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CD94_rs2302489和NKG2A 基因多態(tài)性與類風濕性關(guān)節(jié)炎易感性和預后的關(guān)系

2021-09-26 02:21:34王淑云劉宇宏霍愛鑫延安大學附屬醫(yī)院風濕免疫科延安716000
中國免疫學雜志 2021年17期
關(guān)鍵詞:易感性等位基因多態(tài)性

李 靜 高 鵬 王淑云 劉宇宏 霍愛鑫 (延安大學附屬醫(yī)院風濕免疫科,延安 716000)

類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種全身性自身免疫性疾病,疾病晚期可能出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形和功能障礙,嚴重危害人類健康[1]。RA 病因復雜,內(nèi)源性或環(huán)境因素均可觸發(fā)遺傳易感個體自身免疫反應(yīng),導致疾病進展[2]。據(jù)估計,至少50%RA發(fā)病風險由遺傳因素決定[3]。RA 發(fā)病機制尚未明確,研究表明,自然殺傷(nature kill,NK)細胞和T 細胞均參與RA 發(fā)生發(fā)展[4-5]。以上細胞功能(包括細胞毒活性和細胞因子釋放)由NK細胞和T細胞各受體傳導的抑制和激活信號平衡調(diào)節(jié)。

NK 細胞和T 細胞的效應(yīng)反應(yīng)可通過CD94/NKG2 分子進行調(diào)節(jié),CD94/NKG2A 是 NK 細胞和 T淋巴細胞亞群上表達的抑制性受體,可識別呈遞標準HLAⅠ類衍生肽的非經(jīng)典MHCⅠb類人白細胞抗原 E(HLA-E)配體[6]。表達 HLA-E 的細胞與 NK 細胞的主要相互作用是HLA-E 與CD94/NKG2A 抑制受體間的反應(yīng)[7]。CD94/NKG2A-HLA-E 通路可誘導一系列抑制信號,從而抑制NK 細胞毒活性和細胞因子產(chǎn)生。

CD94/NKG2A 受體影響 NK 細胞和 T 細胞調(diào)節(jié)并參與自我耐受維持,其調(diào)節(jié)缺陷可能同時影響先天和適應(yīng)性免疫應(yīng)答,導致自我耐受和自身免疫反應(yīng)崩潰。因此,這些分子可能RA 發(fā)展的重要促進因素。目前,CD94/NKG2A 多態(tài)性鮮有研究,因此,本研究探究CD94/NKG2A 多態(tài)性對RA 易感性的潛在影響,并評估CD94/NKG2A 多態(tài)性與抗TNF 治療預后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料 選取 2016 年 12 月至 2018 年 12 月我院接受治療的RA患者290例,我院體檢中心體檢的健康受試者130 例,所有患者均符合2010 年美國風濕病學會(ACR)/歐洲風濕病聯(lián)盟(EULAR)制定的RA 分類標準,抗TNF 治療前,疾病活動度評分(DAS28)>5.1,且至少對2 種疾病修飾型抗風濕藥物(DMARDS)治療無效。本研究經(jīng)我院倫理審查委員會批準,參與知情同意。排除標準:①肝、腎功能嚴重受損者;②除RA 外還伴有其他全身性結(jié)締組織疾病者;③患有糖尿病未得到控制者。

1.2 方法

1.2.1 患者一般信息評價 評估基線及抗TNF 治療后第12 周和第24 周患者臨床特征,采用DAS28評分評估患者疾病活動,根據(jù)EULAR反應(yīng)標準評估臨床反應(yīng)。反應(yīng)良好:和基線相比,ΔDAS28>1.2,且DAS28≤3.2;中度反應(yīng):ΔDAS28>1.2,且DAS28>3.2,0.6<ΔDAS28≤1.2,且 DAS28≤5.1;無反 應(yīng) :ΔDAS28≤0.6,0.6<ΔDAS28≤1.2,DAS28>5.1(表1)。

表1 患者臨床特征[,n=290,例(%)]Tab.1 Patients characteristics[,n=290,n(%)]

表1 患者臨床特征[,n=290,例(%)]Tab.1 Patients characteristics[,n=290,n(%)]

Note:CRP.C-reactive protein;RF.Rheumatoid factor;anti-CCP. Anticyclic citrullinated peptide antibodies.

51.52±11.54 226(77.9)12.63±8.21 39.32±12.32 6.45±0.72 24.35±35.56 191(65.9)277(95.5)150(51.7)124(42.8)266(91.7)270(93.1)Clinical characteristics Age(year)Female Disease duration(year)Disease onset(year)DAS28 at baseline CRP at baseline RF positive Anti-CCP+Anti-TNF drugs Etanercept Adalimumab Glucocorticosteroids Methotrexate

1.2.2 單核苷酸多態(tài)性(SNPs)選擇和基因分型 采用文獻及SNPinfo 網(wǎng)站獲得的功能預測,選擇CD94 和NKG2A 基因內(nèi)的多態(tài)性。EDTA 抗凝管采集受試者外周血,根據(jù)說明書采用DNA 純化試劑盒提取DNA。采用實時PCR LightSNiP 分析技術(shù)測定CD94(rs2302489)、NKG2A(rs7301582、rs2734440、rs2734414)多態(tài)性,采用LightCycler 480實時PCR系統(tǒng)進行反應(yīng)。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用R3.0.2軟件進行統(tǒng)計學分析。群體遺傳學包評估基因型頻率的Hardy-Wein?berg 平衡,F(xiàn)isher 精確檢驗比較患者和對照組等位基因、基因型和單倍型頻率,F(xiàn)isher 精確檢驗評價SNPs 對抗 TNF 治療的影響,PHASE CD94 和 NKG2A基因的4個SNPs組合進行單倍型重建,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CD94、NKG2A 基因型和等位基因在 RA 患者和健康對照組中的分布 RA 患者和對照組基因型頻率與Hardy-Weinberg平衡模型預測的基因型頻率一致。CD94 多態(tài)性與RA 風險相關(guān),與對照組相比,患者CD94 AA 基因型頻率顯著降低(OR=0.43,95%CI:0.21~0.89,P=0.025),與 AA 純合子相比,CD94 TT 基因型在患者中占主導地位(OR=1.98,95%CI:0.94~4.22,P=0.042,表 2),患者和對照組未觀察到其他SNPs相關(guān)性。

表2 CD94和NKG2A等位基因、基因型和單倍型在RA患者和健康對照組中的分布[例(%)]Tab.2 Distribution of CD94 and NKG2A alleles,genotypes and haplotypes in RA patients and healthy control[n(%)]

2.2 RA 患者CD94/NKG2A 基因多態(tài)性與抗CCP抗體的關(guān)系 抗CCP 抗體陽性RA 患者CD94 TT 基因型頻率明顯高于抗CCP抗體陰性患者(OR=8.76,95%CI:1.19~387.50,P=0.034,圖 1);相反,CD94 AA 純合子在抗CCP抗體陰性患者中更為常見(OR=11.29,95%CI:2.38~52.26,P=0.002)。此外,等位基因A 與抗CCP 抗體陰性顯著相關(guān)(OR=5.01,95%CI:1.87~14.95,P=0.003)。

圖1 CD94 rs2302489多態(tài)性與抗CCP抗體存在的相關(guān)性Fig.1 Association of CD94 rs2302489 polymorphism with presence of anti-CCP

2.3 CD94 和 NKG2A 基因多態(tài)性對抗TNF 治療臨床結(jié)局的影響 CD94 A等位基因與抗TNF治療12周及24 周后更好的EULAR 反應(yīng)顯著相關(guān)(OR=1.91,95%CI:0.98~3.66,P=0.038,OR=1.64,95%CI:1.07~2.52,P=0.016,表 3)。24 周 EULAR 反應(yīng)良好患者中,CD94 AA 基因型頻率顯著升高(OR=3.07,95%CI:0.97~11.44,P=0.039)。與其他基因型的患者相比,CD94 TT 基因型患者12 周后緩解率較低(OR=3.31,95%CI:0.07~0.89,P=0.020)。

表3 第12周和第24周EULAR反應(yīng)與CD94和NKG2A多態(tài)性的關(guān)系[例(%)]Tab.3 Relationship of EULAR responses at 12 and 24 weeks with CD94 and NKG2A polymorphisms[n(%)]

此外,抗TNF 治療臨床結(jié)局與NKG2A rs7301582多態(tài)性相關(guān)。與其他基因型患者相比,攜帶NKG2A rs7301582 C 等位基因患者及NKG2A rs7301582 CC 基因型患者12 周后無反應(yīng)更為常見(OR=3.67,95%CI:1.13~18.94,P=0.015,OR=3.59,95%CI:1.02~19.42,P=0.028)。此外,與純合子患者相比,NKG2A rs2734440 AG 基因型患者12 周后 EULAR 良好/中度反應(yīng)更為頻繁(OR=3.26,95%CI:1.11~11.63,P=0.024),與其他基因型患者相比,NKG2A rs2734440 AA基因型攜帶者一般治療無效(OR=2.79,95%CI:1.05~7.98,P=0.025)。對NKG2A rs2734414 進行的分析未能證明與EULAR反應(yīng)顯著修改。

2.4 CD94/NKG2A 單倍型分析 共鑒定出12個單倍型,本研究選擇其中6 個最常見的單倍型(TTCA、ATCA、TATG、TTCG、ATCG 和AATG)進一步分析,RA 患者與對照組所選單倍型頻率差異無統(tǒng)計學意義,僅有1 種TATG 單倍型在RA 患者中比對照組更為常見(OR=1.97,95%CI:1.10~3.64,P=0.021,表2)。

3 討論

本研究表明,RA 易感性可能與CD94 多態(tài)性有關(guān)。RA 患者CD94 rs2302489 AA 基因型頻率顯著低于對照組。CD94 多態(tài)性也影響RA 患者抗TNF治療臨床療效。CD94 AA 基因型患者更易緩解,而CD94 TT 基因型在EULAR 反應(yīng)較差的患者中更為普遍。表明AA 基因型可能保護機體免受RA 發(fā)展侵襲,療效更好,而TT 基因型有益于RA 發(fā)展,且對抗TNF 治療反應(yīng)更差。研究表明,中國受試者中,T等位基因與白塞病風險降低相關(guān),但這種效應(yīng)僅觀察于等位基因水平,并未與易感性相關(guān)基因型相關(guān)[8]。

本研究發(fā)現(xiàn),RA 患者抗TNF 治療的臨床結(jié)局與NKG2A 多態(tài)性相關(guān)。NKG2A rs2734440 AA 基因型在抗TNF 治療無反應(yīng)患者中更為豐富,且與治療無效相關(guān),但其基因型在患者和健康對照組間分布無差異,與關(guān)于NKG2A rs2734440多態(tài)性的研究(自身免疫性疾病的易感性)結(jié)果矛盾。中國患者中,NKG2A rs2734440 AA 基因型與白塞病風險顯著增加和RA 風險降低相關(guān)[8-9]。研究差異可能反映不同地區(qū)、不同環(huán)境因素的遺傳異質(zhì)性,或可能由于樣本量相對有限導致。

CD94 和 NKG2A 在 RA 易感性和調(diào)節(jié)抗 TNF 藥物反應(yīng)機制尚未闡明。CD94 rs2302489(UTR-5 區(qū)域,包含1 個可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點)及NKG2Ars7301582和rs2734440(內(nèi)含子區(qū)域)多態(tài)性可能影響轉(zhuǎn)錄或選擇性剪接產(chǎn)生不同產(chǎn)物,部分可能有助于RA 發(fā)病或干擾抗TNF 治療[10]。但這些假設(shè)需要進一步遺傳和功能研究,以闡明這些多態(tài)性在RA發(fā)病機制中的作用。

考慮到CD94/NKG2A 受體的作用,體外觀察顯示,CD94/NKG2A 阻斷抗體存在下,TNF-α 和 IFN-γ產(chǎn)量增加,說明CD94/NKG2A 可能在調(diào)節(jié)炎癥細胞因子產(chǎn)生中發(fā)揮作用[11]。另外在新發(fā)牛皮癬患者中觀察到NK 細胞上CD94/NKG2A 受體表面表達降低[12]。說明CD94/NKG2A受體下調(diào)可能阻止CD94/NKG2A 介導的NK 細胞對表達HLA-E 的靶細胞的抑制并影響活化受體和抑制受體平衡。NK 細胞過度活化反過來誘導NK 細胞介導的靶細胞裂解及過度促炎細胞因子產(chǎn)生,有助于疾病發(fā)生和發(fā)展。此外,CD94/NKG2A 受體也與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)發(fā)病有關(guān),與對照組相比,這些分子在患者T細胞上表達減少[13]。關(guān)于RA 的發(fā)病機制,已有研究表明,與活動性疾病相比,緩解的RA 患者CD94/NKG2A受體在T 細胞上的表達升高[14]。綜上,可以假設(shè)由CD94/NKG2A 抑制信號下調(diào)引起的NK 和T 細胞活化不足可能導致自身耐受性下降,免疫細胞向自身組織侵襲并導致自身免疫反應(yīng)。

總之,本研究證明CD94 基因多態(tài)性可能是RA易感性的潛在候選基因,是第一個涉及CD94/NKG2A 多態(tài)性對RA 患者抗TNF 治療功效的研究,需要進一步研究其多態(tài)性在RA發(fā)病機制中的作用。

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