范珊珊 李鐵男 陸紀宏 陳麗萍 田宏迪

浙江省金華康恩貝生物制藥有限公司，浙江金華 321016

氯雷他定（loratadine）屬于三環(huán)類第二代的抗組胺藥物，通過選擇性抑制外周神經(jīng)組胺H1受體活性，抑制組胺引起的過敏癥狀，與第一代抗組織胺藥相比，氯雷他定的一大特性是無瞌睡作用[1]，目前市售的氯雷他定口服制劑包括片劑、膠囊劑和糖漿劑。氯雷他定屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS）Ⅱ類藥物，水中溶解度僅為4 μg/ml[2]，水溶性較低，生物利用度較差。羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）是β-環(huán)糊精的一種羥烷基衍生物，具有優(yōu)良的包合作用，可以提高被包合物質(zhì)的穩(wěn)定性，增加難溶性藥物的溶解性，降低藥物毒副作用以及提高藥物的生物利用度[3]。HP-β-CD作為一種藥物的輔料，在藥劑學(xué)方面已經(jīng)有了廣泛的應(yīng)用[4]，本研究為氯雷他定包合物的制備工藝提供一些依據(jù)。

1 儀器與材料

高效液相色譜 儀，L.7110（HITACHI）；XX型恒溫磁力攪拌器，79HW-1（樂成電器廠）；紫外可見分光光度計，UV-VIS8500（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；醫(yī)用超聲清洗器，KQ-100E（昆山市超聲儀器有限公司）；電子分析天平，AEL.16-21（SHIMADzU）；遠紅外輻射干燥箱，766型-3（江蘇省南通農(nóng)業(yè)科學(xué)儀器）；電熱恒溫水浴鍋，H.H.S.21.6（上海醫(yī)療器械三廠）；氯雷他定（Loratadine）原料藥，含量95.68%（HPLC測 定）；羥 丙 基 -β － 環(huán) 糊 精（hydroxypropylβcyclodextrin，HP.p.CD，淄博千匯精細化工有限公司）；其他試劑均為分析純、色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定的分析方法及方法學(xué)驗證

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜條件：Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇：0.02 mol/L磷酸二氫鉀（83∶17），檢測波長：247 nm，流速：1 ml/min，理論塔板數(shù)按氯雷他定峰計算不得低于1000[5-8]。羥丙基-β-環(huán)糊精無影響。氯雷他定的HPLC色譜圖見圖1。

圖1 氯雷他定的HPLC色譜圖

2.1.2 線性 稱取氯雷他定原料藥100 mg，用流動相溶解稀釋至100 ml，得氯雷他定對照品溶液。精密量取上述對照品溶液 0.1、1.0、2.0、3.0、5.0 ml，分別置于100 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，制得濃度分別為 1、10、20、30、50 μg/ml的溶液。在上述色譜條件下，分別精密量取20 μl注入液相色譜儀，以峰面積對進樣濃度進行回歸分析，得氯雷他定的回歸方程為y=42 376x+25 097（r=0.9999），結(jié)果表明，其濃度在1.0～50μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3 回收率試驗 精密稱取氯雷他定原料藥適量，制成氯雷他定高中低3個濃度的樣品。按“2.1.1項”下測定并計算回收率。見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.1.4 精密度試驗 取“2.1.3”項下同一濃度氯雷他定溶液，按“2.1.1”項下色譜條件連續(xù)測定6次，記錄峰面積。見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果

2.1.5 包合物含量測定 稱取包合物適量（約含氯雷他定100 mg），置于100 ml量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml置于100 ml容量瓶中，用流動相稀釋刻度，搖勻，照“2.1.1”項下測定氯雷他定的含量，按照下列公式計算包合物含藥量（%）：

包合物含量（%）=樣品中含藥量/樣品量×100%

包合率（%）=包合物樣品含藥量/投入藥品量×100%

2.2 氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的制備及工藝優(yōu)化

2.2.1 氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備的基本工藝 稱取HP-β-CD 9.00 g置于小燒杯中，加入20 ml蒸餾水，于恒溫磁力攪拌器內(nèi)攪拌使HP-B-CD溶解，40 ℃保溫。另稱取氯雷他定原料藥0.766 g緩緩加入HP-β-CD溶液中，在40 ℃下不斷攪拌（攪拌轉(zhuǎn)速300 r/min），連續(xù)攪拌包合1 h，抽濾，得氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物溶液，濾液噴霧干燥，得疏松狀的顆粒，即氯雷他定羥丙-β-環(huán)糊精包合物顆粒[9-12]。

2.2.2 氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備工藝的正交試驗優(yōu)化 為得到最佳包合物制備工藝，采用正交設(shè)計試驗[13-15]，對影響包合工藝的主要因素氯雷他定與HP-β-CD的投料摩爾比A、包合時間（h）B、攪拌速度（r/min）C和包合溫度（℃）D分別選擇三個水平 A1（1 ∶ 3）A2（1 ∶ 4）A3（1 ∶ 5），B1（1）B2（2）B3（3），C1（300）C2（500）C3（800），D1（40）D2（50）D3（60）進行考察， 以氯雷他定的包合率為指標， 確定最佳制備工藝。正交試驗因素見表3。

表3 正交試驗因素、水平表

根據(jù)正交表L9（34）的9種試驗方案，制備氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，測定其包合率。結(jié)果見表4。

表4 L9（34）正交實驗方案和結(jié)果

由試驗結(jié)果分析各因素各列水平的情況：第1列A因素：K2＞K3＞K1，極差最大，為影響包合率的主要因素；第2列B因素：K3＞K1＞K2， 該因素對包合率影響較小；第3列C因素：K2＞K3＞K1，極差最小，說明對包合率影響最??；第4列D因素：K3＞K2＞K1，對包合率影響不大。綜合考慮各因素對包合率的影響，篩選出投料比1∶4，包合時間3 h，攪拌速度500 r/min，溫度60 ℃為氯雷他定羥丙基－β－環(huán)糊精包合物最佳制備工藝。

2.2.3 氯雷他定羥丙基－β－環(huán)糊精包合物樣品制備 為驗證本品最佳制備工藝，稱取HP-β-CD 12.0 g置于小燒杯中，加入20 ml蒸餾水，于恒溫磁力攪拌器內(nèi)攪拌使HP-β-CD溶解，60 ℃保溫。另稱取氯雷他定原料藥0.766 g緩緩加入HP-β-CD溶液中，在60 ℃下不斷攪拌，連續(xù)包合3 h，抽濾，得氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物溶液，將濾液噴霧干燥，得疏松狀的顆粒，即氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物。該工藝制備的包合物包合率見表5。

表5 A2B3C2D3最佳制備工藝包合率試驗結(jié)果

2.3 穩(wěn)定性試驗

2.3.1 加速試驗 稱取一定量的氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物和氯雷他定原料藥適量，分別置于開口稱量瓶中，在（40±2） ℃，RH 75%條件下放置5、10 d，測定氯雷他定含量，結(jié)果見表6。實驗結(jié)果表明，氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物在高溫條件下具有較好的穩(wěn)定性。

表6 樣品加速試驗含量檢測結(jié)果

2.3.2 溶出度試驗 稱取氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物與氯雷他定原料藥和HP-β-CD的混合物適量（約含氯雷他定10 mg），用濾紙包裹后置于干燥轉(zhuǎn)籃內(nèi)。采用溶出度測定法第一法，轉(zhuǎn)速100 r/min，平穩(wěn)后，將轉(zhuǎn)籃降入溶出杯中，溶出杯中介質(zhì)為蒸餾水900 ml，并保持（37±0.5）℃恒溫，于45 min取樣5 ml，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾后，取20 μl注入HPLC，按外標法計算，氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物中氯雷他定溶出度為97.67%，氯雷他定和HP-β-CD的混合物中氯雷他定溶出度為13.56%。實驗結(jié)果表明，氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物溶出度較好。

2.4 結(jié)果

①制成氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物提高了氯雷他定在水中的溶解度。②按正交試驗方法進行工藝摸索試驗，氯雷他定羥丙基β-環(huán)糊精包合物的最佳包合工藝為投料比1∶4，包合時間3 h，攪拌速度500 r/min，溫度60 ℃，該工藝可制備所得的包合率較高。③加速試驗結(jié)果表明，氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物具有很好的穩(wěn)定性，氯雷他定原料穩(wěn)定性較差；溶出度試驗結(jié)果表明，氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物溶出度較好。

3 討論

采用正交試驗法，對影響包合工藝的主要因素進行摸索試驗，優(yōu)化得到了最佳制備工藝，加速和溶出試驗證明，氯雷他定羥丙基-β-環(huán)糊精包合物較穩(wěn)定，且溶出度較高。由于本品放大生產(chǎn)過程后可能導(dǎo)致工藝控制不穩(wěn)定，建議對產(chǎn)品進行預(yù)中試放大，摸索確定大生產(chǎn)工藝參數(shù)范圍，為大生產(chǎn)提供參數(shù)依據(jù)及數(shù)據(jù)積累。