1 福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院感染病科 （福建 泉州 362000 ）

2 泉州市傳染病院 （福建 泉州 362000）

3 福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 （福建 泉州 362000）

內(nèi)容提要：目的：探討慢性HIV感染者外周血T和B淋巴細(xì)胞上CD160的表達(dá)特征及與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法：采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)81例慢性HIV感染者[33例長(zhǎng)期無(wú)進(jìn)展者（LTN）、25例典型進(jìn)展者（TP）和23例艾滋病者（AIDS）]及35例健康對(duì)照者（NC）的T和B淋巴細(xì)胞上CD160的表達(dá)比例及平均熒光強(qiáng)度，分析其與疾病進(jìn)展的相關(guān)性。結(jié)果：LTN和TP患者及NC組外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T及B淋巴細(xì)胞上CD160的表達(dá)比率和平均熒光強(qiáng)度均明顯低于AIDS患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。HIV感染者B細(xì)胞（r=-0.403，P=0.002）、CD3+T細(xì)胞（r=-0.572，P＜0.001）、CD4+T細(xì)胞（r=-0.564，P＜0.001）及CD8+T細(xì)胞（r=-0.600，P＜0.001）上CD160分子表達(dá)量均與HIV RNA載量呈顯著負(fù)相關(guān)。結(jié)論：AIDS患者中B和T細(xì)胞上CD160分子表達(dá)量明顯增加，與HIV RNA水平呈負(fù)相關(guān)。

獲得性免疫病毒（HIV）慢性感染過(guò)程中常表現(xiàn)為T(mén)淋巴細(xì)胞活化。近期發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞活化與共抑制分子如CTLA-4和PD-1的表達(dá)關(guān)系密切[1,2]。CD160是最近發(fā)現(xiàn)的共抑制分子，在T細(xì)胞活化中發(fā)揮重要的作用，且與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。但CD160分子在慢性病毒感染性疾病，特別是在HIV慢性感染中的研究目前尚鮮有報(bào)道。因此，本研究分析慢性HIV感染者CD160的研究特點(diǎn)及與疾病進(jìn)展的相關(guān)性，以進(jìn)一步闡明HIV慢性感染的發(fā)病機(jī)制。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

收集81例2018年1月23日～2019年7月14日福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院感染科門(mén)診及住院HIV感染者的臨床資料及外周血，其中男性51例，女性30例；33例長(zhǎng)期無(wú)進(jìn)展者（Long-term nonprogressors，LTN）、25例典型進(jìn)展者（Typical progressors，TP）、23例艾滋病患者（Patients with AIDS，AIDS）。根據(jù)文獻(xiàn)[3]，LTN定義為外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)持續(xù)＞500/ul，血清HIV RNA＜50 copies/ml，至少10年無(wú)臨床癥狀；TP為臨床癥狀典型進(jìn)展，CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)持續(xù)＞200/ul，血清HIV RNA＞1000 copies/ml，無(wú)AIDS癥狀；AIDS為有癥狀，外周CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)持續(xù)＜200/ul，血清HIV RNA＞1000 copies/ml，現(xiàn)有或既往有機(jī)會(huì)性感染。所有患者均無(wú)腫瘤或機(jī)會(huì)性感染，未進(jìn)行抗HIV治療，并排除乙、丙肝等嗜肝病毒感染，無(wú)遺傳代謝性肝病、自身免疫性病及失代償期肝病。選取同期35例健康獻(xiàn)血者作為對(duì)照組。

1.2 方法

收集EDTA抗凝外周靜脈血，采用CD3-Percp/Cy5.5、CD4-FITC、CD8-PE、CD19-APC抗體通過(guò)流式細(xì)胞儀（BeckMan Navios，美國(guó)BeckMan公司）檢測(cè)CD3、CD4、CD8、CD19細(xì)胞亞群的比例及絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)（總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)×各細(xì)胞亞群百分比），以上抗體均購(gòu)自美國(guó)BeckMan公司。采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)儀（QuantStudio5，美國(guó)ABI公司）檢測(cè)HIV RNA病毒載量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有分析及作圖均采用GraphPad Prism 8.1（GraphPad Software Inc., San Diego，California，USA）。連續(xù)變量采用中位數(shù)和四分位間距（IQR）表示，分類(lèi)變量以百分比表示。兩組間比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U test和卡方檢驗(yàn)，*P＜0.05。

2.結(jié)果

與NC組相比，HIV感染者男性的比例更高，尤其是AIDS患者男性的比例明顯高于NC。HIV感染者的年齡與NC組無(wú)明顯差異，且AIDS、TP、LTN三組之間均無(wú)明顯差異。但TP、TLN兩組的CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于AIDS組，而HIVRNA載量低于AIDS組。HIV感染者主要是經(jīng)血和性?xún)煞N途徑進(jìn)行傳播，但AIDS、TP、LTN三組之間傳播途徑明顯差異，具體見(jiàn)表1。

表1.研究對(duì)象臨床資料

2.1 CD160在AIDS患者外周血B和T細(xì)胞上高表達(dá)

除TP患者B細(xì)胞上CD160的表達(dá)平均熒光強(qiáng)度稍低于AIDS患者之外，LTN和TP患者及NC組外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T及B淋巴細(xì)胞上CD160的表達(dá)比率和平均熒光強(qiáng)度均明顯低于AIDS患者，具體見(jiàn)圖1。

圖1.AIDS患者外周血B和T細(xì)胞上高表達(dá)CD160。AIDS患者B細(xì)胞（A，E）、CD3+T細(xì)胞（B，F(xiàn)）、CD4+T細(xì)胞（C，G）、CD8+T細(xì)胞（D，H）上CD160的表達(dá)比率和平均熒光強(qiáng)度均明顯升高。

2.2 HIV感染者外周血B和T細(xì)胞上CD160的表達(dá)量與HIV RNA呈負(fù)相關(guān)

HIV感染者外周血HIV RNA載量與B細(xì)胞（r=-0.403，P=0.002）、CD3+T細(xì)胞（r=-0.572，P＜0.001）、CD4+T細(xì)胞（r=-0.564，P＜0.001）及CD8+T細(xì)胞（r=-0.600，P＜0.001）上CD160分子表達(dá)量均呈負(fù)相關(guān)，具體見(jiàn)圖2。

3.討論

目前廣泛使用的高效抗病毒治療法（HAART）能有效控制HIV感染，但其只能抑制活躍的病毒，尚不能完全清除病毒[4]。過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療和抗體治療等免疫療法通過(guò)增強(qiáng)或恢復(fù)HIV感染者免疫功能，抑制HBV復(fù)制或清除HBV感染的細(xì)胞。因此，免疫療法可克服HAART治療耐藥性問(wèn)題，減少服藥次數(shù)，解決了患者依從性等問(wèn)題。近10年來(lái)，免疫治療作為對(duì)HAART的補(bǔ)充進(jìn)展更加迅速，已成為當(dāng)前治療研究的熱點(diǎn)，給艾滋病的治療帶來(lái)了新希望。

HIV感染可使T淋巴細(xì)胞高表達(dá)共抑制性分子，進(jìn)而抑制T淋巴細(xì)胞功能。既往研究提示，慢性HIV感染者T淋巴細(xì)胞免疫功能耗竭與程序性死亡分子-1（PD-1）及其配體（PD-L1）共刺激信號(hào)通路密切相關(guān)[5]。亦有研究表明，細(xì)胞毒T細(xì)胞相關(guān)抗原（CTLA）-4通過(guò)促進(jìn)疾病進(jìn)展，在CD4+、CD8+T細(xì)胞功能耗竭中發(fā)揮重要的作用[6]。CD160是新近發(fā)現(xiàn)的共抑制性分子，主要表達(dá)于B和T細(xì)胞上，其配體為腫瘤壞死因子超家族成員的皰疹病毒侵入受體（HVEM）和主要組織相容性復(fù)合體（MHC）I類(lèi)分子。王陸軍等研究表明慢性HIV-1感染中共抑制分子CD160的升高，可能與CD4+和CD8+T細(xì)胞的功能耗竭有關(guān)，且CD160可能主要對(duì)記憶性CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生影響[7]。本研究結(jié)果表明，在AIDS患者中B和T細(xì)胞上CD160分子表達(dá)量明顯增加，且與HIV RNA水平呈負(fù)相關(guān)，提示CD160促進(jìn)機(jī)體的T細(xì)胞功能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，且可促進(jìn)HIV免疫清除。同時(shí)感染可促進(jìn)CD160的表達(dá)，誘發(fā)免疫應(yīng)答。