卜紅宇 滕贇 張茜 內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗(yàn)研究院 （內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

內(nèi)容提要：采用驗(yàn)證的微生物檢查法對(duì)不同廠家天然橡膠膠乳避孕套的微生物污染進(jìn)行檢測(cè)分析，探討引起微生物污染差異的特點(diǎn)和規(guī)律。結(jié)果表明，16個(gè)廠家20批供試品需氧菌總數(shù)為0～500CFU/g；霉菌和酵母菌總數(shù)為0～10CFU/g；大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌及白色念珠菌均未檢出。不同廠家避孕套需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)差異很大，應(yīng)加強(qiáng)生產(chǎn)單位的監(jiān)督管理，規(guī)范生產(chǎn)，完善提高避孕套微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。

天然膠乳橡膠避孕套在世界各國(guó)得到廣泛應(yīng)用，是能夠有效避孕、阻隔某些疾病傳播的醫(yī)用器具，其衛(wèi)生指標(biāo)直接影響避孕套的使用安全。我國(guó)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB7544-2019天然橡膠膠乳男用避孕套技術(shù)要求與試驗(yàn)方法》建議不得檢出金黃色葡萄球、銅綠假單胞菌和腸桿菌科細(xì)菌，但標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)需氧菌、霉菌和酵母菌總數(shù)限度作明確規(guī)定[1]?！禛B15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定了包括手套、紙巾、口罩、避孕套等衛(wèi)生用品的微生物指標(biāo)[2]，但該標(biāo)準(zhǔn)在國(guó)內(nèi)現(xiàn)行避孕套監(jiān)管中未得到充分重視[3]。此外，白色念珠菌是外陰陰道念珠菌病的主要感染菌種[4]，但在上述標(biāo)準(zhǔn)中均未作規(guī)定。而且目前未見關(guān)于避孕套污染的研究。所以本試驗(yàn)對(duì)避孕套需氧菌、霉菌和酵母菌總數(shù)、金黃色葡萄球、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌以及白色念珠菌進(jìn)行檢測(cè)，分析微生物污染以及安全風(fēng)險(xiǎn)，為生產(chǎn)廠家控制監(jiān)測(cè)微生物污染提供理論依據(jù)，為避孕套制定科學(xué)的限度標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支持。

1.材料與方法

1.1 一般材料

培養(yǎng)基：蛋白胨水、胰酪大豆胨瓊脂、沙氏葡萄糖液體、沙氏葡萄糖瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂、胰酪大豆胨液體、麥康凱瓊脂、麥康凱液體、十六烷三甲基溴化銨瓊脂、念珠菌顯色瓊脂（美國(guó)BD公司），吐溫-80、卵磷脂（東京化成工業(yè)）。

菌種：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10104]、大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98001]（中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

樣品：天然橡膠膠乳避孕套，生產(chǎn)廠家A（批號(hào)：70802），B（批號(hào)：20190306），C（批號(hào)：180602），D（批號(hào)：16114、18120106 003），E（批號(hào)：18122108），F(xiàn)（批號(hào)：17041101），G（批號(hào)：LH180912），H（批號(hào)：18086JD），I（批號(hào)：19010702），J（批號(hào)：18010611），L（批號(hào)：1811/10），M（批號(hào)：23807AC、23851AB），N（批號(hào)：U8I810S），O（批號(hào)：1000745338、1000659343），P（批號(hào)：SD18091），Q（批號(hào)：1808021、1811011），S（批號(hào)：23851AB）。

儀器：AC2-4SI型生物安全柜（Esco集團(tuán)），PL602-S型電子天平（梅特勒托利多集團(tuán)），MIR-554型培養(yǎng)箱（日本三洋公司），高壓蒸汽滅菌柜（德國(guó)潔定有限公司），超低溫保存箱（海爾集團(tuán)），Easy MIX型均質(zhì)器（生物梅里埃法國(guó)公司），移液器（德國(guó)艾本德科學(xué)公司）。

1.2 方法

1.2.1 菌液制備

取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌及白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，制成5000～10000CFU/mL的菌懸液。

1.2.2 供試液制備

取供試品10g，用無(wú)菌棒與鑷子展開，置于均質(zhì)袋中，加入含吐溫-80、卵磷脂的蛋白胨水至100mL，用均質(zhì)器拍打，作為1:10的供試液；另取1:10供試液20mL，加80mL TSB，搖勻，制成1:50供試液。

1.2.3 微生物檢查方法

需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)：平皿法，取1:10供試液1mL，注入直徑9cm培養(yǎng)皿；稀釋法，取1:50供試液1mL，注入直徑9cm培養(yǎng)皿。霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)：平皿法，取1:10供試液5mL，注入直徑15cm培養(yǎng)皿?？刂凭鷻z查方法：取1:10供試液10mL加入含吐溫-80、卵磷脂的增菌培養(yǎng)液。分別依2020年版《中國(guó)藥典》進(jìn)行檢查[5]。

2.結(jié)果

天然橡膠膠乳避孕套微生物污染檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1.天然橡膠膠乳避孕套微生物污染檢測(cè)結(jié)果

由表1可見，供試品需氧菌總數(shù)為0～500CFU/g；霉菌和酵母菌總數(shù)為0～10CFU/g；大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌及白色念珠菌均未檢出。不同廠家的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)差異顯著，其中B、G、J、L、N及Q廠家需氧菌污染較嚴(yán)重，B、J、M及Q廠家真菌污染較嚴(yán)重，說(shuō)明不同廠家的產(chǎn)品質(zhì)量存在較大差異。此外，Q廠家中2批供試品需氧菌、霉菌和酵母菌數(shù)差異顯著，Q-2需氧菌總數(shù)高達(dá)500CFU/g，霉菌和酵母菌數(shù)高達(dá)10CFU/g，這提示該廠家生產(chǎn)過(guò)程存在微生物污染風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，需要強(qiáng)化生產(chǎn)程序標(biāo)準(zhǔn)化管理。

3.討論

《GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定避孕套微生物指標(biāo)為：細(xì)菌菌落總數(shù)≤20，真菌總數(shù)、大腸菌群、致病性化膿菌不得檢出；若按此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，需氧菌總數(shù)有8批不合格，霉菌及酵母菌總數(shù)有12批不合格，不合格率為60%?！吨袊?guó)藥典》2020年版陰道給藥制劑的限度標(biāo)準(zhǔn)為：需氧菌總數(shù)（CFU/g）102；霉菌和酵母菌數(shù)（CFU/g）101；不得檢出銅綠假單胞菌（1g中）、金黃色葡萄球菌（1g中）、白色念珠菌（1g中）。若按此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，N廠家及Q廠家（Q-2）兩批供試品需氧菌總數(shù)不符合規(guī)定，不合格率為10%。該研究結(jié)果為制定科學(xué)的限度標(biāo)準(zhǔn)提供了數(shù)據(jù)支撐，應(yīng)結(jié)合考慮產(chǎn)品生產(chǎn)、銷售及使用的實(shí)際情況，制定符合我國(guó)監(jiān)管的切實(shí)可行的標(biāo)準(zhǔn)。

橡膠避孕套產(chǎn)品目前沒有較好的滅菌方法[6,7]，所以生產(chǎn)商需要建立過(guò)程管理控制程序，在整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中監(jiān)測(cè)控制微生物的污染，包括生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)備、原料、人員等方面，使微生物負(fù)載降至最低。另外，生產(chǎn)商也應(yīng)該監(jiān)測(cè)避孕套產(chǎn)品在存放過(guò)程中微生物的變化規(guī)律及影響因素，以確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)不會(huì)受到微生物污染。避孕套在使用中直接接觸人體黏膜組織，極易引起細(xì)菌或真菌感染，造成使用者身心傷害，所以建議將避孕套列為無(wú)菌醫(yī)療器械管理。

本研究檢測(cè)分析了16個(gè)廠家20批供試品的微生物污染數(shù)據(jù)，不同廠家避孕套需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)差異很大，若按照《GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中避孕套的微生物指標(biāo)進(jìn)行判定，不合格率為60%。該研究為制定科學(xué)合理的避孕套限度標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支撐。