王傳杰 馮健男 王 晶

（軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學(xué)國家重點實驗室，北京100850）

在過去的30年里，單克隆抗體（monoclonal anti?body，mAb）的研發(fā)和優(yōu)化技術(shù)已經(jīng)取得了長足的發(fā)展，現(xiàn)階段治療性單克隆抗體藥物已經(jīng)廣泛應(yīng)用于自身免疫病、腫瘤以及病毒感染等疾病的臨床治療或預(yù)防，且已成為生物制品類藥物中發(fā)展最快的一類。學(xué)者們在長期研究中除了重點關(guān)注抗體結(jié)構(gòu)的優(yōu)化，還針對抗體穩(wěn)定性的各種影響因素提供了諸多解決方案，以此降低抗體藥物的開發(fā)、儲存成本，并提高其臨床療效［1-3］。本文簡要回顧了近些年單克隆抗體穩(wěn)定性的影響因素和理化機(jī)制以及抗體穩(wěn)定性改造方案等方面的研究進(jìn)展。

1 抗體分子結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性研究意義

1.1 抗體分子結(jié)構(gòu) 抗體是指由機(jī)體產(chǎn)生能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白?？贵w由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來的漿細(xì)胞分泌產(chǎn)生，每個B 淋巴細(xì)胞株只能產(chǎn)生一種它專有的、針對一種特異性抗原決定簇的抗體。這種從一株單一細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體就叫單克隆抗體（mAb），簡稱單抗。常規(guī)的單抗分子是由兩條重鏈（HC）及兩條輕鏈（LC）通過鏈間二硫鍵連接成“Y”形結(jié)構(gòu)（圖1），它又可分為3 個功能組分：兩個抗原結(jié)合片段（Fab）和一個結(jié)晶區(qū)（Fc），兩個Fab 通過鉸鏈區(qū)連接到Fc，且構(gòu)象變化相比于Fc 更為靈活。由來自重鏈和輕鏈的一對可變區(qū)（VH 和VL）組成 Fab 的 Fv 區(qū)，通常 Fv 區(qū)被糖基化修飾，是決定抗體如何與適應(yīng)性免疫及體液免疫系統(tǒng)中的其他成分相互作用的關(guān)鍵。

圖1 完整IgG 抗體帶狀圖［來源：蛋白結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫（PDB）；ID：1igt］Fig.1 Complete structure of IgG［From：Protein Data Bank（PDB）；ID：1igt］

1.2 穩(wěn)定性研究意義 研究發(fā)現(xiàn)，某些單克隆抗體藥物雖然在體外實驗中表現(xiàn)出良好的藥物活性，但在進(jìn)入臨床試驗階段卻會遭遇到體內(nèi)活性降低的問題［4］。因此在藥物研發(fā)的初期就要兼顧其藥效動力學(xué)的問題。抗體藥物的穩(wěn)定性是影響抗體藥效動力學(xué)的關(guān)鍵因素之一，首先抗體的高親和力與高特異性都需要以穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，這是其正確行使生物學(xué)功能的保障。其次，抗體的穩(wěn)定性越高，則其新生肽鏈在細(xì)胞內(nèi)裝配時產(chǎn)生錯誤折疊（mis-folding）的概率越低，可溶性表達(dá)量也越高［5］。良好的熱穩(wěn)定性所帶來的緊湊結(jié)構(gòu)使抗體的蛋白酶切位點更不易暴露，并其影響藥品保質(zhì)期及存放條件，關(guān)系到藥物成本。目前，提高蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的方法主要有非共價修飾、化學(xué)修飾、添加蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、蛋白質(zhì)工程，以及在液體狀態(tài)利用礦化技術(shù)直接在蛋白表面形成磷酸鈣礦化外殼以提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性［6］。

由此可見，在保證抗體親和力及表達(dá)量等性質(zhì)不受太大影響的情況下，最大程度上提高其穩(wěn)定性，對抗體藥物的研發(fā)具有重要的現(xiàn)實意義。

2 影響抗體穩(wěn)定性的因素

2.1 抗體分子自身性質(zhì) 抗體分子一級結(jié)構(gòu)（蛋白序列）對其聚集性有著重要影響，例如當(dāng)抗體分子的等電點（pI）過高或過低時決定簇互補區(qū)（com?plementarity-determining region，CDR）都會促進(jìn)聚集，不同的是較低pI 的分子所產(chǎn)生的分子間靜電相互作用形成了可溶的聚集物，而較高pI 的分子，尤其是當(dāng)和帶有負(fù)電荷的容器表面接觸時，則會形成沉淀性聚集［7］。例如有研究比較了英夫利昔單抗（infliximab）及其仿制藥在強(qiáng)制性降解試驗（forced degradation）中的表現(xiàn)［8］，發(fā)現(xiàn)二者盡管在生產(chǎn)工藝和制造過程上有些許不同，但在該試驗中并未表現(xiàn)出明顯差異，說明一級結(jié)構(gòu)仍然在很大程度上決定了抗體分子的穩(wěn)定性。還有研究比較了IgG 分子的3 個亞型（IgG1、IgG2、IgG4）在分別經(jīng)過酸性處理（pH=3.3）之后的表現(xiàn)，結(jié)果IgG1 保持了單體形式，而另外兩個亞型均表現(xiàn)出二聚化傾向，且當(dāng)恢復(fù)到正常pH時導(dǎo)致IgG4形成聚集體［9］。該結(jié)果與pH在4～7 范圍內(nèi) IgG 亞型聚集性（IgG1

2.2 環(huán)境應(yīng)力因素 溫度：高溫能夠破壞單抗結(jié)構(gòu)，且通常不可逆，進(jìn)而導(dǎo)致聚集；同時伴隨溫度增高，脫酰胺和氧化反應(yīng)發(fā)生的概率也增加［12］。當(dāng)環(huán)境溫度下有50%左右的蛋白天然結(jié)構(gòu)展開時，將該溫度定義為熔解溫度（melting temperature，Tm），每種蛋白都有其Tm，一般該溫度范圍為40℃～80℃之間，而通常生物藥品儲存運輸?shù)臏囟仍?℃～8℃之間，遠(yuǎn)低于該溫度［13］。此外過低溫也會引起蛋白變性，尤其是在反復(fù)凍融的情況下。隨著凍融次數(shù)增加，會出現(xiàn)緩沖液pH 值下降、溶質(zhì)分子濃縮、水冰界面形成等因素的影響［14］。當(dāng)0.5 mg/ml 貝伐珠單抗（bevacizumab）溶液經(jīng)受1～30次凍融循環(huán)時，其單體峰通過（size exclusion chromatography，SEC）分析，發(fā)現(xiàn)隨著循環(huán)次數(shù)的增加而降低。在類似的研究中，對于固定數(shù)量的循環(huán)凍融（10 個循環(huán)），單體峰值隨著貝伐珠單抗?jié)舛鹊脑黾佣档?，這表明在較高濃度下凍融循環(huán)的穩(wěn)定性有所提高［15］。

光照：蛋白質(zhì)的芳香族殘基（以色氨酸殘基為主）對光照非常敏感，易發(fā)生光氧化形成氧化自由基，隨后發(fā)生斷裂和交聯(lián)，尤其是紫外光相較于白光影響更大［16］。有研究證實光照對蛋白質(zhì)二級和三級結(jié)構(gòu)的影響取決于其存在形式，通常凍干粉比液體制劑更能耐受光照。LUIS 等［17］通過采用ICH Q1B（International Council for Harmonisation，ICH Q1B conditions）推薦值（132 萬勒克斯小時）和環(huán)境光照強(qiáng)度（24 萬勒克斯小時）評估了兩種單克隆抗體的光穩(wěn)定性，結(jié)果顯示出巨大的差異，表明單抗藥物的光穩(wěn)定性取決于總的曝光量而不是光強(qiáng)度。SHAH 等［18］發(fā)現(xiàn)了在 ICH 光照條件下雖然總體上未觀察到明顯的抗體結(jié)構(gòu)變化，但CH2 結(jié)構(gòu)域仍然存在降解。蛋白質(zhì)藥物主要的光暴露發(fā)生在儲存運輸和給靜脈輸液患者用藥期間，因此在藥品應(yīng)用階段規(guī)避這一因素的影響就顯得尤為重要。

機(jī)械應(yīng)力：在單抗藥物生產(chǎn)使用過程中還會受到機(jī)械應(yīng)力（如攪拌或剪切力）的影響。研究證實由于疏水性基團(tuán)（主要是巰基）暴露，在該過程中形成了大量規(guī)格在1.5～80 μm 不等的聚集體，且聚集水平與氣-液界面積呈指數(shù)關(guān)系［19］。藥物制劑在通過輸液管或注射器時會產(chǎn)生剪切力作用，已有研究報道了高濃度單抗溶液的剪切稀化現(xiàn)象（剪切力下黏度的降低），這可能與自身聚集的單抗分子解離有關(guān)，但目前尚不清楚過濾過程中的剪切力是否會引起其他改變［20］。

2.3 存儲方式因素 濃度：高濃度下的單抗制劑由于黏度增加，分子間相互作用增強(qiáng)也會促進(jìn)聚集［21］。HAUPTMANN 等［22］發(fā)現(xiàn)高濃度僅僅會增加制劑中小顆粒的數(shù)量，而分子量大的聚集物反而減少了；NICOUD 等［23］則觀察到聚集物隨濃度增加而增加的現(xiàn)象。有研究指出，雖然降低抗體濃度可以使結(jié)合性較弱的聚集體解離，但若不同時改變抗體分子與輔料的比例，則會稀釋藥物制劑中的輔料（具有保護(hù)性的糖類、表面活性劑或精氨酸），影響了溶液本身的pH 值和離子強(qiáng)度，導(dǎo)致抗體分子化學(xué)穩(wěn)定性降低［24］。此外，蛋白質(zhì)分子自身具備聚合傾向，是由分子間的電荷相互作用所主導(dǎo)，且受溶液的離子強(qiáng)度影響［25］。

包裝：除對單抗藥物固有屬性及結(jié)構(gòu)的優(yōu)化外，也不能忽略在現(xiàn)有生產(chǎn)條件下包裝存儲方式的影響。蛋白質(zhì)作為表面活性分子，有吸附到疏水界面的傾向從而導(dǎo)致產(chǎn)品損失、效力降低和潛在的劑量不足［26］。KUMRU 等［27］的研究結(jié)果表明聚氯乙烯（PVC）材質(zhì)的輸液袋（Ⅳ-bags）相較于聚烯烴材質(zhì)對1 mg/ml 的IgG4 溶液吸附效果更明顯，且顆粒物和渾濁度明顯增加，而在加入聚山梨酯20后兩種輸液袋中的顆粒數(shù)降低至接近陰性對照。

3 影響抗體不穩(wěn)定性的機(jī)制

造成抗體不穩(wěn)定性的因素大致劃分為化學(xué)不穩(wěn)定性因素和物理不穩(wěn)定性因素。它們各自對抗體性質(zhì)產(chǎn)生影響，且彼此相互作用：相關(guān)化學(xué)反應(yīng)可導(dǎo)致物理不穩(wěn)定性［13］，物理不穩(wěn)定性又可使某些活躍的化學(xué)基團(tuán)產(chǎn)生變化，或?qū)⒂锌赡芟嗷プ饔玫幕鶊F(tuán)間距離拉近［28］。

3.1 化學(xué)不穩(wěn)定性的作用機(jī)制 氧化作用：化學(xué)降解不僅不利于抗體藥物的儲存，在應(yīng)用中還會使藥物有效性發(fā)生損耗。氧化反應(yīng)（包括二硫鍵的形成）是最常見的引起化學(xué)降解的因素，這種氧化可以發(fā)生于氧化劑（例如：光照、過氧化物或者活潑金屬）存在的情況下，也可以自發(fā)氧化的形式產(chǎn)生［29］。 抗體分子中相當(dāng)一部分氨基酸基團(tuán)易被氧化，例如甲硫氨酸、組氨酸和半胱氨酸［29-30］。二硫鍵的形成即發(fā)生在兩個半胱氨酸的巰基之間，且類似的氧化不僅可發(fā)生在單個分子內(nèi)部，也可在分子間產(chǎn)生。

脫酰胺作用：另一個引起降解的因素便是脫酰胺化，涉及含天冬酰胺（Asn）和谷氨酰胺（Gln）殘基的位點。脫酰胺化類似于酸堿反應(yīng)，是在臨近反應(yīng)位點的質(zhì)子供體（通常為絲氨酸或者蘇氨酸）參與下形成環(huán)酰亞胺中間物，從而破壞抗體本身的結(jié)構(gòu)［31］。例如Asn 經(jīng)脫酰胺化往往生成琥珀酰亞胺，之后很快自發(fā)水解為天冬氨酸或異天冬氨酸（Asp）。

水解作用：在抗體分子中另一大化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定因素便是二硫鍵或肽鍵的斷裂［29］。其中在單抗藥物正常使用過程中“單價抗體”的形成就是由二硫鍵斷裂導(dǎo)致［29］。而肽鍵斷裂則形成大量性質(zhì)和大小不一的小分子量片段，且尚不能確定該現(xiàn)象是由酶解導(dǎo)致。同樣的，抗體分子中鉸鏈區(qū)的水解機(jī)制亦不明確，例如在研究木瓜蛋白酶對單抗裂解的過程中加入蛋白酶抑制劑并不能改變抗體分子的斷裂，因此推測可能是由某種非酶解機(jī)制導(dǎo)致的該現(xiàn)象。盡管具體機(jī)制尚不明確，但抗體分子這一降解途徑通常發(fā)生在強(qiáng)酸或者高溫環(huán)境中［30］。

輔料作用：除了上述可能由環(huán)境影響發(fā)生的降解外，糖類作為常用的輔料亦會對抗體分子產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)在還原糖作用下可發(fā)生糖基化（glycosylation），最終形成酮胺而導(dǎo)致褐變，且從抗體在胞內(nèi)克隆直至靜脈注射，該反應(yīng)都有可能發(fā)生［31-32］。雖然現(xiàn)在大多廠商以非還原糖作為輔料，但其依然可以降解為還原糖從而影響單抗藥物結(jié)構(gòu)和功能［32］。

化學(xué)修飾對于單抗藥物性質(zhì)的影響程度取決于其修飾位點［33］。例如，脫酰胺化在Fc段發(fā)生所造成的影響很小，但若發(fā)生在CDR 上則會降低單抗的親和力及效價；同樣的，氧化反應(yīng)若是發(fā)生在Fc 段則不僅會降低結(jié)合親和力，更會增加單抗在人體內(nèi)的清除率從而降低血藥濃度［34］。一些研究表明，化學(xué)不穩(wěn)定性還會導(dǎo)致蛋白構(gòu)象的改變和分子聚集，例如甲硫氨酸氧化易引起二級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性改變。

3.2 物理不穩(wěn)定性相關(guān)機(jī)制 蛋白質(zhì)變性往往意味著高級結(jié)構(gòu)的展開，上述化學(xué)不穩(wěn)定性改變、環(huán)境因素（溫度及pH）等都有可能導(dǎo)致這一結(jié)果，并隨之降低抗體鉸鏈區(qū)的活動性，增加聚集性［29］。聚集性增加是最主要的物理不穩(wěn)定性改變，聚集體由多個蛋白質(zhì)分子通過非共價鍵（范德華力、氫鍵、疏水和靜電相互作用）相鏈接，而不涉及一級結(jié)構(gòu)和蛋白序列的變化。此外還有部分聚集體是通過二硫鍵等共價鍵相締合，稱為共價聚集［13］。這兩種聚集最終都有可能形成可溶性或不可溶性聚集物。

抗體的聚集大多都是不可逆的，尤其是在后期當(dāng)形成的聚集物是由大量非天然結(jié)構(gòu)的抗體分子組成的時候［35］。有學(xué)者提出了抗體聚集物有可能通過兩種途徑使正在接受單抗類藥物治療的患者產(chǎn)生免疫原性：T 細(xì)胞依賴途徑以及細(xì)胞因子激活途徑。而且分子量越大的聚集物其免疫原性越強(qiáng)，且糖基化程度、聚集產(chǎn)物來源等亦對其有影響［2，36-37］。最終，免疫原性反應(yīng)不僅大幅降低了藥物的體內(nèi)療效，而且易引發(fā)Ⅰ型超敏反應(yīng)。當(dāng)然，上述現(xiàn)象僅在體外實驗及動物模型中觀察到，并預(yù)測了聚集物在人體內(nèi)的風(fēng)險效應(yīng)，其具體的機(jī)制仍然有待探究［38］。

4 抗體穩(wěn)定性評估方法

生物技術(shù)產(chǎn)品穩(wěn)定性評估通常包括生物活性分析、分子結(jié)構(gòu)和純度分析（含降解產(chǎn)物的定量檢測）以及相關(guān)參數(shù)的監(jiān)測（如外觀、pH值等），綜合以上數(shù)據(jù)來對樣品的熱穩(wěn)定性、聚集性和分子間作用力大小做出評估。在對抗體效價和穩(wěn)定性進(jìn)行評估的方法中，除了最常用的間接ELISA法外，還常應(yīng)用差示掃描量熱儀（DSC）測量蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性，其不僅可以得到熔化溫度，還可以得到與熔化有關(guān)的焓、熵和自由能［39］。進(jìn)一步發(fā)展而來的差示掃描熒光法（DSF）、圓二色（CD）光譜法、動態(tài)光散射（DLS）檢測技術(shù)都朝著高通量、高精度或者對蛋白質(zhì)水動力學(xué)監(jiān)測等方向改進(jìn)［40］。此外在蛋白質(zhì)溶解性預(yù)測方面，研究者們相繼提出了交叉作用色譜法（CIC）、親和捕獲自身相互作用-納米粒子光譜法（AC-SINS）或克隆自身相互作用-生物層干涉法（CSI-BLI）等技術(shù)，取得了一定的進(jìn)展，這些方法評估單克隆抗體在低蛋白濃度下的交叉或自身相互作用的可能性，從而預(yù)測單克隆抗體在高濃度下的特性。隨著計算機(jī)輔助設(shè)計在生物大分子開發(fā)中的應(yīng)用，對不確定晶體結(jié)構(gòu)的分子，可以利用大量的建模和仿真軟件來預(yù)測抗體-抗原復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)；也可使用不同的力場進(jìn)行分子動力學(xué)（molec?ular dynamics，MD）模擬［41］，獲得更多有關(guān)結(jié)合相互作用、穩(wěn)定性的詳細(xì)信息，并使非共價鍵能（疏水能、靜電能、非極性能和結(jié)合能）的計算變得更容易。

5 穩(wěn)定性改造方案

5.1 抗體分子結(jié)構(gòu)改造 基于抗體分子易受化學(xué)修飾位點進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，一直以來是其穩(wěn)定性優(yōu)化的重要方向。其中抗體CDR 區(qū)的去酰胺作用可能導(dǎo)致對抗原結(jié)合功能喪失，已有研究逐步闡明去酰胺化和化學(xué)修飾的機(jī)制以及它們的影響。且有研究證實Gln 的脫酰胺速率比Asn 慢得多，因此，通過將Asn 突變?yōu)镚ln 來移除脫酰胺位點或者降低脫酰胺效應(yīng)的發(fā)生概率被視為一種解決方案［42］。研究還發(fā)現(xiàn)在一級序列中緊跟在Asn后面的氨基酸類型被認(rèn)為是脫酰胺傾向的重要決定因素，若采用側(cè)鏈較大的氨基酸（通常為纈氨酸和異亮氨酸）替代能夠使得Asn對脫酰胺作用的抵抗力更強(qiáng)［42］。本課題組前期工作中利用計算機(jī)分子模建系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)HER2抗體赫賽?。℉erceptin）LC-Asn30 和 HC-Asp102 兩個脫酰胺和異構(gòu)化的降解熱點，經(jīng)同性突變?yōu)長CGln30和HC-Glu102后，抗體穩(wěn)定性得到明顯提高且原有生物學(xué)活性沒有發(fā)生改變［43］。

此外，抗體特定位點的糖基化修飾，決定其不同效應(yīng)配體的功能，同時糖基化可以增強(qiáng)單克隆抗體藥物的穩(wěn)定性和溶解性，并能降低單克隆抗體藥物的聚集趨勢［44］。HIGEL 等［44］使用多變量數(shù)據(jù)分析評估了單克隆抗體糖基化與培養(yǎng)液中氨基酸種類及數(shù)量的關(guān)系，為今后在細(xì)胞培養(yǎng)過程中進(jìn)行控制糖型的研究提供了新思路。THARMALINGAM等［45］通過一種新型的實時糖基化監(jiān)測儀器（微量順序注射系統(tǒng)與超高效液相色譜相結(jié)合）研究Mn2＋濃度對抗體糖基化的影響，實現(xiàn)了通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中Mn2＋濃度來控制產(chǎn)物糖型結(jié)構(gòu)，為糖基化研究提供了新方法。SHA 等［46］基于生產(chǎn)工藝的改進(jìn)，通過代謝分析和數(shù)學(xué)模型相結(jié)合的方法進(jìn)一步控制了重組蛋白的糖基化程度，實現(xiàn)了對產(chǎn)物效應(yīng)功能的優(yōu)化。

5.2 生產(chǎn)工藝優(yōu)化 有研究指出，過酸或過堿條件下抗體都會發(fā)生不同途徑的降解［47］。在pH6.8靜脈注射用免疫球蛋白（IGIV）制劑中，這種由pH導(dǎo)致的不穩(wěn)定性通過加入麥芽糖穩(wěn)定劑可以得到改善；而在以CHO 細(xì)胞系為表達(dá)系統(tǒng)的體系中，HOGIRI 等［48］建立以活細(xì)胞數(shù)、凋亡細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)、產(chǎn)物量（mAb），培養(yǎng)體積和pH 值等 6 大參數(shù)為主體的pH 依賴性動力學(xué)模型，用數(shù)值優(yōu)化方法來估計整個細(xì)胞培養(yǎng)時間內(nèi)的pH 值變化規(guī)律，進(jìn)而在生產(chǎn)階段制定出有效的pH優(yōu)化策略。

表面活性劑通常被添加到單抗藥物配方中，以減少疏水區(qū)的暴露，或者通過競爭吸附位點從而減少蛋白質(zhì)相互作用和界面誘導(dǎo)的聚集，其中常用的非離子表面活性劑有聚山梨酯20和聚山梨酯80［49］。此外，某些氨基酸也常被作為賦形劑用以保護(hù)聚集，常用的精氨酸（Arg）能夠增加蛋白質(zhì)的溶解度，并能保護(hù)其免受光照和高溫誘導(dǎo)的聚集。TOTH等［50］證實了（Arg）氫氯化物能夠提升熱穩(wěn)定性，同時減少攪拌誘導(dǎo)的聚集。脯氨酸（Pro）作為一種環(huán)狀氨基酸，被認(rèn)為通過與芳香殘基和暴露的疏水區(qū)結(jié)合而增強(qiáng)mAb 的溶解，從而降低蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用和溶液黏度，減少其pH 值在pI 附近時的聚集［51］。

而通過對抗體藥物成品在儲存或包裝方式上的改進(jìn)往往更具經(jīng)濟(jì)性。SREEDHARA 等［52］研究表明，去除輸液袋的頂部空隙可以減少攪拌誘導(dǎo)的聚集體形成；此外容器對藥物溶液中的輔料（緩沖液、表面活性劑、防腐劑、其他穩(wěn)定劑等）的吸附也會導(dǎo)致它們濃度的降低從而不再滿足單抗藥物穩(wěn)定性的要求。迄今為止防止蛋白質(zhì)與容器表面相互作用的方法是對表面進(jìn)行涂層，即表面鈍化。涂層大致可分為兩類：單層涂層（較常用）和多層涂層（不太可控），較常用的涂層聚合物包括乙二醇或環(huán)氧乙烷［53］。此外，若使用帶極性或中性電荷的聚合物涂層也能夠減少蛋白質(zhì)的吸附［54］

6 結(jié)語

治療性單克隆抗體藥物是當(dāng)下生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研發(fā)熱點，且以此為基礎(chǔ)開發(fā)出的單鏈抗體（scFv）、單域抗體、抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）等應(yīng)用于各器官系統(tǒng)疾病的藥物也相繼獲批上市。如何在不改變藥物靶向性、兼顧療效和免疫原性的同時提高藥物自身穩(wěn)定性，盡可能延長藥物半衰期，保持有效的血藥濃度是當(dāng)下亟待解決的問題?？贵w穩(wěn)定性受到環(huán)境、配方、自身結(jié)構(gòu)及生產(chǎn)操作等多種因素影響，而對抗體穩(wěn)定性的有效評估是進(jìn)行個體化改造的前提。穩(wěn)定性評估不應(yīng)僅僅根據(jù)有無降解產(chǎn)物或穩(wěn)定性分子的濃度來定義，而應(yīng)該包含以下3 方面：物理穩(wěn)定性研究的評估應(yīng)該涵蓋聚集體和碎片數(shù)目以及單抗結(jié)構(gòu)；化學(xué)穩(wěn)定性研究應(yīng)關(guān)注蛋白降解情況；生物穩(wěn)定性研究應(yīng)保證單克隆抗體對靶點的活性與其物理化學(xué)穩(wěn)定性保持一致。深入探討抗體穩(wěn)定性影響因素及評估方法，有助于抗體藥物的合理優(yōu)化以及新藥的研發(fā)。