賈易萌

（河南省商丘市睢陽(yáng)區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，河南 商丘 476000）

梅毒是梅毒螺旋體（Treponemiapallidum,TP）感染所引起的性傳播疾病，全球分布廣泛[1]。隨著國(guó)民經(jīng)濟(jì)水平的提高和生活方式的轉(zhuǎn)變，梅毒在國(guó)內(nèi)呈快速流行趨勢(shì)，目前國(guó)內(nèi)梅毒患病人數(shù)位居第五位，僅次于肺結(jié)核、細(xì)菌性痢疾、乙肝、阿米巴性痢疾、淋病，嚴(yán)重威脅患者的身體健康。臨床中梅毒螺旋體可通過(guò)性接觸、母嬰途徑傳播，醫(yī)療結(jié)構(gòu)多采用梅毒螺旋體抗體檢測(cè)鑒別梅毒螺旋體感染病例。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是臨床常用的梅毒螺旋體抗體檢測(cè)技術(shù)，具有經(jīng)濟(jì)性高、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，但存在假陽(yáng)問(wèn)題，容易出現(xiàn)誤診情況，影響醫(yī)師診斷梅毒疾病的準(zhǔn)確性[2]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)就術(shù)的不斷發(fā)展和完善，化學(xué)發(fā)光法（chemiluminescent immunoassay,CLIA）在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中得到了逐步應(yīng)用和推廣。為了尋找更加可靠的檢查方法，文章就TP-ELISA和CLIA在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的作用及準(zhǔn)確性進(jìn)行了比較，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年7月至2019年7月本中心接診的60例疑梅毒螺旋體感染患者為觀察對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：① 臨床檢查初篩為梅毒螺旋體感染患者；② 均行TP-ELISA、CLIA檢驗(yàn)；③ 患者同意配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病；② 血液系統(tǒng)疾??；③ 臨床資料缺失?；颊吣?3例，女27例，年齡（24～75）歲，平均（48.92±8.13）歲。患者均知情并同意參與研究。

1.2 方法 患者空腹經(jīng)肘靜脈采血5ml，抗凝處理后冷藏備用，使用美國(guó)Becakman Microfuge 20離心機(jī)離心處理15min，3 000r/min，取上清液。采用珠海麗珠試劑股份有限公司提供的梅毒螺旋體診斷試劑盒（CLIA法），利用雙抗原夾心法促使抗原夾心形成，使用DW-960洗板機(jī)洗滌后添加化學(xué)發(fā)光底物，檢測(cè)發(fā)光值（RLU），樣本OD值/Cutoff值（S/CO）≥1即可判定為陽(yáng)性[3]。采用DIVM-96V2酶標(biāo)分析儀、北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（ELISA法），借助雙抗原夾心法檢測(cè)血清梅毒螺旋體抗體，S/CO≥1即可判定為陽(yáng)性[4]。以免疫印跡法（WB）為金標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證檢驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)印跡膜上無(wú)特異性條帶或無(wú)顯色帶出現(xiàn)時(shí)，即可判斷為陰性，當(dāng)印跡膜上出現(xiàn)相對(duì)分子質(zhì)量為47 000、45 000、17 000或15 000的1條及1條以上的特異性條帶時(shí)，即可判定為陽(yáng)性[5]。所使用試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 觀察指標(biāo) ① 以免疫印跡法（WB）為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)CLIA、TP-ELISA兩種檢查方法在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的結(jié)果。② 評(píng)價(jià)TP-ELISA和CLIA兩種檢查方法診斷梅毒螺旋體感染的效能，包括準(zhǔn)確性、敏感性、特異性、漏診率和誤診率，敏感性=真陽(yáng)性÷（真陽(yáng)+假陰性），特異性=真陰÷（真陰+假陽(yáng)性），準(zhǔn)確性=（真陽(yáng)+真陰）÷總數(shù)，漏診率=假陰性÷（真陽(yáng)+假陰性），誤診率=假陽(yáng)性÷（真陰+假陽(yáng)性）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將數(shù)據(jù)錄至SPSS 23.0，以t檢驗(yàn)定量資料（±s），以X2檢驗(yàn)定性資料（n，%），P＜0.05表明有差異。

2 結(jié)果

2.1 TP-ELISA和CLIA在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的結(jié)果對(duì)比 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知，60例疑似梅毒螺旋體感染者中包括梅毒螺旋體感染患者21例，未感染患者39例。以此為參照，CLIA、TP-ELISA兩種檢查方式診斷梅毒螺旋體感染的結(jié)果如表1所示。

表1 TP-ELISA和CLIA在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的結(jié)果對(duì)比

2.2 TP-ELISA和CLIA診斷梅毒螺旋體感染的準(zhǔn)確性分析 CLIA診斷梅毒螺旋體感染的準(zhǔn)確性高于TP-ELISA，敏感性、特異性、漏診率、誤診率與TPELISA比較無(wú)明顯差異，詳見(jiàn)表2。

表2 TP-ELISA和CLIA診斷梅毒螺旋體感染的準(zhǔn)確性分析（n，%）

3 討論

目前全球每年新增梅毒螺旋體感染患者約為1 200萬(wàn)，現(xiàn)已成為世界各國(guó)廣泛關(guān)注的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。臨床中早期診斷、及時(shí)治療對(duì)控制梅毒螺旋體傳染產(chǎn)生著深遠(yuǎn)的影響，而血清學(xué)檢測(cè)是當(dāng)前診斷梅毒螺旋體感染的主要手段。梅毒血清學(xué)試驗(yàn)主要包括梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)和非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)檢測(cè)，其中梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)是臨床常用的梅毒螺旋體感染診斷方法。人體在感染梅毒螺旋體后，會(huì)經(jīng)過(guò)3周左右的潛伏期，入侵局部即會(huì)呈硬下疳狀態(tài)，約（4～10）周后人體血清內(nèi)即會(huì)生成相應(yīng)的抗類(lèi)脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素、抗梅毒螺旋體抗體，因此可通過(guò)非特異性梅毒螺旋體血清試驗(yàn)，進(jìn)行初篩，通過(guò)特異性梅毒螺旋體抗體檢測(cè)的方式診斷梅毒螺旋體感染患者[6-7]。

TP-ELISA檢測(cè)主要通過(guò)將梅毒特異性抗原包被在微孔板上，借助雙抗原夾心法測(cè)定血清梅毒螺旋體抗體，通過(guò)酶的放大作用，減少假陰、假陽(yáng)性情況，具有較高的敏感性和特異性，是臨床篩查梅毒螺旋體感染病例的常用方式[8]。但在實(shí)際應(yīng)用中的干擾因素較多，容易出現(xiàn)假陽(yáng)結(jié)果。因此有必要探索更加準(zhǔn)確的檢測(cè)路徑。

本次研究結(jié)果顯示，CLIA檢測(cè)診斷梅毒螺旋體感染的準(zhǔn)確性為98.33%，高于TP-ELISA檢測(cè)的86.67%，兩種方法診斷梅毒螺旋體感染的特異性、敏感性、誤診率、漏診率對(duì)比未見(jiàn)顯著性差異，說(shuō)明CLIA檢測(cè)在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中可為醫(yī)師鑒別梅毒螺旋體感染病例提供更加準(zhǔn)確的參考依據(jù)。分析后可知，ELISA法可通過(guò)酶標(biāo)記抗原、抗體在人體中的反應(yīng)過(guò)程，再經(jīng)洗滌操作去除其中的其他成分，并通過(guò)廣譜分析測(cè)取相應(yīng)的吸收值，鑒別梅毒螺旋體感染患者。結(jié)合本次實(shí)踐過(guò)程發(fā)現(xiàn)，TP-ELISA法在應(yīng)用中可能受攜帶污染因素、受檢者自身疾病因素的干擾，出現(xiàn)異常假陽(yáng)性情況。比如，不明原因的隨機(jī)污染會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，同時(shí)對(duì)于合并糖尿病、淋巴肉瘤、丙型肝炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、其他螺旋體感染等疾病的患者，其體內(nèi)會(huì)釋放自身抗體、嗜異性抗體、類(lèi)風(fēng)濕因子、治療性抗體等成分，此類(lèi)成分在TP-ELISA檢測(cè)的反應(yīng)過(guò)程中均存在吸附作用，容易誘發(fā)假的顯色反應(yīng)，干擾檢測(cè)結(jié)果。而CLIA檢測(cè)作為一種免疫檢測(cè)的全新技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)化檢測(cè)，具有操作快捷、精準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn)，減少了人為操作對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，改善了漏診、誤診情況。文章中CLIA漏診1例，無(wú)誤診發(fā)生，TP-ELISA檢測(cè)漏診3例，誤診5例，證實(shí)了這一觀點(diǎn)。

綜上所述，在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中應(yīng)用TPELISA和CLIA法均可有效檢出梅毒螺旋體感染患者，敏感性、特異性相當(dāng)，其中CLIA法檢測(cè)可有效提高梅毒螺旋體感染診斷的準(zhǔn)確性，為醫(yī)師判斷患者病情提供更加可靠的參考依據(jù)，具有重要的臨床應(yīng)用與推廣價(jià)值。