李曉玲 汪硯雨 徐梅 趙子明

1.河南科技大學第一附屬醫(yī)院 河南，洛陽 471003 2.三門峽市中心醫(yī)院 3.鄭州市第七人民醫(yī)院

心律失常是最常見的誘發(fā)心源性猝死的病因之一，其發(fā)病率在近數(shù)十年來呈持續(xù)上升的趨勢，且發(fā)病年齡日趨年輕化[1-2]。迄今為止，心律失常的治療仍以酒石酸美托洛爾等西藥治療為基礎，盡管引入了射頻消融術，但對于心律失?；颊咝募p傷的改善效果仍不盡如人意。據(jù)研究報道，心肌細胞凋亡與氧化應激相關，核因子E2相關因子2（nuclear factor E2 related factor2，Nrf2）被證實為細胞內氧化應激調節(jié)的重要轉錄因子，生理狀態(tài)下Nrf2被胞質蛋白伴侶分子kelch樣ECH關聯(lián)蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）錨定于細胞質，一旦發(fā)生氧化應激反應，Keap1-Nrf2/抗氧化反應元件（antioxidant response element，ARE） 抗氧化系統(tǒng)被激活，Keap1與Nrf2分離，Nrf2進入細胞核，結合ARE，啟動以血紅素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）為代表的抗氧化酶的基因轉錄，進而發(fā)揮抗氧化作用[3]。苓桂術甘湯是《傷寒雜病論》中經(jīng)典方劑，治療慢性心律失常療效確切[4]，但具體作用機制尚不明確。本研究以慢性心律失常大鼠模型為對象，觀察苓桂術甘湯對大鼠心肌損傷以及氧化應激防御能力的影響，分析其保護慢性心律失常大鼠心肌組織的可能機制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 雄性無特定病原體（specific pathogen free，SPF） 級SD大鼠45只，7周齡， 體質量260～280g，購于上海斯萊克實驗動物有限公司[實驗動物生產(chǎn)許可證號碼：SCXK（滬）2017-0005]。實驗開展前適應性飼養(yǎng)1周，飼養(yǎng)于河南中醫(yī)藥大學動物實驗中心[實驗動物使用許可證號碼：SYXK（豫）2020-0004]，根據(jù)動物福利委員會要求飼養(yǎng)，即在（23±1）℃恒溫、SPF級環(huán)境中飼養(yǎng)，自然通風，人工照明，明暗各12h，自由進食飲水。

1.1.2 藥物、主要試劑和儀器 苓桂術甘湯由茯苓、桂枝、白術、甘草組成，比例為4:3:3:2，所有藥材購于河北省承德市中藥材公司，品系鑒定符合中藥藥用標準。常規(guī)方法煎熬3次，混合3次濾液后，60℃水浴濃縮，制為內含生藥2g·mL-1的藥液，于4℃冰箱內保存。苓桂術甘湯的具體給藥劑量根據(jù)“人和動物體表面積折算的等效劑量比率表”換算，動物與人每kg體重劑量折算系數(shù)是6.25，成人日總劑量為25g·kg-1，折算大鼠日用藥劑量為4g·kg-1。酒石酸美托洛爾（規(guī)格：25mg×20片）購于阿斯利康制藥有限公司（批準文號：國藥準字H32025391）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）試劑盒購于中國碧云天生物公司（批號：20191106）；血清谷胱甘肽（glutathione，GSH）、谷胱甘肽硫基轉移酶（glutathione S-transferase，GST）酶聯(lián)免疫吸附檢測（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒均購于南京建成生物工程研究所（批號 ：20190913、20190922）；DNA 缺 口 末 端 標 記 法（TdT-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）染色試劑盒購于北京博奧森生物科技有限公司（批號：20191213）；兔抗大鼠β-actin、Nrf2、HO-1單克隆抗體（一抗）以及辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記山羊抗兔IgG二抗均購于北京百奧萊博科技有限公司（批號：20190815、20190712、20190206、20190528）。DB-3型心電圖機為上海廣電醫(yī)用電子儀器有限公司產(chǎn)品；TGL-16M臺式高速冷凍離心機、LW300-28LT型生物顯微鏡均購于西安禾普生物科技有限公司；UVCI-01型機載凝膠成像儀購于美國Bio-Rad公司；EG1150H型包埋機為德國徠卡微系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 造模、分組與干預 從45只大鼠中隨機選取10只作為正常對照組，其余35只大鼠尾靜脈注射氯化鋇溶液，以制備慢性心律失常大鼠模型[5]。造模方法：稱量大鼠體質量，按照體質量腹腔注射2%戊巴比妥鈉1mL/400g，充分麻醉后將大鼠俯臥位固定在動物手術臺上，在四肢內側皮下置入針狀電極，連接DB-3型心電圖機，基線調零，描記Ⅱ導聯(lián)心電圖。待大鼠心電圖正常平穩(wěn)后，對其尾部充分消毒，于尾靜脈5s內注射0.4%氯化鋇溶液4mg·kg-1，快速記錄心電圖，共記錄0.5h。正常對照組大鼠的麻醉、固定操作同上，尾靜脈注射等體積0.9%氯化鈉溶液。造模成功標準：大鼠心電圖出現(xiàn)典型慢性心律失常表現(xiàn)，表示造模成功[5]。

共30只大鼠造模成功，將造模成功大鼠隨機分為苓桂術甘湯組、陽性對照組和模型對照組，每組各10只。造模成功后當天，苓桂術甘湯組予苓桂術甘湯生藥4g/（kg·d）灌胃，陽性對照組予酒石酸美托洛爾20mg/（kg·d）灌胃，模型對照組、正常對照組予以等體積0.9%氯化鈉注射液灌胃。灌胃體積均為10mL·kg-1，早晚各1次，每次持續(xù)1min，共4周。

1.2.2 取材 灌胃第4周末，各組大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉1mL/400g麻醉，開胸后完整分離心臟，以預冷0.9%氯化鈉注射液沖洗，濾紙吸干。一部分心肌組織以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm切片，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色后觀察心肌組織的病理改變；一部分液氮冷凍，備行實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR）和Western blot檢測。

1.2.3 血清GSH、GST含量檢測 取材過程同1.2.2，經(jīng)心臟取血2mL，靜置后3 000r/min離心10min，離心半徑10cm，分離血清，采用ELISA檢測血清GSH、GST含量。操作嚴格按照試劑盒說明書進行，酶標儀檢測450nm波長吸光度，并以標準品吸光度為橫坐標，標準品含量為縱坐標，繪制標準曲線，得到直線回歸方程，將樣品吸光度帶入方程，計算出樣品含量。

1.2.4 心肌組織病理變化的HE染色觀察 取1.2.2制作的心肌組織切片，脫蠟、水化后，蘇木素染色5min，自來水沖洗1min，梯度乙醇分化15s，自來水沖洗0.5h，0.5%伊紅染色1min，蒸餾水沖洗30s，脫水、透明，中性樹膠封片，400倍光鏡下觀察心肌組織的病理形態(tài)學變化。

1.2.5 心肌細胞凋亡檢測 按TUNEL染色試劑盒說明書進行操作，各組石蠟切片常規(guī)入水脫蠟，蒸餾水洗滌切片，37℃加入以Tris緩沖鹽溶液1:100新鮮稀釋的蛋白酶K，孵育10min后，蒸餾水洗滌，37℃加入末端脫氧核糖核酸轉移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）、異羥基洋地 黃毒苷（digoxigenin，Dig）配基-脫氧尿嘧啶核苷三磷酸（deoxyuridine triphosphate，dUTP）標記的緩沖液20μL，孵育2h后以Tris緩沖鹽溶液洗滌，室溫加入封閉液50μL，0.5h后甩干，37℃加入封閉液1:100稀釋的生物素標記抗Dig抗體50μL，孵育0.5h后以Tris緩沖鹽溶液洗滌，37℃加入Tris緩沖鹽溶液1:100稀釋的鏈酶親合素-生物素-過氧化物酶復合物，孵育0.5h后以Tris緩沖鹽溶液洗滌，二氨基聯(lián)苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB） 顯色20min，蒸餾水洗滌，蘇木素復染，Tris緩沖鹽溶液洗滌，脫水，透明、封片，400倍光鏡下觀察大鼠心肌細胞凋亡情況。凋亡陽性細胞的細胞核呈黃染，每張切片隨機抽選10個視野，計數(shù)細胞總數(shù)和凋亡陽性細胞數(shù)，計算心肌細胞凋亡率，心肌細胞凋亡率（%）=（陽性細胞數(shù)/細胞總數(shù)）×100%。

1.2.6 心肌組織中Nrf2、HO-1基因表達檢測 取心肌組織，按Trizol試劑盒說明書提取總RNA，經(jīng)紫外分光光度計檢測RNA濃度，電泳觀察RNA完整性。采用反轉錄試劑盒合成cDNA，進行PCR擴增，擴增所用引物由上海生工生物工程公司合成，序列見表1。PCR擴增 體 系 共25μL， 包 括SYBR Green Mix 12.5μL、ddH2O 9.5μL、 上下游引物各0.5μL、cDNA模板2μL。反 應 條 件 ：95℃ 10min，95℃ 10s，60℃ 1min，95℃15s，60℃ 15s，共40個循環(huán)。采集目的基因及內參基因3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）各個循環(huán)擴增的熒光信號引物，反應結束后確認擴增曲線與熔解曲線，制作標準曲線，采取2-△△Ct計算目的基因相對表達量。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.2.7 心肌組織中Nrf2、HO-1蛋白表達檢測 提取心肌組織總蛋白，加入500μL細胞裂解液，BCA法測定蛋白總量，蛋白與上樣緩沖液混勻后，沸水浴變性，冷卻后行10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，濕法電轉移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1.5h，加入兔抗大鼠Nrf2、HO-1、β-actin一抗（稀釋比例1∶1 000），4℃搖床過夜，洗膜后加入HRP標記的山羊抗兔IgG二抗（稀釋比例1∶8 000），室溫孵育1h，增強化學發(fā)光法檢驗，PVDF膜與化學發(fā)光底物孵育后，膠片曝光顯影。采用凝膠成像儀機載Labworks軟件分析，以目的蛋白與內參蛋白β-actin灰度值的比值計算目的蛋白的相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以±s表示，多樣本計量資料比較采用單因素方差分析，兩樣本比較采用Fisher最小顯著性差異（least significant difference，LSD）-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 造模大鼠心電圖觀察 35只造模大鼠中30只造模成功，苓桂術甘湯組、陽性對照組、模型對照組各10只，均出現(xiàn)心律失常的典型心電圖表現(xiàn)，即ST段T波改變、異常Q波，造模成功率85.71%。見圖1。

圖1 造模大鼠心電圖表現(xiàn)Fig.1 Electrocardiogram of model rats

2.2 各組大鼠GSH和GST含量比較 各組間總體比較，GSH和GST含量差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。與正常對照組比較，模型對照組、陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠的GSH和GST含量較低（P＜0.05）；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠的GSH和GST含量較高（P＜0.05）；與陽性對照組比較，苓桂術甘湯組大鼠的GSH和GST含量較低（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠的GSH、GST含量比較（±s）Tab.2 Comparison of GSH and GST contents of rats in each group（±s）

表2 各組大鼠的GSH、GST含量比較（±s）Tab.2 Comparison of GSH and GST contents of rats in each group（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與陽性對照組比較，#P＜0.05Note:Compared with normal control group， *P＜0.05;compared with model control group， △P＜0.05;compared with positive control group，#P＜0.05

組別 n GSH（mg·gprot-1） GST（U·mgprot-1）正常對照組 10 1.09±0.21 94.39±5.58模型對照組 10 0.56±0.13* 82.17±3.28*陽性對照組 10 0.91±0.15*△ 92.67±4.46*△苓桂術甘湯組 10 0.76±0.16*△# 88.11±4.69*△#F值 18.552 14.245 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.3 各組大鼠心肌組織病理變化 HE染色提示，正常對照組大鼠心肌組織肌束清晰、排列規(guī)則，無水腫、充血；模型對照組大鼠心肌組織水腫、充血嚴重，肌束紊亂明顯，心肌細胞間隙增寬；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組心肌組織輕度水腫、充血，肌束有輕微模糊、紊亂情況，心肌細胞間隙縮小。見圖2。

圖2 各組大鼠心肌組織病理變化（HE染色，400×）Fig.2 Pathological changes of myocardial tissue in each group（HE staining， 400×）

2.4 各組大鼠心肌細胞凋亡率比較 顯微鏡下正常心肌細胞核為藍色，凋亡細胞核為棕褐色，正常對照組心肌極少見凋亡細胞，模型對照組凋亡細胞增多且分布密集；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組凋亡細胞減少。見圖3。各組間總體比較，心肌細胞凋亡率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。與正常對照組比較，模型對照組、陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠的心肌細胞凋亡率較高 （P＜0.05）；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠的心肌細胞凋亡率較低（P＜0.05）；與陽性對照組比較，苓桂術甘湯組大鼠的心肌細胞凋亡率較高（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠心肌細胞凋亡率比較（±s，%）Tab.3 Comparison of apoptosis rate of Cardiomyocytes in each group（±s，%）

表3 各組大鼠心肌細胞凋亡率比較（±s，%）Tab.3 Comparison of apoptosis rate of Cardiomyocytes in each group（±s，%）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與陽性對照組比較，#P＜0.05Note:Compared with normal control group， *P＜0.05;compared with model control group， △P＜0.05;compared with positive control group，#P＜0.05

細胞凋亡率正常對照組 10 6.31±0.29模型對照組 10 15.36±0.72*陽性對照組 10 12.64±0.59*△苓桂術甘湯組 10 13.71±0.62*△#F值 469.406 P值 ＜0.001組別n

圖3 各組大鼠心肌細胞凋亡情況（TUNEL染色，400×）Fig.3 Cardiomyocytes apoptosis in each group（TUNEL staining， 400×）

2.5 各組大鼠Nrf2、HO-1基因表達比較 各組間總體比較，心肌細胞Nrf2、HO-1 mRNA表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。與正常對照組比較，模型對照組、陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠的Nrf2、HO-1 mRNA相對表達量均較高（P＜0.05）；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠Nrf2、HO-1 mRNA相對表達量均較高（P＜0.05）；與陽性對照組比較，苓桂術甘湯組大鼠Nrf2、HO-1 mRNA相對表達量均較低（P＜0.05）。見表4。

表4 各組大鼠Nrf2、HO-1 mRNA表達比較（±s）Tab.4 Comparison of expressions of Nrf2 and HO-1 mRNA in each group（±s）

表4 各組大鼠Nrf2、HO-1 mRNA表達比較（±s）Tab.4 Comparison of expressions of Nrf2 and HO-1 mRNA in each group（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與陽性對照組比較，#P＜0.05Note:Compared with normal control group， *P＜0.05;compared with model control group， △P＜0.05;compared with positive control group，#P＜0.05

組別 n Nrf2 HO-1正常對照組 10 0.25±0.05 0.56±0.11模型對照組 10 0.42±0.07* 0.69±0.13*陽性對照組 10 0.78±0.13*△ 0.95±0.17*△苓桂術甘湯組 10 0.66±0.11*△# 0.81±0.15*△#F值 62.225 13.810 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.6 各組大鼠Nrf2、HO-1蛋白表達比較 各組間總體比較，心肌細胞Nrf2、HO-1蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。與正常對照組比較，模型對照組、陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠的Nrf2、HO-1蛋白相對表達量均較高（P＜0.05）；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組大鼠Nrf2、HO-1蛋白相對表達量均較高（P＜0.05）；與陽性對照組比較，苓桂術甘湯組大鼠Nrf2、HO-1蛋白相對表達量均較低（P＜0.05）。 見表5、圖4。

圖4 Western blot檢測各組大鼠Nrf2、HO-1蛋白表達Fig.4 Nrf2 and HO-1 protein expressions in each group detected with Western blot

表5 各組大鼠Nrf2、HO-1蛋白表達比較（±s）Tab.5 Comparison of expressions of Nrf2 and HO-1 protein in each group（±s）

表5 各組大鼠Nrf2、HO-1蛋白表達比較（±s）Tab.5 Comparison of expressions of Nrf2 and HO-1 protein in each group（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與陽性對照組比較，#P＜0.05Note:Compared with normal control group， *P＜0.05;compared with model control group， △P＜0.05;compared with positive control group，#P＜0.05

組別 n Nrf2 HO-1正常對照組 10 0.17±0.02 0.51±0.05模型對照組 10 0.25±0.04* 0.62±0.09*陽性對照組 10 0.59±0.08*△ 0.89±0.09*△苓桂術甘湯組 10 0.41±0.06*△# 0.75±0.08*△#F值 115.000 42.961 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

心律失常為諸多心臟疾病的癥狀表現(xiàn)，是導致患者死亡的主要病因，因而應對慢性心律失常予以高度重視[6]。慢性心律失常的發(fā)病機制可能為竇房結激動異常、傳導速度減慢，或傳導阻滯而導致心臟搏動頻率紊亂，以胸悶、失眠、心悸為主要臨床表現(xiàn)，嚴重時可導致暈厥或猝死[7-8]?，F(xiàn)階段臨床上治療慢性心律失常以阿托品等常規(guī)藥物為主，但不良反應明顯等問題，且高齡患者的藥物代謝能力和對藥物的反應能力均下降，故探索其他更安全、高效的治療方法十分必要。從中醫(yī)學角度而言，慢性心律失常是因患者臟腑內氣血陰陽虛損，氣滯血瘀，引起心脈失暢、心失所養(yǎng)而致病。經(jīng)中醫(yī)學者研究發(fā)現(xiàn)，苓桂術甘湯作為治療心胸滿悶、氣上沖胸、氣短等癥的溫陽益氣之祖方，用于心血管疾病的治療效果良好[9]，但對慢性心律失常的作用及其具體作用機制的研究少見，亟待深入分析。

研究表明，慢性心律失常導致心肌損傷的過程實質上是氧自由基產(chǎn)生、心肌細胞凋亡的病理生理過程，GSH作為低分子清除劑，可在細胞代謝過程中發(fā)揮清除氧自由基、抗氧化應激等功能，是細胞抵抗氧化應激損傷的關鍵組成部分[10]。GST在機體各組織器官中廣泛存在，可催化外源有害物質和還原型谷胱甘肽巰基發(fā)生偶聯(lián)，將有害物質代謝分解后排出體外，發(fā)揮解毒和清除過氧化物的雙重功能。本研究結果顯示，慢性心律失常大鼠體內衡量抗氧化防御能力的GSH、GST含量明顯降低，提示慢性心律失常大鼠抗氧化防御體系受損，抗氧化應激損傷能力下降，通過酒石酸美托洛爾、苓桂術甘湯治療可有效恢復大鼠抗氧化能力，從而減輕心肌組織損傷。據(jù)報道，個體長期處于心律失常狀態(tài)下，氧自由基的產(chǎn)生與清除平衡失調，容易造成氧自由基蓄積，可直接損傷心肌細胞，致使其壞死、凋亡，加重心律失常病情[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，模型對照組心肌細胞凋亡率明顯升高，而陽性對照組、苓桂術甘湯組則有所下降，苓桂術甘湯組心肌細胞凋亡率雖稍高于陽性對照組，但仍然低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學意義，提示苓桂術甘湯在挽救慢性心律失常大鼠心肌細胞凋亡方面有一定價值。苓桂術甘湯方中茯苓補益心脾、寧心安神，桂枝振心陽、止悸動、通血脈，白術補氣養(yǎng)神，甘草補中益氣、通陽化氣?，F(xiàn)代藥理學研究表明，桂枝有效成分可減少兒茶酚胺分泌，保護心臟[12]；甘草可降低心臟異位起搏點興奮性，調節(jié)心臟傳導功能[13]；茯苓、白術亦有調節(jié)心律作用，共奏平復心律、安神定悸之效[14-15]。同時，HE染色觀察大鼠心肌組織病理形態(tài)發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，模型對照組心肌充血嚴重、肌束紊亂，而與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組心肌組織血紅蛋白逸出、細胞核堆積等異常情況比較輕微，進一步提示苓桂術甘湯對慢性心律失常大鼠心肌損傷有一定保護作用。

Nrf2為Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系統(tǒng)中的重要蛋白，Keap1-Nrf2/ARE抗氧化系統(tǒng)是細胞抗氧化防御機制中的關鍵通路，Nrf2通路負責調節(jié)HO-1等抗氧化酶基因表達，發(fā)揮其保護效應。Keap1是Nrf2特異性受體，氧化應激狀態(tài)下，Keap1和Nrf2解離，Nrf2與ARE結合，啟動ARE調控的第Ⅱ相抗氧化酶基因表達，增強細胞對氧化應激的拮抗能力。ARE所調控的抗氧化酶基因主要包括HO-1和GST等。HO-1屬于氧化應激蛋白，是調節(jié)抗氧化應激反應的主要轉錄因子之一，可催化血紅素生成膽綠素、鐵離子、一氧化碳，在氧化性心肌損傷中發(fā)揮保護效應，同時與其酶解產(chǎn)物膽紅素共同發(fā)揮抗氧化應激、抑制細胞凋亡等作用，還可降低組織對氧化應激損傷的敏感程度。Nrf2為其主要上游調控基因，正常生理狀態(tài)下的HO-1表達較低，在氧化應激條件下可通過Nrf2通路啟動HO-1表達，表現(xiàn)出抗氧化作用[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，模型對照組大鼠心肌組織中Nrf2、HO-1蛋白表達上調，提示慢性心律失常可誘發(fā)心肌細胞氧化應激，激活Nrf2基因并增強Nrf2蛋白表達，從而進一步誘導下游HO-1蛋白表達增強；與模型對照組比較，陽性對照組、苓桂術甘湯組Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相對表達量較高。結合本研究結果，推測苓桂術甘湯治療慢性心律失常的主要機制可能是促進細胞Nrf2信號通路活化，誘導抗氧化酶類如HO-1表達進一步增強，從而抵抗氧化應激損傷，保護機體免受毒性物質侵害，抑制心肌細胞凋亡。本研究以臨床常用藥物酒石酸美托洛爾作為陽性對照，結果提示苓桂術甘湯治療慢性心律失常的效果弱于酒石酸美托洛爾，但結合臨床實踐，與西藥比較，中藥不良反應更少，安全性較高，因此筆者認為苓桂術甘湯可以作為慢性心律失常的一種治療選擇。

綜上所述，苓桂術甘湯可抑制慢性心律失常大鼠心肌細胞凋亡，減輕氧化應激損傷，其機制可能與激活Nrf2/HO-1通路有關。中藥復方的藥效與方中藥物的藥理活性有關，苓桂術甘湯阻止慢性心律失常大鼠心肌細胞凋亡的藥理學效應可能涉及多方面機制，是藥物多靶點、微效應的綜合表現(xiàn)，Nrf2/HO-1信號通路或許是關鍵環(huán)節(jié)之一。但本研究仍存在諸多不足，如觀察指標較少等，未來應從多角度進行研究，并分析其他可能存在的作用機制，為苓桂術甘湯治療慢性心律失常的可行性提供更多依據(jù)。