楊自凱 謝長順 鄭繼堯 徐歡 邵夢真 鄭岳

結(jié)直腸癌(CRC)是胃腸道中常見的惡性腫瘤，已成為世界上第四大致命的惡性腫瘤，每年有近90萬人死于該病[1]。其早期癥狀不明顯，超過75%的患者確診時已處于中晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，綜合治療難以取得滿意的療效[2]。因此，確定一種代表性的分子標(biāo)志物及治療靶標(biāo)，對結(jié)直腸癌早期診斷及治療具有重要的意義。高爾基磷酸化蛋白3(Golgi phosphoprotein 3，GOLPH3)是一種新的癌基因，可激活絲/蘇氨酸蛋白激酶(AKT)，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，在高爾基體運輸中起決定性作用[3-5]。先前臨床研究已證實，GOLPH3與很多腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[6]。有多項研究表明GOLPH3的高表達(dá)與結(jié)直腸癌的癌變、臨床病理特征密切相關(guān)[7-13]。因此，如果將GOLPH3作為判斷結(jié)直腸癌的臨床病理特征的檢測指標(biāo)則具有極大的實用性。目前已發(fā)表的研究中結(jié)直腸癌患者的臨床特征與GOLPH3的表達(dá)之間的相關(guān)性仍然是有爭議的。因此，本研究運用Meta分析的方法，了解GOLPH3水平與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的相關(guān)性，為臨床實踐提供循證醫(yī)學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 文 獻(xiàn) 檢 索 在PubMed、Web of Science、Medline、萬方數(shù)據(jù)庫和CNKI中進(jìn)行了系統(tǒng)的綜合文獻(xiàn)檢索，篩選了GOPLH3表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征關(guān)系的研究。檢索時間從創(chuàng)建數(shù)據(jù)庫之日截止到2020年5月。醫(yī)學(xué)主題詞(MeSH)和文獻(xiàn)檢索中檢索詞如下：(“Golgi phosphoprotein 3”or“GPP34 protein”or“GOLPH3”)、(“colorectal cancer”or“colorectal tumor”or“colorectal carcinoma”or“CRC”or“colon cancer”or“rectal cancer”)以及對應(yīng)的中文檢索詞。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn) 由病理確診為結(jié)直腸癌；有臨床病理或組織學(xué)數(shù)據(jù)；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測GOLPH3表達(dá)；在放療、化療和其他治療前采集腫瘤組織；文獻(xiàn)出版語言僅限于中文和英文并可查看全文。

1.3 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn) 存在重復(fù)數(shù)據(jù)的文章；病例報道、綜述、會議摘要；動物試驗；無法獲取所需要的生存資料。

1.4 數(shù)據(jù)提取及質(zhì)量評價 兩名獨立的研究人員按照設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)從研究中提取數(shù)據(jù)，包括：發(fā)表年份、作者、GOLPH3的評估方法、患者人數(shù)、病例數(shù)目、性別、年齡和大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[14-15]。質(zhì)量評估由另外兩位研究人員獨立進(jìn)行，使用紐卡斯?fàn)?渥太華量表(NOS)來評估納入文獻(xiàn)的質(zhì)量?？偡譃?分，文章評分在1～3分、4～6分、7～9分的分別被定義為低、中等或高質(zhì)量的文章。本分析納入的7篇文獻(xiàn)中，中等質(zhì)量文獻(xiàn)2篇，高質(zhì)量文獻(xiàn)5篇。1.5 數(shù)據(jù)分析 我們計算了納入文獻(xiàn)中的OR和95%CI。采用隨機效應(yīng)和固定效應(yīng)模型分析兩種方法對異質(zhì)性進(jìn)行了分析。有統(tǒng)計學(xué)意義的異質(zhì)性定義為卡方檢驗P＜0.1或I2＞50%[16]。假如觀察到異質(zhì)性，我們利用隨機效應(yīng)模型來減少異質(zhì)性對結(jié)果的影響，反之則使用固定效果模型[17]。使用Egger's檢驗用于評估發(fā)表偏倚[18]。使用STATA 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 納入研究的特點 納入文獻(xiàn)的基本特征見表1，文獻(xiàn)篩選流程見圖1。納入文獻(xiàn)均于2014—2018年間在亞洲發(fā)表，樣本量在40～148[7-13]；中位隨訪時間為36～67個月。所有研究均為回顧性研究，55%～62.22%的患者為男性。每項研究分?jǐn)?shù)均為NOS量表評分得出，分?jǐn)?shù)都大于6分。

表1 納入文獻(xiàn)的基本特征

圖1 文獻(xiàn)檢索流程圖

2.2 Meta分析

2.2.1 腫瘤、結(jié)直腸組織和正常組織中GOLPH3的表達(dá) 共6篇文獻(xiàn)[7-9，11-13]報道了GOLPH3在結(jié)直腸癌組織和正常組織中的表達(dá)。根據(jù)隨機效應(yīng)模型分析，總OR為3.15(95%CI＝2.28～4.35%，P＜0.001)。排除異質(zhì)性相關(guān)研究后，總OR值為5.25(95%CI＝3.60～7.64，P＜0.1)。這些結(jié)果表明，GOLPH3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平顯著提高。

2.2.2 GOLPH3表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 從腫瘤不同臨床階段、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、性別、年齡、腫瘤大小幾個方面分析GOLPH3表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系，見圖2。由于在不同臨床階段、腫瘤分化和腫瘤大小中存在分歧結(jié)果以及只納入晚期結(jié)直腸癌患者的研究，有顯著的異質(zhì)性。在排除這幾項研究后得出結(jié)論：GOLPH3高表達(dá)與腫瘤不同臨床階段(OR＝3.03，95%CI＝2.04～4.50，P＜0.1)、腫瘤分化(OR＝0.70，95%CI＝0.44～1.10，P＝0.121)有顯著相關(guān)性，與腫瘤大小無相關(guān)性(OR＝1.20，95%CI＝0.76～1.90，P＝0.442)。在GOLPH3與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、性別、年齡相關(guān)性分析中，觀察到顯著的異質(zhì)性，為了明確異質(zhì)性來源，按照樣本量大小、年齡界限進(jìn)行亞組分析，亞組分析結(jié)果表明，樣本量≥100(OR＝0.25，95%CI＝0.14～0.43，P＜0.1)。樣本量＜100(OR＝3.90，95%CI＝2.42～6.30，P＜0.1)，GOPLH3表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學(xué)意義。GOLPH3的表達(dá)與性別相關(guān)具有高異質(zhì)性，在按照樣本分層的亞組分析中得出結(jié)論，GOLPH3的高表達(dá)與性別無關(guān)(OR＝1.112，95%CI＝0.777～1.592，P＝0.561，I2＝0%)。年齡＝60(OR＝0.924，95CI＝0.599～1.426，P＝0.772)，年齡＝65(OR＝0.731，95%CI＝0.382～1.40，P＝0.345)，GOLPH3表達(dá)與性別和年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖2 GOLPH3表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征關(guān)系研究的森林圖

2.2.3 敏感性分析和發(fā)表偏倚 為了檢查OS分析中合并HR的穩(wěn)定性，我們進(jìn)行了敏感性分析。結(jié)果表明，排除任何單獨的研究并不能改變總體結(jié)果，本分析所得出的結(jié)論是可靠的。我們使用Egger's分析來檢測發(fā)表偏倚，在該Meta分析中未觀察到任何發(fā)表偏倚，見圖3。

圖3 GOLPH3表達(dá)與OS關(guān)系的(A)偏倚及(B)敏感度分析圖

續(xù)圖3 GOLPH3表達(dá)與OS關(guān)系的(A)偏倚及(B)敏感度分析圖

3 討論

結(jié)直腸癌的發(fā)生是基因和環(huán)境相互作用后產(chǎn)生的結(jié)果，原癌基因的激活被認(rèn)為是促發(fā)結(jié)直腸癌的關(guān)鍵機制。在惡性腫瘤的增生過程中，某些原癌基因的激活或抑癌基因的失活導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞中特定蛋白的異常表達(dá)[19]，因此，探索特定蛋白在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中表達(dá)變化，對于腫瘤的診斷意義重大。

GOLPH3基因是一種分子量約為34 kD的高爾基體復(fù)合物相關(guān)蛋白，最初是通過高爾基體的蛋白質(zhì)組學(xué)表征鑒定的，主要發(fā)揮蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運作用。是高爾基體中一種高度保守的蛋白質(zhì)和磷脂酰肌醇-4單磷酸酯(PI4P)的效應(yīng)物[20]。GOLPH3相對應(yīng)的編碼基因位于第5p13號染色體，是腫瘤中一個頻繁擴增的區(qū)域[21-22]。在細(xì)胞分裂、線粒體質(zhì)量和DNA損傷中起著重要的作用。另外，Scott等人還發(fā)現(xiàn)，GOLPH3激活了雷帕霉素的哺乳動物靶標(biāo)mTOR途徑[23]。GOLPH3過表達(dá)時細(xì)胞內(nèi)mTOR信號通路的兩個關(guān)鍵蛋白核糖體S6K蛋白激酶和蛋白激酶B明顯升高，PI3K/Akt/mTOR信號通路的異常活躍在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，所以GOLPH3對mTOR信號通路的調(diào)節(jié)作用尤為重要[5]?？稍鰪姳砥どL因子(EGF)，進(jìn)一步加速蛋白合成，促進(jìn)細(xì)胞分裂增生。這對于調(diào)節(jié)生長和細(xì)胞增生非常重要。

盡管我們努力進(jìn)行全面而精確的Meta分析，但必須承認(rèn)其存在局限性，所納入的研究均為回顧性研究，樣本量有限且只限于亞洲，可能導(dǎo)致潛在的選擇偏倚。其次，在納入的研究中使用了不同的GOLPH3表達(dá)臨界值，可能對結(jié)果也有一定影響。盡管存在一些不可避免的缺陷，但本Meta分析的結(jié)論還是有意義的。

綜上所述，GOLPH3的高表達(dá)與結(jié)直腸癌組織臨床分期、腫瘤分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能促進(jìn)結(jié)直腸細(xì)胞的癌變及癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。因此我們推測，GOLPH3有可能成為預(yù)測臨床中結(jié)直腸癌早期癌變的根據(jù)。