韓惠超 葉世蕓 李向東 楊潔

（1.貴州中醫(yī)藥大學(xué) 貴州貴陽 550002；2.貴州得軒堂護(hù)康藥業(yè)股份有限公司）

1 前言

五味消毒飲出自清代《醫(yī)宗金鑒》，具有清熱解毒、消散疔瘡的功效[1]，為清熱解毒的代表方，其方劑由金銀花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子等組成。目前，對于其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，尤其是方劑中蒲公英的指標(biāo)性成分菊苣酸的檢測尚未見報(bào)道，故本文采用高效液相色譜法對本方中蒲公英的有效成分菊苣酸的含量進(jìn)行測定。

2 材料和儀器

材料：對照品菊苣酸（成都普瑞法科技開發(fā)有限公司，含量98%）。

五味消毒飲處方：金銀花、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子（藥材來源信息見表1）；冰醋酸（色譜純）、甲醇（色譜純）；黃酒；娃哈哈純凈水。

表1 藥材產(chǎn)地信息

儀器：高效液相色譜儀；煎藥壺；電子分析天平；超聲波清洗器。

3 方法與結(jié)果

3.1 溶液制備

3.1.1對照品溶液制備

精確稱取菊苣酸對照品11.6 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶內(nèi)，搖勻，充分混合均勻并稀釋，制成含量為1.16 mg/mL的對照品溶液，備用。

3.1.2供試品溶液制備

按照表2組方，遵循古籍方法：取金銀花11.19g、野菊花、蒲公英、紫花地丁、天葵子各4.48 g浸泡30min，加400 mL水文火煎煮20 min，放入100 mL黃酒武火煎煮5 min，用300目尼龍布過濾，藥渣按同法再次煎煮，將2次煎液合并，用水定容至800 mL，共15批水煎液。分別取10 mL，通過0.22μm微孔濾膜進(jìn)行過濾，備用。

表2 15批方劑藥材信息

3.2 色譜條件

色譜柱：Welch UItimate XB-C18（4.6mm×250 mm，5μm）。

流動相：0.5%醋酸水溶液-甲醇梯度洗脫（0～10 min，10%～32%甲 醇；10～20 min，32%甲 醇；20～35 min，32%～46%甲醇）。

柱溫：30℃。

流速：1.0 mL/min。

檢測波長：320 nm。

進(jìn)樣量：10μL。

3.3 檢測波長選擇

將一定濃度對照品溶液于波長200～400 nm進(jìn)行全波段掃描，結(jié)果表明在320 nm處有最大吸收。

3.4 線性關(guān)系

精確量取菊苣酸對照品貯備液，分別稀釋成2、4、8、16、32倍，充分搖勻，即得含量為1.16、0.58、0.29、0.145、0.0725、0.03625 mg/mL的對照品溶液，各進(jìn)樣10μL，注入液相色譜儀中按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。

以菊苣酸對照品測得的峰面積值為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程為：

結(jié)果顯示，菊苣酸在0.0725～1.16 mg/mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精確量取供試品溶液，按3.2色譜條件測定，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測定6次，測得菊苣酸的峰面積并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.85%，結(jié)果顯示其精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批五味消毒飲6份，于3.2色譜條件下對溶液的菊苣酸含量進(jìn)行HPLC測定，結(jié)果顯示菊苣酸的平均含量為0.0670 mg/mL，且在0.0662～0.0681 mg/mL內(nèi)，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.17%（n=6），表明有良好的重復(fù)性。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、16 h于3.2色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果表明含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.93%（n=6），表明在12 h內(nèi)供試品溶液中菊苣酸的含量基本穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

取同一份供試品溶液進(jìn)行6次回收率試驗(yàn)，對照品加入量中的菊苣酸的含量和樣品中的菊苣酸含量之和在規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，結(jié)果表明6次同一供試品溶液中測得菊苣酸的平均回收率為100.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.58%（n=6），測得結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)，表明該方法可行。

3.9 樣品含量測定

對15批樣品按3.2的色譜條件進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明15批五味消毒飲中菊苣酸的含量稍有不同，但RSD值較小，表明該方法穩(wěn)定可行，見表3。

表3 五味消毒飲含量測定結(jié)果

4 討論

五味消毒飲為《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》收錄，方中銀花清熱解毒，消散癰腫；紫花地丁、蒲公英、野菊花，紫背天葵子清熱解毒，涼血消腫[2]。目前并沒有關(guān)于菊苣酸含量測定的相關(guān)研究，為確定蒲公英在處方中的含量，本文根據(jù)測定蒲公英菊苣酸的含量可以測定蒲公英含量的思路，通過試驗(yàn)，建立了測定五味消毒飲中菊苣酸的方法。本文采用Welch UItimate XB-C18色譜柱，0.5%醋酸水溶液-甲醇為流動相，檢測波長為320 nm測定五味消毒飲中菊苣酸的含量，菊苣酸濃度的線性關(guān)系良好；精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、試驗(yàn)結(jié)果良好；且供試品按照《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑及其物質(zhì)基準(zhǔn)申報(bào)資料要求（征求意見稿）》要求采用遵古的原則按照古籍的方法進(jìn)行提取，該方法可為五味消毒飲的質(zhì)量控制提供參考。