(yán)重下降，變成“干癟蝦”，患WFS 的蝦塘內(nèi)的對蝦產(chǎn)量低，餌料系數(shù)增高，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖效益[8]。

從養(yǎng)殖實踐來看，WFS 流行于7—9 月高溫期，高溫過后發(fā)病率下降。連續(xù)陰雨天氣發(fā)生率高，連續(xù)陰雨天氣后一個地區(qū)的池塘甚至同時發(fā)病，晴天后病情好轉(zhuǎn)[9]。發(fā)病蝦以規(guī)格在10 g/尾以上的大蝦為主，小規(guī)格蝦也能發(fā)病，最小的一周以內(nèi)的蝦也發(fā)病。鹽度越低的池塘發(fā)病率越高，淡水池塘發(fā)病率最高。底質(zhì)越差發(fā)病率越高，發(fā)生底臭的池塘發(fā)病率最高，可能與對蝦在池塘底部攝食有關(guān)。飼料發(fā)生酸敗或霉變，投喂后更容易發(fā)病。投喂量大增加肝胰臟的消化負(fù)擔(dān)，出現(xiàn)剩料也會在池底腐敗，被蝦攝食后更易引起發(fā)病。藻相失衡，水質(zhì)、水色發(fā)生明顯變化，死亡藻類分解產(chǎn)生大量氨氮、亞硝酸鹽等有毒有害物質(zhì)，對蝦攝食死亡藻類也會引起消化不良甚至導(dǎo)致有毒物質(zhì)損傷肝臟、腸道等消化器官。嚴(yán)重缺氧后也容易發(fā)生WFS，對蝦養(yǎng)殖池塘夜晚出現(xiàn)嚴(yán)重缺氧，即使不發(fā)生對蝦死亡，第二天也容易大量出現(xiàn)白便，并伴隨慢料和爆發(fā)其他疾病的現(xiàn)象。

2 對蝦白便綜合征的危害

對蝦是漁業(yè)貿(mào)易中最重要的水產(chǎn)品之一。不幸的是，疾病的頻繁發(fā)生嚴(yán)重威脅對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。其中，WFS 作為一種新出現(xiàn)的疾病，在世界各地，如印尼、馬來西亞、泰國、印度、越南等地的對蝦養(yǎng)殖區(qū)頻繁發(fā)生[10]，給對蝦養(yǎng)殖場造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)估計，在2010 年，泰國的蝦產(chǎn)量由于WFS 而降低10%～15%[11]，感染W(wǎng)FS 的對蝦養(yǎng)殖病死率比之前未感染的增加10%～12%，且感染W(wǎng)FS的養(yǎng)殖池塘的蝦生長非常緩慢[12]。此外，在夏季，池塘爆發(fā)WFS 的累計病死率可高達(dá)50%[13]。受WFS影響，斯里蘭卡斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖池塘病死率額外增加20%～30%[14]。

在我國，對蝦WFS 早在2009—2010 年華南對蝦土塘中已有發(fā)現(xiàn)[15]。2011 年，WFS 在南方大面積爆發(fā)，廣東、福建等地的蝦塘中一旦出現(xiàn)白便，幾天之后對蝦就會出現(xiàn)空腸、空胃、游塘等現(xiàn)象，隨著病情發(fā)展會出現(xiàn)趴邊偷死現(xiàn)象。2012 年華北地區(qū)也開始出現(xiàn)小面積WFS 爆發(fā)。2012 年WFS 開始肆虐，從廣西到廣東、福建，均不同程度出現(xiàn)且繼續(xù)呈蔓延之勢，其危害性逐年增強(qiáng)。2013、2014 年天津的寶坻、武清、寧河等地大面積爆發(fā)WFS，并造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。2014 年7 月，浙江省蕭山區(qū)一養(yǎng)殖戶淡水養(yǎng)殖的凡納濱對蝦感染W(wǎng)FS，病死率達(dá)到60%～80%。2016 年，我國對蝦養(yǎng)殖區(qū)出現(xiàn)WFS 的蝦塘多得可怕。目前主要報道的WFS 危害最大的養(yǎng)殖品種為凡納濱對蝦和斑節(jié)對蝦[16]。

3 對蝦白便綜合征的病因研究

從現(xiàn)有文獻(xiàn)資料來看，有關(guān)該病病原及其控制藥物等方面眾說紛紜，這也影響了我國對WFS 的控制進(jìn)程。目前對WFS 的病因研究發(fā)現(xiàn)，可能是多種因素綜合作用的結(jié)果，如弧菌感染、EHP 感染、藻毒素、水質(zhì)惡化、霉菌毒素、濫用藥物等[17]。

3.1 肝胰腺和腸道病變

Siriporn 等[11]通過電鏡觀察認(rèn)為，WFS 是腺管上皮微絨毛變形、脫落，聚集后在管腔中形成類似原生簇蟲的蠕蟲狀體，其數(shù)量多，嚴(yán)重時就使對蝦形成白色糞便，并不是餌料消化后形成的正常糞便，但是微絨毛聚集體的成因不明。戚瑞榮等[18]研究患有WFS 的凡納濱對蝦，通過解剖、病理切片和電鏡觀察等技術(shù)更加直觀地展示了患WFS 的凡納濱對蝦的組織病變情況。研究發(fā)現(xiàn)患有WFS 的凡納濱對蝦肝胰腺有不同程度的病變，如腺管萎縮、崩解、壞死、增生、肉芽腫等；腸道嚴(yán)重病變，腸腔空，環(huán)肌兩側(cè)增生大量成纖維細(xì)胞，腸上皮柱狀細(xì)胞脫離基膜，隨著增生細(xì)胞持續(xù)增生變厚，腸上皮被逐步取代，直至完全脫落；腸完全喪失吸收營養(yǎng)物質(zhì)的功能，增生細(xì)胞失去物質(zhì)代謝的基礎(chǔ)，開始在增生細(xì)胞層游離端壞死、脫落，最終脫落至腸腔的腺管細(xì)胞、上皮細(xì)胞、增生細(xì)胞排出體外，即為肉眼可見的白便。WFS 不是單純的產(chǎn)生白色糞便，而是肝胰腺、腸道病變，是一種慢性病，比較難治療。而引起這種腸道病變的刺激因素還不清楚。但在組織學(xué)觀察中發(fā)現(xiàn)某些樣本肝胰腺中有大量菌體，且在治療實踐中，也發(fā)現(xiàn)抗菌藥物對WFS 有較好的治療效果[9]，所以推測是細(xì)菌的某種毒素刺激，引發(fā)凡納濱對蝦上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。

3.2 弧菌感染

很多研究結(jié)果顯示，WFS 與弧菌感染有關(guān)。在2009 年，最初將凡納濱對蝦中新出現(xiàn)的這一暴發(fā)性肝胰腺壞死疾病命名為早期死亡綜合征（EMS），后來稱為急性肝胰腺壞死病（AHPND）。2011 年，AHPND 在越南頻繁發(fā)生，通過對病蝦的研究分離出病原體副溶血弧菌[19]。在2010—2011 年，泰國的疾病爆發(fā)報告中將這種危害極大、頻繁發(fā)生的病害稱為白便綜合征（WFS），主要見于太平洋白蝦[20]。有研究發(fā)現(xiàn)原生動物和弧菌的感染可導(dǎo)致對蝦殼質(zhì)松散、食欲下降、生長遲緩，在池塘中發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖蝦的零星死亡，典型疾病癥狀就是飼養(yǎng)水面上有白色棉線狀的糞便[21]。Somboon 等[13]對12 口養(yǎng)殖凡納濱對蝦的塘口進(jìn)行研究，其中6 口感染W(wǎng)FS，另外6 口未感染，分別取對蝦的肝胰臟和腸道進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，結(jié)果顯示感染W(wǎng)FS 的對蝦所分離的弧菌數(shù)量顯著高于未發(fā)病的健康蝦，經(jīng)鑒定，弧菌種類為：創(chuàng)傷弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌等，僅在2%的樣本蝦中分離出寄生蟲。此外還有多份研究報告顯示，從患病的凡納濱對蝦中分離出的弧菌包括溶藻弧菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌和哈維氏弧菌等[22-24]。

隨著學(xué)者們對急性肝胰腺壞死病（AHPND）研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)患有肝胰腺壞死的對蝦池有時也會出現(xiàn)白便，且組織病理學(xué)結(jié)果顯示W(wǎng)FS 與對蝦的肝胰腺病變、壞死密不可分。劉志軒[25]在患有AHPND 的對蝦病灶中分離得到五株潛在致病菌，通過回歸感染試驗的結(jié)果，根據(jù)科赫法則、發(fā)病癥狀、病理特征等，確定了副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、Vibrio sp.Ex25 是AHPND 的潛在致病原，從而推測白便與弧菌的感染有著密切的關(guān)聯(lián)。

曹海鵬等[26]從患有WFS 的凡納濱對蝦肝胰腺中分離得到霍亂弧菌，并通過回歸試驗進(jìn)而驗證霍亂弧菌是凡納濱對蝦WFS 的病原菌，至于霍亂弧菌引起凡納濱對蝦WFS 的發(fā)病機(jī)理，推測可能是病原菌在對蝦腸道組織中不斷繁殖，在腸道黏膜表面大量黏附，產(chǎn)生毒力因子造成腸黏膜損傷，并進(jìn)一步通過血淋巴循環(huán)至肝胰腺組織，產(chǎn)生毒素?fù)p害作用，而導(dǎo)致肝胰腺腫大、糜爛等病變，最終導(dǎo)致肝胰腺和腸道合成和分泌相關(guān)消化液及消化酶的功能失常，繼而造成蝦體病變、死亡。

3.3 肝腸孢蟲感染

對于WFS 是否是由蝦肝腸孢蟲（EHP）感染引起，在之前的研究中一直備受關(guān)注。Ha 等[27]研究認(rèn)為，越南斑節(jié)對蝦爆發(fā)WFS 的感染病原為EHP。Tang 等[28]對印尼地區(qū)患有WFS 的對蝦肝胰腺和白便進(jìn)行組織學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)白便中堆積了密集的EHP孢子，少量的桿狀細(xì)菌，通過PCR 方法在WFS 污染池中檢測到EHP，但在健康池中并沒有檢測到EHP。這一結(jié)果遭到Tangprasittipap 等[10]的質(zhì)疑，通過對健康蝦飼喂受WFS 感染的對蝦肝胰腺組織或同塘飼養(yǎng)的方式進(jìn)行水平傳播，雖然可以使健康的蝦感染EHP，但是沒有復(fù)制出白便的癥狀。Rajendran等[29]、Raveendra 等[30]經(jīng)過進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在生長緩慢和感染W(wǎng)FS 的對蝦中都能檢測到EHP，EHP 可加重WFS 的病情，但EHP 并不是引起WFS的原因。

3.4 消化系統(tǒng)微生物結(jié)構(gòu)變化

越來越多的研究證明腸道菌群的穩(wěn)定和多樣性對機(jī)體的健康具有重要的作用[31-32]。對健康蝦與WFS 蝦的腸道菌群比較發(fā)現(xiàn)WFS 蝦的腸道微生物種類較少，且存在腸道菌群失調(diào)的現(xiàn)象[33-34]。Hou 等[35]發(fā)現(xiàn)WFS 蝦的腸道細(xì)菌群落較健康蝦的菌群多樣性降低，且腸道更為異質(zhì)化，在患WFS 蝦腸道中，Candidatus Bacilloplasma 和嗜酸乳桿菌高度富集，而副球菌和乳球菌豐度降低，這項研究首次確定了WFS 蝦相對于健康蝦的腸道菌群特征。換言之，這種菌群結(jié)構(gòu)預(yù)示著WFS 蝦的腸道細(xì)菌群落的功能發(fā)生顯著變化。Candidatus Bacilloplasma 和嗜酸乳桿菌的增加，而副球菌和乳球菌不足，可能加劇對蝦白便的形成。Huang 等[36]將健康對蝦和WFS 病蝦的腸道微生物群進(jìn)行對比，也得出類似結(jié)論，WFS病蝦的微生物豐度及多樣性急劇降低，病蝦中豐度較高的是弧菌、Candidatus Bacilloplasma 和氣單胞菌等10 個屬，而健康蝦中富集的是希瓦氏菌、紅桿菌等11 個屬的微生物。

3.5 其他因素

養(yǎng)殖水體中高濃度的有機(jī)物、高密度養(yǎng)殖、高投喂率等都會造成養(yǎng)殖動物機(jī)體負(fù)擔(dān)過重，肝胰腺功能受損，腸道病變，易受病原菌的侵染，而且還會導(dǎo)致養(yǎng)殖水體惡化，有害微生物滋生，養(yǎng)殖環(huán)境變化。投喂因運輸和保存條件不當(dāng)而造成的腐敗變質(zhì)飼料也有可能引發(fā)WFS 的暴發(fā)[9]。

4 對蝦白便綜合征的防治措施

目前，關(guān)于WFS 疾病的相關(guān)防治仍然以“預(yù)防為主、防治結(jié)合”為原則，加強(qiáng)養(yǎng)殖過程管理，提高對蝦生長過程中的自身免疫力，從而達(dá)到預(yù)防WFS和其他疾病的目的。結(jié)合現(xiàn)有的研究資料可知，WFS 的發(fā)生與弧菌和EHP 的感染有密切關(guān)系，患WFS 的病蝦肝胰腺組織存在嚴(yán)重的組織學(xué)病變，因此在養(yǎng)殖和疾病防治過程中，應(yīng)加強(qiáng)對對蝦肝胰腺和腸道的調(diào)理和保護(hù)，輔助建立機(jī)體有益微生物系統(tǒng)，加強(qiáng)對弧菌和EHP 的檢測力度。

4.1 種苗

選擇種質(zhì)優(yōu)良的蝦苗，購進(jìn)之前應(yīng)檢查蝦苗健康狀況，抽樣檢測以保障苗種不帶病菌，尤其是副溶血弧菌、霍亂弧菌、EHP，可使用分子生物學(xué)技術(shù)，如PCR、熒光定量PCR、原位雜交等技術(shù)進(jìn)行檢測，嚴(yán)格把控苗種質(zhì)量。

4.2 水質(zhì)

一方面，實時監(jiān)控水體情況，包括水位、水色、水溫、溶解氧、pH 值、氨氮、亞硝酸鹽含量等，保持水體理化指標(biāo)正常，營養(yǎng)成分保持平衡，優(yōu)化藻相，避免水體富營養(yǎng)化，做好菌藻調(diào)控，避免水質(zhì)惡化和藻毒素等環(huán)境因素的影響，同時，改善底質(zhì)。另一方面，定期進(jìn)行水體內(nèi)病原微生物檢測，尤其是弧菌數(shù)量的檢測，可使用TCBS 弧菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)行弧菌屬菌類培養(yǎng)[37]，當(dāng)檢測弧菌菌落數(shù)＜50 個/mL，才能有效預(yù)防對蝦弧菌病的發(fā)生，可在對蝦養(yǎng)殖過程每5～7 d 檢測一次弧菌數(shù)，根據(jù)弧菌數(shù)的數(shù)量做到提前防治，降低機(jī)體感染疾病的幾率。

4.3 飼料

投喂優(yōu)質(zhì)飼料，不要投喂劣質(zhì)、發(fā)霉變質(zhì)的飼料，避免對蝦攝食殘餌和變質(zhì)飼料而患腸炎。建議陰雨天適當(dāng)喂食，避免食料剩余，這樣既能保護(hù)腸道又能減輕肝胰腺的負(fù)荷，控制白便的發(fā)生幾率。在飼料中使用功能型添加劑，如膽汁酸、免疫多糖、低聚寡糖、益生菌（如乳酸菌、芽孢桿菌、丁酸梭菌等）[38]、抗菌肽等，以提高水產(chǎn)動物的免疫力，調(diào)節(jié)腸道微生物，促進(jìn)有益菌的生長，保護(hù)腸道健康。此外，飼料中添加適當(dāng)比例的中草藥或植物提取物，如地榆、訶子、黃連等，可有效增強(qiáng)機(jī)體抗弧菌感染的能力，提高機(jī)體的存活率，保護(hù)肝胰腺，從而預(yù)防對蝦白便的發(fā)生[39-41]。

4.4 管理

在對蝦養(yǎng)殖過程中，應(yīng)重點關(guān)注養(yǎng)殖環(huán)境、科學(xué)投喂、疾病預(yù)防等方面的科學(xué)管理。保持水體和底質(zhì)環(huán)境清新，注意增氧、改底、調(diào)水、菌藻調(diào)控。定期進(jìn)行水體消毒，科學(xué)投喂?fàn)I養(yǎng)全面的飼料，觀察對蝦攝食和活動情況，觀察糞便，完善養(yǎng)殖配套設(shè)施，適時做好消毒，并避免交叉污染。在拉網(wǎng)、暴雨、臺風(fēng)之前應(yīng)采取防應(yīng)激措施，提高對蝦對環(huán)境突變的適應(yīng)能力。在疾病流行之前，提前使用免疫增強(qiáng)類產(chǎn)品，提高機(jī)體免疫力，降低疾病暴發(fā)的風(fēng)險。

5 結(jié)論

WFS 作為一種新的綜合性疾病，嚴(yán)重危害養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，由于疾病的頻繁暴發(fā)，給世界各地的養(yǎng)殖場帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，因此，需加強(qiáng)對WFS的科研投入力度。結(jié)合現(xiàn)有的研究資料和生產(chǎn)經(jīng)驗，應(yīng)加強(qiáng)對蝦養(yǎng)殖過程中的疾病預(yù)防意識，從苗種、水質(zhì)、飼料等各方面進(jìn)行管控，尤其是注重對蝦腸道的健康管理，增強(qiáng)對蝦生長過程中的自身抗病能力，減少WFS 的發(fā)生。