黃 璨，楊 莉，劉奠忠

西南醫(yī)科大學(xué)口頜面修復(fù)重建和再生實(shí)驗(yàn)室/西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川瀘州 646000

臨床檢驗(yàn)在疾病的診斷、治療、預(yù)防中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用，血液常規(guī)檢驗(yàn)通常包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)及形態(tài)等相關(guān)參數(shù)分析，是醫(yī)生診斷疾病的常用輔助檢查手段之一[1-2]。隨著血細(xì)胞計(jì)數(shù)自動(dòng)化程度不斷提高，不僅為臨床提供了更可靠的指標(biāo)，同時(shí)也大大提高了工作效率。為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度、可靠性、真實(shí)性，每日室內(nèi)質(zhì)控是必不可少的[3]。《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則CNAS-CL02》要求“實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)計(jì)質(zhì)量控制程序以驗(yàn)證達(dá)到預(yù)期的結(jié)果質(zhì)量”，“同樣的檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)用不同程序或設(shè)備，應(yīng)有確切機(jī)制以驗(yàn)證在整個(gè)臨床適合區(qū)間內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性”，是指通過(guò)開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)控，建立完善的測(cè)評(píng)體系和方法，保障醫(yī)療質(zhì)量安全。Sysmex XS-500i 全自動(dòng)五分類血液分析儀具有全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC)和全血細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(CBC+DIFF)兩種檢測(cè)模式，進(jìn)行血細(xì)胞五分類時(shí)需配套試劑Sysmex MK-CELLPACK血細(xì)胞分析用稀釋液、SYS-4DS血細(xì)胞分類染色液、SYS-SLS血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)┖蚐YS-4DL血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)?。由于CBC+DIFF模式下對(duì)白細(xì)胞五分類所使用的染液價(jià)格比較昂貴，對(duì)于每日室內(nèi)質(zhì)控而言成本較高，因而考慮僅在CBC單純計(jì)數(shù)模式下進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控能否取代CBC+DIFF分類計(jì)數(shù)模式。參照中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》(以下簡(jiǎn)稱《要求》)[4]，本課題采用質(zhì)控品對(duì)以上兩種模式下的全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行差異性分析，驗(yàn)證用CBC模式代替CBC+DIFF模式進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控的可靠性，選擇既能滿足本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控要求，又可以降低檢測(cè)成本的室內(nèi)質(zhì)控方法。

1 資料與方法

1.1儀器與試劑 Sysmex XS-500i全自動(dòng)五分類血液分析儀、血液混勻器、Sysmex MK-CELLPACK血細(xì)胞分析用稀釋液、SYS-4DS血細(xì)胞分類染色液、SYS-SLS血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)?、SYS-4DL血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)?、邁克生物血液學(xué)質(zhì)控品。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)準(zhǔn)備 按廠家使用說(shuō)明對(duì)Sysmex XS-500i全自動(dòng)五分類血液分析儀進(jìn)行日常維護(hù)、保養(yǎng)，確保儀器處于良好狀態(tài)。每日開(kāi)機(jī)后，待儀器自檢完畢后，患者標(biāo)本檢測(cè)前，用兩種不同的計(jì)數(shù)模式進(jìn)行質(zhì)控品檢測(cè)。每日自2～8 ℃冰箱中拿出質(zhì)控品，室溫放置10～15 min后，再置于血液混勻器上，混勻8～10 min后檢測(cè)。

1.2.2分組 在CBC和CBC+DIFF模式下進(jìn)行WBC、RBC、PLT和血紅蛋白(Hb)水平計(jì)算，檢測(cè)3次，取平均值。連續(xù)檢測(cè)20 d(同批號(hào)質(zhì)控品)。

1.2.3試驗(yàn)后質(zhì)控品處理 血液質(zhì)控品檢測(cè)完畢后，用柔軟的布或紙擦拭試管口和蓋子上殘留的液體，減少對(duì)質(zhì)控品質(zhì)量的影響，盡快置于2～8 ℃冰箱內(nèi)。

2 結(jié) 果

2.1WBC檢測(cè)結(jié)果 CBC模式和CBC+DIFF模式下WBC檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。CBC模式WBC為(7.93±0.08)×109/L，CBC+DIFF模式WBC為(8.15±0.12)×109/L，兩種模式WBC檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-13.209，P<0.05)，相對(duì)差異為(2.70±0.90)%<5%，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具有可比性。

圖1 CBC模式和CBC+DIFF模式下WBC檢測(cè)結(jié)果比較

2.2RBC檢測(cè)結(jié)果 CBC模式和CBC+DIFF模式下RBC檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。CBC模式RBC為(5.51±0.08)×1012/L，CBC+DIFF模式RBC為(5.53±0.07)×1012/L，兩種模式RBC檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.377，P>0.05)，相對(duì)差異為(1.10±0.50)%<2%，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具有可比性。

圖2 CBC模式和CBC+DIFF模式下RBC檢測(cè)結(jié)果比較

2.3PLT檢測(cè)結(jié)果 CBC模式和CBC+DIFF模式下PLT檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3。CBC模式PLT為(125.85±6.53)×109/L，CBC+DIFF模式PLT為(126.30±6.93)×109/L，兩種模式PLT檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.374，P>0.05)，相對(duì)差異為(3.60±2.10)%<7%，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具有可比性。

圖3 CBC模式和CBC+DIFF模式下PLT檢測(cè)結(jié)果比較

2.4Hb水平比較 CBC模式和CBC+DIFF模式下Hb水平見(jiàn)圖4。CBC模式Hb水平為(112.35±1.31)g/L，CBC+DIFF模式Hb水平為(112.80±0.89)g/L，兩種模式Hb水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.528，P>0.05)，相對(duì)差異為(1.00±0.70)%<2%，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具有可比性。

圖4 CBC模式和CBC+DIFF模式下Hb水平比較

2.5各種模式s、CV結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)室同批號(hào)質(zhì)控品累計(jì)s、CV及CBC模式和CBC+DIFF模式WBC、RBC、PLT、Hb水平的s、CV結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各種模式s、CV結(jié)果比較

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)室使用的XS-500i全自動(dòng)五分類血液分析儀是Sysmex公司推出的全自動(dòng)五分類血液分析儀XS系列[5]，能利用光檢測(cè)器模塊應(yīng)用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法執(zhí)行血細(xì)胞分析，主要有CBC模式和CBC+DIFF模式。在血細(xì)胞分析中，CBC指的是單純的計(jì)數(shù)模式，DIFF指的是白細(xì)胞分類模式，可將白細(xì)胞分成五分類(中性分葉核粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞)分別計(jì)數(shù)。Sysmex MK-CELLPACK血細(xì)胞分析用稀釋液是一種現(xiàn)成即可使用的稀釋液，用于在電阻抗分析和光電分析法中的血細(xì)胞分析。SYS-4DL血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)┲饕糜跍y(cè)定血液標(biāo)本中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞的比例，同樣在電阻檢測(cè)和光度檢測(cè)中對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行分析。SYS-SLS血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)┰跈z測(cè)過(guò)程中起破壞紅細(xì)胞，檢測(cè)人體Hb的作用。SYS-4DS血細(xì)胞分類染色液價(jià)格昂貴，主要用于CBC+DIFF模式中對(duì)血液標(biāo)本的淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行差別染色。在抽吸標(biāo)本后，一部分全血標(biāo)本被SYS-4DL血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)┫♂尩?∶50，然后再被添加SYS-4DS血細(xì)胞分類染色液著色，在一段預(yù)定的相應(yīng)時(shí)間后，已著色的標(biāo)本被送至檢測(cè)器，進(jìn)行前向散射光(FSC)和側(cè)向熒光(SFL)強(qiáng)度檢測(cè)，最后完成5種白細(xì)胞的計(jì)數(shù)和百分比計(jì)算。

CBC模式和CBC+DIFF模式WBC檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-13.209，P<0.05)，分析其原因可能是由于兩種模式的WBC原理不同，CBC計(jì)數(shù)模式主要采用流式細(xì)胞術(shù)和光散射血細(xì)胞檢測(cè)原理[6-9]，即利用流式細(xì)胞術(shù)，單個(gè)細(xì)胞隨著流體動(dòng)力聚集的鞘流液通過(guò)激光照射的檢測(cè)區(qū)時(shí)，使光束發(fā)生折射、衍射和散射，散射光由光檢測(cè)器接收后產(chǎn)生脈沖，脈沖的大小與被檢細(xì)胞的大小呈正比，脈沖的數(shù)量則代表被檢細(xì)胞的數(shù)量，也就是說(shuō)，CBC模式主要通過(guò)細(xì)胞的大小來(lái)計(jì)數(shù)白細(xì)胞；而CBC+DIFF模式則主要采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)合核酸熒光染色原理[6-9]，即先用配套染色液對(duì)有核細(xì)胞進(jìn)行染色，將染色后的標(biāo)本導(dǎo)入鞘流式檢測(cè)系統(tǒng)，被檢細(xì)胞經(jīng)半導(dǎo)體激光照射后產(chǎn)生3種信號(hào)，其中FSC信號(hào)可反映細(xì)胞體積大?。籗SC信號(hào)可反映細(xì)胞核的分葉、胞漿顆粒大小、數(shù)量、分布均勻程度等信息；SFL強(qiáng)度信號(hào)可反映細(xì)胞內(nèi)脫氧核糖核酸水平。通過(guò)檢測(cè)分析FSC、SSC和SFL 3種信號(hào)，可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞種類的鑒別。簡(jiǎn)而言之，CBC+DIFF模式主要以增加SFL強(qiáng)度信號(hào)來(lái)識(shí)別細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，從而更加精確計(jì)數(shù)。從以上分析可知，通過(guò)細(xì)胞大小來(lái)計(jì)數(shù)的CBC模式與通過(guò)識(shí)別細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)來(lái)計(jì)數(shù)的CBC+DIFF模式，最終得到的WBC結(jié)果理論上有一定差異。

CBC模式和CBC+DIFF模式RBC和PLT檢測(cè)結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。XS-500i全自動(dòng)五分類血液分析儀的紅細(xì)胞和血小板檢測(cè)在RBC/PLT通道中進(jìn)行，原理為鞘流電阻抗法[10-11]，即血液標(biāo)本稀釋后分配到紅細(xì)胞/血小板檢測(cè)器內(nèi)，細(xì)胞通過(guò)前鞘流檢測(cè)小孔時(shí)，產(chǎn)生一個(gè)電阻信號(hào)，儀器將這個(gè)電阻信號(hào)轉(zhuǎn)化為脈沖信號(hào)記錄下來(lái)，脈沖的高度反映了細(xì)胞的大小，每個(gè)脈沖信號(hào)代表一個(gè)細(xì)胞，通過(guò)收集整理大量細(xì)胞的脈沖信號(hào)，最終得到紅細(xì)胞和血小板的直方圖。由此可見(jiàn)，無(wú)論CBC模式還是CBC+DIFF模式，均不影響RBC和PLT檢測(cè)結(jié)果，二者檢測(cè)結(jié)果是一致的。CBC模式和CBC+DIFF模式Hb水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.528，P>0.05)。XS-500i全自動(dòng)五分類血液分析儀的Hb水平檢測(cè)原理為SLS-Hb檢測(cè)法，即表面活性劑先將紅細(xì)胞溶解，釋放出Hb分子，Hb分子中的Fe2+被氧化為Fe3+，同時(shí)SLS的親水端與Fe3+結(jié)合形成穩(wěn)定的SLS-Hb有色基團(tuán)，在535 nm有最大吸收峰。因此，無(wú)論CBC模式還是CBC+DIFF模式，均不會(huì)影響Hb檢測(cè)水平，二者結(jié)果是一致的。

《要求》中對(duì)同一臺(tái)血液分析儀不同模式的結(jié)果做出了可比性要求，其中規(guī)定WBC檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)差異應(yīng)小于或等于5%，RBC檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)差異應(yīng)小于或等于2%，PLT檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)差異應(yīng)小于或等于7%，Hb檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)差異應(yīng)小于或等于2%[6]?？杀刃允鞘褂貌煌臋z測(cè)程序檢測(cè)某種分析物獲得的檢測(cè)結(jié)果間的一致性，結(jié)果間的差異不超過(guò)規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可認(rèn)為結(jié)果具有可比性。因此，能否用CBC模式代替CBC+DIFF模式做室內(nèi)質(zhì)控，關(guān)鍵在于驗(yàn)證CBC模式的結(jié)果與CBC+DIFF模式的結(jié)果之間的可比性[12]。本實(shí)驗(yàn)采用質(zhì)控品作為標(biāo)本，參照《要求》，20組數(shù)據(jù)WBC的相對(duì)差異為(2.70±0.90)%，RBC的相對(duì)差異為(1.10±0.50)%，PLT的相對(duì)差異為(3.60±2.10)%，Hb水平的相對(duì)差異為(1.00±0.70)%，均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，可認(rèn)為結(jié)果具有可比性，也就是說(shuō)，CBC模式下的WBC、RBC、PLT和Hb檢測(cè)結(jié)果與CBC+DIFF模式是一致的。

四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的血液質(zhì)控品的血液學(xué)參數(shù)較穩(wěn)定，批內(nèi)精密度較好，2～8 ℃保存穩(wěn)定性達(dá)6個(gè)月以上[13]。CBC模式下質(zhì)控品RBC、PLT和Hb檢測(cè)結(jié)果與CBC+DIFF模式無(wú)差異，WBC雖然與CBC+DIFF模式有差異，但相對(duì)差異不超過(guò)規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)，符合《要求》。由于CBC+DIFF模式對(duì)白細(xì)胞分類所使用的是SYS-4DS血細(xì)胞分類染色液，其價(jià)格昂貴，長(zhǎng)期使用會(huì)大大增加質(zhì)控成本。加之目前無(wú)論是各大廠家的質(zhì)控品所提供的靶值，還是瀘州市及省質(zhì)控要求，均只要求了WBC、RBC、Hb、PLT等相關(guān)參數(shù)，未對(duì)白細(xì)胞分類做出要求。另外，室內(nèi)質(zhì)控品、使用方法、質(zhì)控規(guī)則等是否合適取決于是否能監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，如兩種模式下的s、CV、失控率及操作的便捷性等進(jìn)行比較。表1為本研究CBC模式、CBC+DIFF模式及本實(shí)驗(yàn)室同批號(hào)質(zhì)控品累計(jì)s、CV結(jié)果，可以進(jìn)行簡(jiǎn)單的分析，認(rèn)為CBC模式下質(zhì)控具有可行性。當(dāng)然，隨著累計(jì)標(biāo)本數(shù)量增加，將更全面地討論此方案的可行性[14-15]。

因此，在本實(shí)驗(yàn)室全血細(xì)胞分析儀室內(nèi)質(zhì)控工作中，結(jié)合實(shí)際情況，為降低室內(nèi)質(zhì)控成本，可考慮用CBC模式代替CBC+DIFF模式，建立適合本實(shí)驗(yàn)室的個(gè)性化質(zhì)控方案。