楊淑萍，姜凌

（1.洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心婦產(chǎn)科，河南 洛陽 471000；2.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 洛陽 471000）

部分地區(qū)的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的發(fā)病率可超過485/10 萬人左右[1]。在合并有相關(guān)高危因素的人群中，宮頸癌的發(fā)病率可進一步的上升。臨床上的觀察分析研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者的5年生存率不足55%，其遠期病死率也明顯的上升[2]。對于宮頸癌的早期診斷具有重要的意義，其能夠在疾病的診療及早期手術(shù)干預(yù)方面發(fā)揮作用。生物學(xué)指標的研究，可以為宮頸癌的診斷提供參考。蛋白激酶CK2β的表達，能夠通過提高其蛋白激酶的激活程度,增加宮頸上皮細胞的異常增殖能力[3]；P16蛋白的表達上升，能夠提高癌細胞內(nèi)腫瘤信號通路的激活，促進下游多種病理性效應(yīng)因子的上調(diào)，進而提高宮頸上皮細胞的異常裂變的風(fēng)險[4]；人乳頭瘤病毒殼蛋白（HPVL-1）的表達，能夠通過誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，提高T 淋巴細胞的激活，增強其對于腫瘤細胞的免疫殺傷性作用，從而降低癌細胞的早期發(fā)生風(fēng)險[5]。為了揭示CK2β、P16、HPV L-1的表達與宮頸癌的關(guān)系，從而為臨床上宮頸癌的診療提供理論方面的參考，本次研究選取2015年1 月至2017年12 月我院確診的80例宮頸癌患者作為研究對象，探討了CK2β、P16、HPV L-1的表達及其診斷學(xué)價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1 月至2017年12 月我院確診的80例宮頸癌患者作為研究對象（病例組）、選取80例宮頸瘤變患者作為對照組。

病例組，年齡38～65 歲，平均47.0±8.3 歲，病理學(xué)TNM 分期：Ⅰ期49例、Ⅱ期26例、Ⅲ期5例,分化程度：高分化17例、中分化44例、低分化19例；病灶直徑≥4cm 38例、<4cm 42例。對照組，年齡33～58 歲，平均45.7±9.0 歲，CINⅠ期25例、CINⅡ期24例、CINⅢ期31例。兩組患者的年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

納入標準:⑴宮頸癌的診斷標準參考中華醫(yī)學(xué)會制定的標準[6]；⑵經(jīng)病理學(xué)檢查確診；⑶獲取標本前患者未接受放化療、免疫學(xué)治療；⑷患者各項資料保存完整；⑸本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

排除標準：⑴伴有其他部位惡性腫瘤；⑵轉(zhuǎn)移性宮頸癌患者；⑶既往具有宮頸手術(shù)史；⑷資料缺失，無法進行統(tǒng)計分析

1.2 免疫組化檢測方法 石蠟包埋，連續(xù)性切片厚度3um，60℃烤片60min，常規(guī)脫水后，采用EDTA進行抗原修復(fù)，加入10μl 蒸餾水，加入10%過氧化氫5il，室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3 次*3min,加入CK2β、P16、HPV L-1蛋白的單克隆抗體（1：1000 購自羅氏檢測公司），37℃孵育60min，PBS洗滌3 次*3min，加 入HRP 標記的CK2β、P16、HPV L-1蛋白二抗（1：2000 購自羅氏公司），37℃孵育20min，PBS 洗滌3 次*3min，加入DAB 后，PBS 沖洗和復(fù)染，脫水后在顯微鏡下進行觀察。

1.3 結(jié)果分析 免疫組化結(jié)果判定：CK2β 主要定位于細胞質(zhì)、P16 主要定位于細胞漿及細胞核、HPV L-1蛋白的陽性著色表達于細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據(jù)著色強度：0 分為無色、1分為淡黃色、2 分為棕黃色、3 分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例≤10%為1 分、陽性細胞所占比例11%～50%為2 分、陽性細胞數(shù)51%～75%為3 分、陽性細胞數(shù)所占比例>75%為4 分，兩種積分相乘總分<3 分為陰性、≧3分為陽性?？偡?3 分：“-”表達；為3～5 分，“+”表達；為6～9 分，“++”表達；>9 分，“+++”表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究的數(shù)據(jù)收集后，采用SPSS16.0 進行整理、分析；采用對計量數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計描述，兩組間均數(shù)比較應(yīng)用t 檢驗；計數(shù)資料比較應(yīng)用χ2檢驗；P 值<0.05 有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的宮頸組織標本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性率比較 病例組宮頸組織中的CK2β蛋白陽性表達率67.50%、P16 陽性表達率85.00%顯著的高于對照組宮頸組織中的16.25%、42.50%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；病例組宮頸組織中的HPV L-1蛋白陽性表達率15.00%低于對照組宮頸組織中的36.25%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；見表1。

表1 宮頸組織標本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性率比[n（%）]

2.2 宮頸組織標本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性表達鑒別診斷宮頸癌的價值 以病理學(xué)結(jié)果作為金標準，CK2β、P16、HPV L-1 鑒別診斷宮頸癌的靈敏度為、特異度為、漏診率為、誤診率為結(jié)果見表4；CK2β、P16、HPV L-1聯(lián)合檢測鑒別診斷宮頸癌的靈敏度為96.25%、特異度為63.75%、漏診率為3.75%、誤診率為36.25%；見表2、表3、表4。

表2 CK2β、P16、HPV L-1蛋白陽性表達鑒別診斷宮頸癌與病理學(xué)結(jié)果比較

表3 CK2β、P16、HPV L-1蛋白聯(lián)合檢測鑒別診斷宮頸癌與病理學(xué)結(jié)果比較

表4 CK2β、P16、HPV L-1蛋白單獨及聯(lián)合檢測鑒別診斷宮頸癌的價值

3 討論

宮頸高危型HPV 病毒感染、多次人工流產(chǎn)或者過早性生活，均能夠促進宮頸癌的發(fā)生，在合并有HPV16、HPV18 亞型病毒感染的患者中，宮頸癌的發(fā)病率可進一步的上升[7]。長期的臨床觀察發(fā)現(xiàn),宮頸癌患者遠期致殘率可超過35%以上,同時宮頸癌患者的無瘤生存時間不足36 個月[8,9]。現(xiàn)階段缺乏對于宮頸癌診斷的生物學(xué)標志物指標,雖然陰道鏡下活檢或者宮頸診斷性錐形切除術(shù),能夠在宮頸癌的診斷過程中發(fā)揮作用。但相關(guān)檢查均屬于有創(chuàng)檢查，耗時較長，檢查費用相對較高，患者的接受程度差異較大。而本次研究通過對于宮頸癌患者病灶組織中CK2β、P16、HPV L-1的表達分析研究，一方面能夠深入揭示宮頸癌的病情進展機理，另一方面能夠為臨床上宮頸癌的診療提供新的參考性指標。

CK2β 是蛋白激酶相關(guān)因子，其能夠通過提高細胞周期依賴性蛋白激酶的釋放速度,增加癌細胞早期發(fā)生過程中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控異常風(fēng)險?；A(chǔ)方面的研究顯示，CK2β 能夠通過結(jié)合癌細胞膜表面糖蛋白，提高癌細胞的浸潤和粘附能力，增加癌細胞突破基底膜組織的風(fēng)險；P16 作為腫瘤相關(guān)蛋白，其對于癌細胞轉(zhuǎn)錄上游啟動子的激活，能夠促進癌細胞核DNA 增殖速度的提示[10]。同時P16蛋白上調(diào)能夠誘導(dǎo)下NF-KB的激活，增加多種腫瘤信號同的激活風(fēng)險[11]；HPV L-1 是HPV 病毒殼表面蛋白，其能夠特異性誘導(dǎo)T 淋巴細胞的激活，增加抗原提呈細胞的激活程度，從而誘導(dǎo)機體免疫反應(yīng)[12]。部分研究者探討了P16蛋白在宮頸癌患者中的表達情況，認為在宮頸癌患者中，P16蛋白的表達陽性率明顯上升[13]，但缺乏對于CK2β、HPV L-1的表達分析研究。

本次研究通過免疫組化探討了CK2β、P16、HPV L-1在宮頸癌病灶組織中的表達，發(fā)現(xiàn)在病例組患者中，CK2β、P16的表達陽性率明顯的上升，高于對照組宮頸病變患者，HPV L-1的表達陽性率明顯下降，低于對照組宮頸病變患者，統(tǒng)計學(xué)差異較為顯著，提示了CK2β、P16、HPV L-1的異常表達均能夠影響到宮頸癌的發(fā)生過程。分析其具體的原因，考慮由于CK2β、P16、HPV L-1的下列幾個方面的改變有關(guān)[14]：⑴CK2β的表達上升，能夠提高宮頸柱狀上皮細胞鱗狀上皮化的風(fēng)險，導(dǎo)致上皮細胞異常分裂的調(diào)控異常；⑵P16蛋白的表達上升，能夠促進癌細胞內(nèi)MAPK 或者NF-KB通路的激活，增加了柱狀上皮細胞周期調(diào)控異常的風(fēng)險；⑶HPV L-1的表達下降,失去了其對于CD4+T 淋巴細胞免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)作用，促進了免疫逃逸的發(fā)生。陳曉露等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌患者中，CK2β蛋白的表達陽性率上升30%以上，在具有宮旁組織浸潤或者盆腔內(nèi)臟器轉(zhuǎn)移的患者中，CK2β蛋白的表達陽性率可進一步的上升。診斷學(xué)方面的分析可見，以最終的病理學(xué)診斷作為金標準，可以發(fā)現(xiàn)CK2β、P16、HPV L-1在單獨診斷宮頸癌的過程中均具有一定的參考價值，但其中HPV L-1的診斷靈敏度相對較低，這主要由于HPV L-1蛋白的檢出敏感性較低有關(guān)，而CK2β、P16 雖然能夠在宮頸癌的診斷過程中發(fā)揮作用，但其仍然存在明顯漏診或者誤診的風(fēng)險。通過聯(lián)合CK2β、P16、HPV L-1 進行診斷，可以顯著提高宮頸癌的診斷效能，臨床上對于拒絕行陰道鏡或者宮頸錐切活檢的患者，必要時可以通過聯(lián)合CK2β、P16、HPV L-1，進而輔助診斷宮頸癌。

綜上所述，在宮頸癌患者中，CK2β、P16的表達明顯上升，而HPV L-1的表達明顯下降，同時CK2β、P16、HPV L-1在聯(lián)合診斷宮頸癌的過程中具有一定的參考價值。