李健，王超，賈旺，丁家寶，梁華剛，高鯤，賈瑞

(1.秦皇島市第一醫(yī)院胸外科；2.秦皇島市婦幼保健院麻醉科，河北 秦皇島 066000)

近年來，肺癌的患病率呈升高趨勢，其中約80%為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)即已進(jìn)展至中晚期，治療后5年生存率在惡性腫瘤中最低，3年生存率也處于較低水平，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[1-2]。盡早診斷，能為臨床治療提供更好的機(jī)遇，延長患者的生存時間。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)為目前特異性最強(qiáng)的促血管生長因子，其陽性表達(dá)率水平與患者預(yù)后密切相關(guān)；核增殖抗原(Ki-67)為一種常見的細(xì)胞增殖標(biāo)記物，在NSCLC肺組織中的表達(dá)顯著。本研究旨在探討VEGF、Ki-67在NSCLC中的表達(dá)及其臨床意義，為臨床早期診斷及預(yù)后判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月至2019年12月秦皇島市第一醫(yī)院就診的150例NSCLC患者作為研究對象，其中男性95例，女性55例；年齡44～75歲，平均(60.21±6.35)歲；鱗癌64例，腺癌86例。將患者分為死亡組(n=38)和存活組(n=112)，并取每例患者癌組織及癌旁組織各1份。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)確診為NSCLC[3]；(2)臨床資料完整；(3)術(shù)前未接受放療或化療治療；(4)患者或家屬對本研究方案知情、同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)NSCLC以外的其他類型的肺部惡性腫瘤患者；(2)合并其他種類的癌癥者。本研究經(jīng)院倫理委員會審查批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 VEGF及Ki-67水平檢測 采用SP法，SP試劑盒、鼠抗人VEGF及Ki-67單克隆抗體均購于上海哈靈生物科技有限公司，操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。一抗由PBS液替代，作為陰性對照，已知的惡性腫瘤VEGF陽性切片為陽性對照。

1.2.2 結(jié)果判定 (1)VEGF表達(dá)情況采用半定量計分法判定。陽性著色評分：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色3分；陽性細(xì)胞所占比例評分：≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；陽性著色評分×陽性細(xì)胞所占比例≥4分為陽性，<4分為陰性。(2)Ki-67表達(dá)情況采用核染色法判定。400×顯微鏡下，隨機(jī)抽取5個視野，對Ki-67陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行計數(shù)，核著色細(xì)胞≥10%為陽性，<10%為陰性。見圖1和圖2。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)存活組與死亡組癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率；(2)癌組織與癌旁組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率；(3)VEGF和Ki-67的陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系；(4)VEGF與Ki-67陽性表達(dá)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)分析分析與處理。計數(shù)資料以[n(%)]表示，行χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearman或Logistic回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 死亡組與存活組患者癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率比較

死亡組患者癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率高于存活組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 死亡組與存活組患者癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率比較[n(%)]

2.2 癌組織與癌旁組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率比較

癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 肺組織與癌旁組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)率比較[n(%)]

2.3 VEGF及Ki-67陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Pearman分析顯示，VEGF陽性表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)(P<0.05)；Ki-67陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 VEGF及Ki-67與NSCLC臨床病理特征之間的關(guān)系[n(%)]

2.4 癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)的相關(guān)性

VEGF陽性115例，陽性率76.67%(115/150)，Ki-67陽例數(shù)89例，陽性率59.33%(89/150)，Logistic回歸分析顯示，癌組織VEGF與Ki-67陽性表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.627，P=0.032)。

3 討論

NSCLC擴(kuò)散速度較慢，生物學(xué)行為(疾病發(fā)生、進(jìn)展與侵襲等方面)與腫瘤細(xì)胞異常增殖存關(guān)聯(lián)性[4-5]。隨著生物學(xué)技術(shù)水平不斷提升，從分子水平對腫瘤發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識逐漸深入，腫瘤標(biāo)志物在肺癌患者肺組織中的變化與臨床病理學(xué)特征相關(guān)性的研究也隨之成為重點(diǎn)。

VEGF作為最早于腫瘤細(xì)胞分離的多亞型多家族蛋白質(zhì)，是一種有高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子。臨床研究[6]證實，正常組織中VEGF陽性表達(dá)率極低，但在腫瘤，尤其是惡性腫瘤細(xì)胞中表達(dá)率極高。本研究結(jié)果顯示，死亡組患者癌組織VEGF陽性表達(dá)率高于存活組(P<0.05)，癌組織高于癌旁組織(P<0.05)，且與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及臨床分期有相關(guān)性(P<0.05)，與Zhan等[7]的研究相符。這提示VEGF不僅參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移等過程，其陽性表達(dá)水平還與患者的預(yù)后密切相關(guān)，可作為NSCLC復(fù)發(fā)及評判預(yù)后的預(yù)測因子。其可能的機(jī)制為：VEGF與VEGF受體相結(jié)合后，可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及遷移過程，提高微血管通透性，并通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，加快惡性腫瘤新生血管的生成，加速淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖分裂速度[8]。

Ki-67為一種細(xì)胞核抗原，標(biāo)記指數(shù)與腫瘤增殖及患者預(yù)后呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，死亡組患者癌組織Ki-67陽性表達(dá)率高于存活組(P<0.05)，癌組織高于癌旁組織(P<0.05)，提示Ki-67陽性表達(dá)與腫瘤增值及預(yù)后有關(guān)，癌組織中Ki-67陽性表達(dá)可作為腫瘤增值及判斷預(yù)后的預(yù)測因子[9-10]。相關(guān)性分析顯示，Ki-67陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)，與宋作慶等[11]的研究存在差異，可能與樣本量較小有關(guān)。

本研究還顯示，VEGF陽性表達(dá)者，其Ki-67陽性表達(dá)水平會升高，提示VEGF能夠加快NSCLC新生血管形成與腫瘤細(xì)胞增殖速度，與國外相關(guān)研究[12]一致。因此，VEGF陽性表達(dá)率高的腫瘤，侵襲轉(zhuǎn)移水平更高，預(yù)后不佳。此外，回歸分析顯示，VEGF與Ki-67陽性表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩項指標(biāo)在預(yù)測NSCLC的發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后中有較好的協(xié)同效果。

綜上所述，在NSCLC患者中，癌組織VEGF與Ki-67的表達(dá)水平較高，且與患者臨床病理學(xué)相關(guān)特征相關(guān)，可作為臨床早期診斷及判斷預(yù)后的重要依據(jù)。