盧少芬 杜明儀 譚曉穎 龍海燕 陳雪英 張琦 陳馥如 盤(pán)琳

[摘要]目的探討全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液質(zhì)量的影響。方法選取2020年4月至2021年3月廣東省肇慶市中心血站使用上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋 T-200采集的200袋全血，按照其血袋說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行當(dāng)天過(guò)濾操作，并對(duì)其過(guò)濾時(shí)間實(shí)施監(jiān)控，分別按濾除時(shí)間為5 min、10 min、15 min、20 min 劃分成四組，收集400份濾前及濾后血液樣本作為研究對(duì)象，通過(guò)比較過(guò)濾前后的全血容量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量及儲(chǔ)存期末溶血率等指標(biāo)差異，分析全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液質(zhì)量的影響。結(jié)果①隨著全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間的增加，過(guò)濾后血液容量無(wú)顯著變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05），但血液當(dāng)中白細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）;②隨著全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間的增加，過(guò)濾后血液當(dāng)中的血紅蛋白含量無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05），但儲(chǔ)存期末溶血率逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05），過(guò)濾時(shí)間20 min 有出現(xiàn)儲(chǔ)存期末溶血率>0.8%、質(zhì)量檢測(cè)不達(dá)標(biāo)的情況。結(jié)論全血過(guò)濾時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液質(zhì)量有明顯的影響，為了保證去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，

200 ml 全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間最佳在10min，最長(zhǎng)不宜超過(guò)20 min。[關(guān)鍵詞]全血過(guò)濾;白細(xì)胞;容量;白細(xì)胞計(jì)數(shù);血紅蛋白;溶血率

[中圖分類(lèi)號(hào)] R457? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A?? [文章編號(hào)]2095-0616（2021）23-0186-04

Study on the effect of filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality

LU? Shaofen??? DU? Mingyi??? TAN? Xiaoying??? LONG? Haiyan??? CHEN? Xueying??? ZHANG? QiCHEN? Furu??? PAN? Lin

Central Blood Station of Zhaoqing City in Guangdong Province， Guangdong， Zhaoqing 526040， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality. Methods A total of 200 bags of whole blood collected at the Central Blood Station of Zhaoqing City in Guangdong Province from April 2020 to March 2021， using the disposable leukocyte depletion filter blood bag T-200 produced by Shanghai Blood Transfusion Technology Co.， Ltd.， were filtered in the same day according to the instructions of the blood bag， and the filtration time was monitored. These collected bags were divided into 4 groups according to the filtration time of 5 min， 10 min， 15 min and 20 min. Collectively， 400 pre-filtration and post-filtration blood samples were collected as the objects. The differences of whole blood volume， leukocyte count， hemoglobin content and hemolysis rate at the end of storage were compared before and after filtration， and the effect of the filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality was analyzed. Results ① With the increase of filtration time of leukocyte in whole blood， the blood volume did not change significantly after filtration， with no statistically significant difference （P >0.05）， but the leukocyte count in blood decreased significantly， with statistically significant difference （P <0.05）.② With the increase of filtration time of leukocyte in whole blood， the hemoglobin content in the whole blood had no significant change， with no statistically significant difference （P >0.05）， but the hemolysis rate at the end of the storage period gradually increased， with statistically significant difference （P <0.05）. After filtering for 20 min， the hemolysis rate at the end of storage period was more than 0.8%， and the quality did not meet the standard. Conclusion The length of whole blood filtration time has a significant effect on blood quality. In order to ensure the preparation quality of leukocyte-free blood， the best time to filter leukocytes from 200 ml of whole blood is 10 min and should not exceed 20 min.

[Key words] Whole blood filtration;Leukocyte; Volume;Leukocyte count;Hemoglobin;Hemolysis rate

過(guò)濾白細(xì)胞是輸血界公認(rèn)對(duì)臨床輸血有益的一項(xiàng)技術(shù)，國(guó)內(nèi)許多血站及血液中心都開(kāi)展了血液濾白的新技術(shù)和研究。目前去除血液中白細(xì)胞的方法有很多，其中以過(guò)濾法最為理想。過(guò)濾法指采用白細(xì)胞專(zhuān)用濾器濾除血液制劑中的白細(xì)胞，但濾除效果與所使用的濾器類(lèi)型、血液制備方法、白細(xì)胞過(guò)濾時(shí)間等息息相關(guān)[1-2]。如何盡可能減少白細(xì)胞濾器對(duì)其他血液成分造成影響，同時(shí)又能最大限度去除血液中的白細(xì)胞，提高紅細(xì)胞收集率，成為采供血機(jī)構(gòu)共同關(guān)注的焦點(diǎn)。為提高去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，減少全血過(guò)濾失敗或引起的溶血性報(bào)廢，本研究通過(guò)建立全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液質(zhì)量的影響的研究課題，以期為臨床安全用血和成分制備工作提供理論指導(dǎo)與參考借鑒，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋 T-200（上海輸血技術(shù)有限公司）、血液過(guò)濾管理儀（佛山沃塘醫(yī)療科技有限公司）、SE250熱合機(jī)（韓國(guó)森通）、儲(chǔ)血冰箱（日本三洋）、BC-3000Plus 全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）、722型光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）、HH-US-B 恒溫水浴箱（金壇區(qū)金城春蘭實(shí)驗(yàn)儀器廠）、CX31生物顯微鏡（OLYMPUS）、大容量Nageotte血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤(pán)（德國(guó)進(jìn)口）;血漿游離血紅蛋白測(cè)定試劑盒、白細(xì)胞稀釋液、血細(xì)胞分析用溶血?jiǎng)?、稀釋液、沖洗液等，均在有效期內(nèi)使用。

1.2方法

本研究經(jīng)肇慶市中心血站學(xué)術(shù)委員會(huì)同意，以400份血液樣本作為研究對(duì)象，選取2020年4月至2021年3月使用上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋 T-200，順暢采集200 ml 全血，采集后置于2～6℃冰箱內(nèi)3 h 以上，按照其血袋說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行當(dāng)天過(guò)濾操作，并對(duì)其過(guò)濾時(shí)間實(shí)施監(jiān)控。分別按濾除時(shí)間為5 min、10 min、15 min、20 min 劃分成四組，每組含濾前全血及濾后全血樣本各50份，稱(chēng)量過(guò)濾前和過(guò)濾后的全血重量，并做好標(biāo)識(shí)。采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)濾前和濾后的標(biāo)本，測(cè)定濾前白細(xì)胞的含量和血紅蛋白含量，以及濾后的血紅蛋白含量和血細(xì)胞比容（hematocrit，Hct）;根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程》[3]要求，通過(guò)結(jié)晶紫染色液使白細(xì)胞著色，使用大容量Nageotte血細(xì)胞計(jì)數(shù)板方法，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，檢測(cè)濾過(guò)血液的白細(xì)胞殘留量;使用游離血紅蛋白測(cè)定試劑盒檢測(cè)血漿游離血紅蛋白的濃度，結(jié)合Hct計(jì)算出溶血率。本研究去白細(xì)胞全血質(zhì)量控制項(xiàng)目和要求如下：外觀肉眼觀察應(yīng)無(wú)色澤異常、溶血、凝塊、氣泡及重度乳糜等情況，血袋完好，并保留注滿(mǎn)全血經(jīng)熱合的導(dǎo)管至少35 cm，血紅蛋白含量≥18 g、白細(xì)胞殘留量≤2.5×106個(gè)，儲(chǔ)存期末溶血率<0.8%，無(wú)菌試驗(yàn)為無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。

1.3觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求》[4]中去白細(xì)胞全血質(zhì)量控制項(xiàng)目和要求：來(lái)源于200 ml 全血;觀察全血過(guò)濾白細(xì)胞過(guò)濾前后的血液容量、白細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量、儲(chǔ)存期末溶血率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x ±s）表示，組間比較采用 t 檢驗(yàn)，P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液容量及白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響

隨著全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間的增加，過(guò)濾后血液容量無(wú)顯著變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05），但血液當(dāng)中白細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）。見(jiàn)表1。

2.2全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血紅蛋白及儲(chǔ)存期末溶血率的影響

隨著全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間的增加，過(guò)濾后血液當(dāng)中的血紅蛋白含量無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05），但儲(chǔ)存期末溶血率逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）;過(guò)濾時(shí)間在5 min、10 min、15 min 的200 ml 去白細(xì)胞全血均符合質(zhì)量要求，過(guò)濾時(shí)間達(dá)20 min 有出現(xiàn)儲(chǔ)存期末溶血率>0.8%、質(zhì)量檢測(cè)不達(dá)標(biāo)的情況。見(jiàn)表2。

3討論

近年來(lái)，肇慶市各臨床醫(yī)院對(duì)去白細(xì)胞血液的需求量不斷增長(zhǎng)，供需矛盾十分突出，據(jù)統(tǒng)計(jì)2020年去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的臨床用血總量為17213 U，而2015年僅為7357.5 U，五年的增幅為134%。從增幅情況來(lái)看，分析原因可能為：一是肇慶市地中海貧血患者的用血量及地中海貧血患者的數(shù)量均增加，二是去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的臨床應(yīng)用更為廣泛。肇慶市是廣東省地中海貧血防控項(xiàng)目重點(diǎn)地區(qū)之一，目前我市登記在冊(cè)的地中海貧血患兒已逾300多人，由于社會(huì)對(duì)地貧的防控措施和宣傳不到位，地中海貧血患兒還在增加，盡管目前有造血干細(xì)胞移植等先進(jìn)的治療手段，但由于其治療費(fèi)用昂貴以及術(shù)后的各種并發(fā)癥等，常使患者無(wú)法徹底得到根治，需要長(zhǎng)期輸血，而輸注去白細(xì)胞血液在一定程度上減少同種異體輸血反應(yīng)及降低機(jī)體免疫功能的破壞等，對(duì)于有條件的地中海貧血患者是重要的輸血治療措施。同時(shí)人們對(duì)血液質(zhì)量、輸血治療和輸血安全有了更高層次的需求，在輸血中引起的不良反應(yīng)逐漸被重視，超過(guò)90%的輸血不良反應(yīng)與白細(xì)胞相關(guān)，如非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)、HLA 同種異體免疫反應(yīng)等[5-6]，同時(shí)白細(xì)胞還是一些嗜白細(xì)胞病毒如巨細(xì)胞病毒的載體，輸注含白細(xì)胞的血液具有傳染這些病毒的危險(xiǎn)，嚴(yán)重威脅醫(yī)療技術(shù)安全及患者的生命健康[7-8]，臨床醫(yī)生也逐漸意識(shí)到輸注去白細(xì)胞血液是提高臨床用血安全和醫(yī)療質(zhì)量的關(guān)鍵[9]。

實(shí)現(xiàn)安全輸血對(duì)提高人民群眾的健康水平具有巨大的社會(huì)效益，是每一位血液工作者追求的崇高目標(biāo)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，全血在儲(chǔ)存過(guò)程中會(huì)發(fā)生白細(xì)胞死亡崩解，白細(xì)胞死亡崩解后能夠分泌一些生物活性分子（如白介素、腫瘤壞死因子），這些生物活性分子會(huì)導(dǎo)致輸血時(shí)發(fā)生過(guò)敏等不良反應(yīng)，如果在血液保存前過(guò)濾白細(xì)胞不但可以讓紅細(xì)胞免受白細(xì)胞介導(dǎo)所致溶血的影響，提高血液保存過(guò)程中紅細(xì)胞的質(zhì)量，還可以降低輸血過(guò)程中相關(guān)的不良反應(yīng)[10-11]，而且不同的保存溫度、濾材及放置時(shí)間等均會(huì)影響血液質(zhì)量，但鮮有研究報(bào)道不同過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間對(duì)血液質(zhì)量的影響[12-13]。本研究通過(guò)對(duì)全血過(guò)濾白細(xì)胞的時(shí)間實(shí)施監(jiān)控，分析不同流速時(shí)間對(duì)血液質(zhì)量的影響，以期找到最佳、最適宜的流速時(shí)間，及時(shí)采取干預(yù)措施，提高去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，減少全血過(guò)濾白細(xì)胞失敗或引起的溶血性報(bào)廢，避免血液資源的浪費(fèi)。與本技術(shù)類(lèi)似的是丁國(guó)良等研究表明，全血400 ml 白細(xì)胞濾除時(shí)間應(yīng)不低于15 min。白細(xì)胞介素檢測(cè)結(jié)果顯示，第2天沒(méi)有太多白細(xì)胞死亡，采血當(dāng)天濾除和第2天濾除效果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，只是不能得到新鮮冰凍血漿[14]。然而該研究?jī)H針對(duì)“400 ml 血液濾除多長(zhǎng)時(shí)間為最佳及新采集的血液什么時(shí)間濾除最好”進(jìn)行了探討，但在目前肇慶市大多數(shù)獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血量仍為200 ml 為主。本研究主要是根據(jù)200 ml 全血去除白細(xì)胞的不同過(guò)濾時(shí)間來(lái)檢測(cè)對(duì)血液質(zhì)量的影響，采用的是上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)的一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋和當(dāng)天濾除白細(xì)胞的制備方法，選擇的研究對(duì)象是濾前及濾后的血液樣本，盡量減少血液樣本受其他因素影響的差異性，并對(duì)其制備的血液成分進(jìn)行質(zhì)量抽檢，得出的數(shù)據(jù)更完整更具有說(shuō)服力。雖然丁國(guó)良的方法相比本研究技術(shù)更節(jié)省時(shí)間，但對(duì)于濾前血液中的白細(xì)胞數(shù)量并沒(méi)有監(jiān)測(cè)，濾除時(shí)間與效果仍有待進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究通過(guò)400份血液樣本（含濾前全血及濾后全血樣本），按濾除時(shí)間為5 min、10 min、15 min、20 min 劃分成四組，分別檢測(cè)其濾前及濾后全血樣本，項(xiàng)目包括血液容量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、儲(chǔ)存期末溶血率等，并進(jìn)行數(shù)據(jù)比較分析，結(jié)果顯示使用同一材質(zhì)濾器血袋和濾前溫度，四組濾后血液容量、血紅蛋白含量比較雖然無(wú)明顯變化，過(guò)濾時(shí)間在5 min、10 min、15 min 的200 ml 去白細(xì)胞全血均符合質(zhì)量要求，但過(guò)濾時(shí)間達(dá)20 min 有出現(xiàn)儲(chǔ)存期末溶血率>0.8%、質(zhì)量檢測(cè)不達(dá)標(biāo)的情況。從表1、表2數(shù)據(jù)可以看出全血過(guò)濾時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液質(zhì)量有顯著影響，過(guò)濾時(shí)間過(guò)短會(huì)影響過(guò)濾效果，容易造成白細(xì)胞殘留量過(guò)高、過(guò)濾效果差;過(guò)濾時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響儲(chǔ)存期末溶血率，容易引起血漿溶血性報(bào)廢，造成血液資源的浪費(fèi)。研究認(rèn)為200 ml 全血過(guò)濾時(shí)間最佳在10 min，最長(zhǎng)不宜超過(guò)20 min，此時(shí)血液當(dāng)中白細(xì)胞殘留量、血紅蛋白含量、儲(chǔ)存期末溶血率均能維持在較好的質(zhì)量控制范圍，若超出20 min 應(yīng)及時(shí)采取干預(yù)措施，因?yàn)榱魉龠^(guò)慢，可能會(huì)導(dǎo)致堵塞，亦有可能加大白細(xì)胞從濾網(wǎng)中漏出的風(fēng)險(xiǎn)，可能激活凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致過(guò)濾后血液微小凝聚[15-16]。而在血液成分制備工作中發(fā)現(xiàn)，去白細(xì)胞全血經(jīng)離心后肉眼觀察血漿呈紅色，再經(jīng)二次離心后，血漿仍為紅色報(bào)廢的，往往全血過(guò)濾時(shí)間超過(guò)20 min。如果能發(fā)現(xiàn)過(guò)濾時(shí)間異常，血流過(guò)慢，及時(shí)查找原因，采取干預(yù)措施，可將損失降到最低。

綜上所述，本研究通過(guò)全血過(guò)濾白細(xì)胞時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)血液質(zhì)量的影響研究，找到最佳、最適宜的過(guò)濾時(shí)間，有利于提高去白細(xì)胞血液的制備質(zhì)量，確保臨床用血安全、有效，更能較好地避免血液資源浪費(fèi)。由于血液去除白細(xì)胞技術(shù)比較復(fù)雜，影響因素較多，本研究?jī)H對(duì)過(guò)濾時(shí)間長(zhǎng)短進(jìn)行了探索，存在一定的局限性，后續(xù)將進(jìn)一步探討血液溫度、儲(chǔ)存時(shí)間等對(duì)血液質(zhì)量的影響，以期為進(jìn)一步提升血液制備質(zhì)量奠定更為全面的理論依據(jù)。

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（收稿日期：2021-04-27）