白東東，李新圃，楊 峰，羅金印，王旭榮，張 行，李宏勝

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050)

奶牛乳房炎是奶牛場最常見的內(nèi)科病之一，往往由環(huán)境、自身機(jī)體和病原菌三方面因素綜合導(dǎo)致，它不僅可以使牛奶產(chǎn)量、質(zhì)量下降[1]，治療成本提高[2]，還可以導(dǎo)致患病奶牛的死亡[3]。目前奶牛場對(duì)于奶牛乳房炎的治療方法仍以抗生素為主，但其因耐藥性的問題受到了一定的限制。中獸藥與抗生素相比，因其毒性低、殘留量少、療效確切等已成為國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)[4-5]。

乳黃消口服液是蘭州畜牧與獸藥研究所奶牛疾病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)研制的專用于治療熱毒壅盛型奶牛乳房炎的一種新型中獸藥，在前期的藥效學(xué)試驗(yàn)中已經(jīng)證明其具有滋陰瀉火、消腫止痛和扶正祛邪的功效，故本試驗(yàn)觀察該藥物對(duì)奶牛乳房炎的臨床療效，為后期正式臨床試驗(yàn)提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥藥液 乳黃消口服液由知母、丹參、連翹等10味藥組成，其藥材均購自蘭州市黃河藥材市場。取藥材共5 kg，第1次加入4 L自來水，煎煮2 h， 過濾后藥渣再加入3 L自來水，煎煮1 h，過濾后藥渣再加3 L自來水，煎煮1 h，紗布過濾后3次濾液合并，將其濃縮至1 g/mL。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 正在泌乳期的健康奶牛和患有臨床型奶牛乳房炎的奶牛，由甘肅省荷斯坦奶牛繁育中心提供。

1.1.3 儀器與設(shè)備 BC-2800vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；XL-640全自動(dòng)生化分析儀，購自Erba公司；J6-HC高速冷凍離心機(jī)，購自Backman公司；生化試劑盒，購自美康生物科技股份有限公司；Fossomatic 7，購自FOSS公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋，購自常州智博瑞儀器制造有限公司；公英散，購自河北寶典藥業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物的選擇 納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡3～9歲，2～8胎次，處于泌乳期的奶牛，無傳染病史，產(chǎn)前、產(chǎn)后無并發(fā)癥，無全身癥狀，乳汁中有絮狀物，顏色微黃或黃，乳房腫大或無，體溫不超過40 ℃；排除標(biāo)準(zhǔn)：不在泌乳期的奶牛，或在泌乳期患有子宮內(nèi)膜炎、胎衣不下、急性產(chǎn)后腹瀉、蹄病、急性乳房炎、慢性乳房炎、隱性乳房炎等疾病和體溫超過40 ℃的奶牛排除；剔除標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)期間，對(duì)受試奶牛進(jìn)行抗炎或抗生素治療措施、做過真胃移位手術(shù)或發(fā)生過蹄病以及意外死亡淘汰等情況，其試驗(yàn)結(jié)果均排除在外。

1.2.2 動(dòng)物的分組 將納入試驗(yàn)的40頭患病奶牛隨機(jī)分為4組，每組10頭，即乳黃消口服液高劑量組(1 500 mL/頭)、中劑量組(1 000 mL/頭)、低劑量組(500 mL/頭)和對(duì)照藥物組(公英散)，健康組奶牛10頭。

1.2.3 檢測指標(biāo) 一般觀察：試驗(yàn)期間，每天下午觀察各組奶牛的精神狀態(tài)，采食飲水情況，乳房腫脹情況以及乳汁顏色。血常規(guī)檢測：各組奶牛在治療前、后尾靜脈采血，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞(White blood cell，WBC)、紅細(xì)胞(Red blood cell，RBC)、血紅蛋白(Hemoglobin，HGB)、紅細(xì)胞壓積(Red blood cell specific volume,HCT)和血小板(Blood platelet,PLT)等含量。血生化指標(biāo)檢測：尾靜脈采血后，靜置離心分離血清，測定其血清中總膽紅素(Total bilirubin,TBIL)、白蛋白(Albumin,ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alkaline aminotransferase，ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatise,ALP)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(Creatine kinase,CK)、尿素(UREA)和肌酐(Creatinine，CRE)。

乳汁中體細(xì)胞檢測方法：首先在測定乳汁中體細(xì)胞前先將樣品放置于39～42 ℃的水浴鍋10～15 min(不可放置太久或重復(fù)加熱)，顛倒幾次樣品使之混合均勻(切勿劇烈晃動(dòng))，然后將樣品放置到Fossomatic 7傳送帶上攪拌器右側(cè)，樣品的處理確保是以相同方式進(jìn)行，點(diǎn)擊開始測定，收集數(shù)據(jù)。

1.2.4 臨床療效判斷 有效：治療后，患牛乳房紅腫、硬結(jié)和熱脹感明顯減輕，乳汁水樣或絮狀沉淀減少或消失，奶產(chǎn)量有所增加；治愈：治療后，患牛乳房紅腫、硬結(jié)、熱感消失，奶樣外觀、采食量、奶產(chǎn)量和精神恢復(fù)正常；無效：治療后，患牛乳房臨床癥狀未改善或情況惡化，放棄本中藥治療而用其他方法治療。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SPSS 20.0軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 乳黃消口服液臨床診療效果統(tǒng)計(jì) 對(duì)受試奶牛的臨床具體情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，經(jīng)統(tǒng)計(jì)觀察，納入的受試奶牛均未剔除，即受試奶牛的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均可靠。從表1可以得出，乳黃消口服液高、中、低劑量組對(duì)奶牛乳房炎治愈率分別為70%、90%和60%，對(duì)照藥物組治愈率為50%。

表1 乳黃消口服液和公英散治療臨床型奶牛乳房炎臨床效果統(tǒng)計(jì)Table 1 Statistics on the clinical effects of Ruhuangxiao oral liquid and Gongyingsan in the treatment of clinical bovine mastitis

2.2 給藥后患病奶牛血液生理指標(biāo)的變化 對(duì)患病奶牛連續(xù)治療3～5 d后，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，乳黃消口服液高、中、低劑量組和對(duì)照藥物組的血液生理指標(biāo)與健康組相比差異均不顯著(P>0.05)，見表2。說明乳黃消口服液對(duì)受試奶牛的血液生理指標(biāo)無影響。

表2 給藥前后奶牛血液生理指標(biāo)參數(shù)Table 2 Blood physiological indexes of cows before and after administration

2.3 給藥后患病奶牛血液生化指標(biāo)的變化 對(duì)患有乳房炎的奶牛連續(xù)治療3～5 d后，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，與健康組相比，乳黃消口服液高、中、低劑量組和對(duì)照藥物組的血液生化指標(biāo)差異均不顯著(P>0.05)，見表3。說明乳黃消口服液對(duì)受試奶牛的血液生化指標(biāo)無影響。

表3 給藥前后奶牛血液生化指標(biāo)Table 3 Blood biochemical indexes of cows before and after administration

2.4 治療后患病奶牛乳汁體細(xì)胞的變化 對(duì)各組奶牛在治療前、治愈后和治療第30天采集奶樣，測得其乳汁中的體細(xì)胞數(shù)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，治療前患病奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)和健康組奶牛乳汁中的體細(xì)胞相比差異極顯著(P<0.01)，雖然治療后體細(xì)胞數(shù)明顯下降，但仍與健康組乳汁的體細(xì)胞差異極顯著(P<0.01)，在治療的第30天，各組患病奶牛乳汁中體細(xì)胞數(shù)與健康組相比差異不顯著(P>0.05)，且均降至20萬/mL以下。見表4。

表4 治療前后各組奶牛乳汁體細(xì)胞的變化Table 4 Changes of milk somatic cells in each group before and after treatment

3 討論

3.1 乳黃消口服液對(duì)奶牛乳房炎的臨床治療效果 奶牛乳房炎常因畜體津液不足，陰虛火旺，而出現(xiàn)乳汁變黃、口干舌紅、尿赤糞干、脈洪大等臨床表現(xiàn)，故應(yīng)滋陰瀉火、消腫止痛，乳黃消口服液中以知母為君藥，其性寒，滋陰瀉火；臣以銀花、連翹等清熱解毒、疏風(fēng)解表，以助知母清熱瀉火之功；佐以丹參等，活血止痛、消腫生??；久熱繞于心，則神志不清，故加遠(yuǎn)志以安神，諸藥合用，可其滋陰瀉火、消腫止痛的作用。現(xiàn)代藥理學(xué)研究，知母具有抗抑郁[6]、抗炎[7-8]、增強(qiáng)免疫力[9]、改善高血糖[10]、糖尿病[11]等作用，金銀花具有保肝減肥[12]、驅(qū)蚊蟲[13]、抗高尿酸血癥[14]、抗炎、抗氧化[15-16]和調(diào)節(jié)免疫[17]等的功能，連翹具有抗炎[18]、抗菌[19]、增強(qiáng)免疫[20]等藥理作用。綜上所述，從現(xiàn)代藥理學(xué)研究角度看，乳黃消口服液中的主藥有一定的抗炎、抗菌和提高免疫力的作用，這與奶牛乳房炎的致病原因密切相關(guān)，故可在臨床取得很好的療效。從治療效果來看，因各組未治愈的奶牛臨床癥狀均無好轉(zhuǎn)，故只有用治愈率來表示臨床療效，其中乳黃消口服液高、中、低劑量組和對(duì)照藥物組的治愈率分別為70%、90%、60%和50%。說明乳黃消口服液中劑量組治療奶牛乳房炎效果最好，且各劑量組對(duì)奶牛乳房炎療效均好于對(duì)照藥物組，其中對(duì)照藥公英散治療效果與于瑞影[21]報(bào)道的治愈率97.5%有一定差距，推測可能與生產(chǎn)廠家、給藥時(shí)間、季節(jié)以及奶牛自身狀態(tài)有關(guān)。

3.2 乳黃消口服液對(duì)奶牛乳房炎血液生理生化指標(biāo)的影響 乳房炎是奶牛乳房發(fā)生的炎癥，而炎癥必然會(huì)導(dǎo)致機(jī)體組織局部的紅、腫、熱、痛和機(jī)能障礙，表現(xiàn)為乳產(chǎn)量的下降、乳汁顏色變黃、產(chǎn)生絮狀物、乳房局部的腫脹。為了觀察納入奶牛是否已經(jīng)產(chǎn)生全身癥狀或已經(jīng)引起全身癥狀而乳黃消口服液對(duì)其產(chǎn)生影響，以及藥物是否對(duì)其肝腎功能產(chǎn)生影響，故測定治療前、后各組奶牛的血液生理生化指標(biāo)。從結(jié)果來看，患病奶牛均未出現(xiàn)全身癥狀，且給藥治療后WBC、RBC、PLT、ALB、ALT、AST、LDH、ALP、CK和CRE等與健康組無顯著性差異(P>0.05)，同時(shí)表明乳黃消口服液不會(huì)影響奶牛的健康。

3.3 乳黃消口服液對(duì)患病奶牛乳汁中體細(xì)胞的影響 近年來，許多國家均已將奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)作為奶牛乳房健康的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[22-24]。從給藥前、后奶牛乳汁體細(xì)胞統(tǒng)計(jì)的結(jié)果來看，給藥前患病奶牛的體細(xì)胞數(shù)與健康組差異極顯著(P<0.01)，給藥后患病奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)與健康組相比差異仍極顯著(P<0.01)，但比治療前有所降低，給藥治療第30天，患病奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)與健康組相比差異不顯著(P>0.05)，且均低于20萬/mL。說明乳黃消口服液對(duì)患病奶牛給藥治療3～5 d后，體細(xì)胞數(shù)會(huì)降低，但不會(huì)直接降至20萬/mL，需要一定的時(shí)間來修復(fù)乳腺損傷。