田 歡，程 豐，張劍波，龔國(guó)富，劉 敏

（1.湖北省鄂州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 鄂州 436000；2.湖北省鄂州市中心血站質(zhì)量管理科，湖北 鄂州 436000）

近年來，受酒文化大眾性的影響，飲酒人數(shù)一直呈上升趨勢(shì)。我國(guó)每年因酒后駕駛造成死亡的交通事故達(dá)50%以上，不僅給受害者及其親屬帶來了傷害和痛苦，同時(shí)還造成了巨大的經(jīng)濟(jì)社會(huì)損失[1]。酒精濃度與患者性別、年齡、身高、體重、酒精消耗量、酒精代謝酶的基因多態(tài)性等因素有關(guān)[2]，酒精濃度的檢測(cè)常見方法有呼氣酒精分析、化學(xué)發(fā)光法、干化學(xué)法、頂空氣相色譜法等。頂空氣相色譜法作為檢測(cè)酒精含量的指南推薦方法，得到結(jié)果的準(zhǔn)確度更為可信，有穩(wěn)定性強(qiáng)，檢測(cè)范圍更廣，用血量少等顯著優(yōu)勢(shì)[3，4]，具有直接的法律效力。但是頂空氣相色譜法在使用過程中需要?dú)庀嗌V儀，升高了檢測(cè)成本，且檢測(cè)過程較長(zhǎng)，不利于快速檢測(cè)以及基層醫(yī)院的開展。干化學(xué)比色法在使用過程中不會(huì)對(duì)待測(cè)物質(zhì)產(chǎn)生干擾現(xiàn)象，并且對(duì)相對(duì)有干擾作用的物質(zhì)選擇性去除[5-7]，整個(gè)反應(yīng)過程所用時(shí)間短，自動(dòng)化程度高，每個(gè)干片僅使用1 次，避免樣本及干片間的結(jié)果干擾。使整個(gè)操作過程耗時(shí)短、操作簡(jiǎn)單，且環(huán)保，但如何系統(tǒng)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其檢測(cè)效果亟需研究。本課題參照CLSI 發(fā)布的EP9-A3 文件[8]，以頂空氣相色譜法為參比方法，干化學(xué)比色法為待評(píng)方法，對(duì)兩個(gè)不同檢測(cè)系統(tǒng)不同方法學(xué)血液酒精濃度檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)，評(píng)估兩者之間的差異。

1 資料與方法

1.1 樣本來源 收集40 份飲酒后的志愿者血液樣本，樣本濃度應(yīng)在方法學(xué)的線性范圍內(nèi)，并覆蓋酒精含量檢測(cè)閾值。用參比方法和待評(píng)方法分別檢測(cè)，同1天內(nèi)兩種方法在4 h 內(nèi)檢測(cè)完畢。棄去溶血、脂血、黃疸樣本，標(biāo)本數(shù)量和濃度滿足EP-A3 文件要求。

1.2 儀器與試劑 美國(guó)安捷倫頂空氣相色譜儀7820A+7697A 及專用配套耗材、校準(zhǔn)品sigma 與質(zhì)控品；美國(guó)強(qiáng)生全自動(dòng)干化學(xué)分析儀V350 及配套試劑（批號(hào)552900903380）、校準(zhǔn)品（批號(hào)0847）與質(zhì)控品（批號(hào)D6163、G6496）。

1.3 方法

1.3.1 樣本檢測(cè) 按照EP-A3 文件要求，同時(shí)采用頂空氣相色譜法與干化學(xué)比色法在分析儀上分別隨機(jī)測(cè)定40 份血液樣本，每份樣本每種方法測(cè)定2 次，記錄測(cè)定結(jié)果并計(jì)算其平均值。測(cè)定之前對(duì)儀器進(jìn)行保養(yǎng)，使2 臺(tái)儀器處于最佳工作狀態(tài)，采用校準(zhǔn)品進(jìn)行校正，室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控。如有離群值標(biāo)本，排除后再補(bǔ)充相應(yīng)濃度標(biāo)本測(cè)定。

1.3.2 離群值檢查 按照EP-A3 文件要求，通過廣義極端學(xué)生化偏差（ESD）方法檢驗(yàn)離群值點(diǎn)[9]。具體步驟：①根據(jù)40 份樣本的測(cè)定結(jié)果計(jì)算[(y-x)/x]的平均值（d）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）；并根據(jù)d 和SD 計(jì)算最大偏移（ESDi）；②根據(jù)檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)的樣本數(shù)量計(jì)算臨界值（λi）；③若ESD1＞λ1，則認(rèn)為該觀察值為離群值；排除后需進(jìn)行第2 個(gè)最大偏移計(jì)算和比較；④離群值的個(gè)數(shù)是通過找到最大的i 使得ESDi＞λi；⑤排除離群值后補(bǔ)充數(shù)據(jù)，達(dá)到40 份樣本數(shù)量要求。⑥離群值的上限不超過樣本總量的5%，本實(shí)驗(yàn)樣本總量為40，則離群值最多不能超過2 個(gè)，如果多于2 個(gè)，則需要擴(kuò)大樣本量，尋找出現(xiàn)偏差的原因[10]。

1.3.3 方法比對(duì)與偏倚評(píng)估 繪制相應(yīng)的偏差圖和散點(diǎn)圖，并采用普通二乘回歸（ordinary least squares regression，OLR）、加權(quán)最小二乘法（weighted least squares，WLS）及PB（Passing-Bablok）模型擬合回歸方程，并計(jì)算酒精含量閾值處（20、80 mg/dl）的偏倚，以小于5%為可接受標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用Microsoft Excel 2016、SPSS 19.0和MedCalc 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 離群值檢測(cè)結(jié)果 根據(jù)頂空氣相色譜法與干化學(xué)比色法測(cè)得的酒精濃度繪制散點(diǎn)圖，圖中未見異常值點(diǎn)。進(jìn)一步采用ESD 法檢驗(yàn)，也未發(fā)現(xiàn)離群值，見圖1。

圖1 兩種方法檢測(cè)血液酒精含量的散點(diǎn)圖

2.2 方法比對(duì)及偏移評(píng)估

2.2.1 偏差圖的潛在特征分析 參照EP9-A3 文件對(duì)無離群值的40 組結(jié)果繪制偏差圖，頂空氣相色譜法與干化學(xué)比色法檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好（r2＞0.95），除低濃度波動(dòng)較大外，總體具有恒定CV 變化，采用WLS 回歸分析，見圖2、圖3。

圖2 兩種方法測(cè)定酒精含量的差值偏差圖

圖3 兩種方法測(cè)定酒精含量的百分比差值偏差圖

2.2.2 偏倚初步估算 繪制兩種方法間差值頻數(shù)柱狀圖，為非正態(tài)分布，利用中位數(shù)對(duì)數(shù)據(jù)中的偏倚予以估算，偏倚為4.48%，小于可接受標(biāo)準(zhǔn)。

2.2.3 回歸分析 根據(jù)兩種方法差值具有恒定CV 變化，采用WLS 回歸分析，擬合后回歸方程為Y=0.986X-0.278，在血液酒精含量閾值處（20、80 mg/dl），偏倚分別為-2.84%、-1.77%，均小于5%可接受標(biāo)準(zhǔn)，見表1。

表1 兩種方法在酒精含量閾值處偏倚比較

3 討論

酒精是一種常見的成癮性精神活性物質(zhì)，可以影響人類情緒、思維、行為和意識(shí)形態(tài)。大量飲酒、長(zhǎng)期慢性飲酒會(huì)引起如酒駕、酒后肇事等有害的行為問題，肝臟疾病、心臟病等健康問題及酒精依賴、酒精型人格障礙等精神心理問題[11]，甚至?xí)a(chǎn)生酒精中毒臨床表現(xiàn)[12]。實(shí)時(shí)檢測(cè)酒精濃度是準(zhǔn)確診斷、避免誤診、漏診，準(zhǔn)確評(píng)估病情的關(guān)鍵[13]。

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，檢測(cè)技術(shù)不斷更新，同一項(xiàng)目可能會(huì)存在不同的檢測(cè)方法，同一實(shí)驗(yàn)室也將面臨不同檢測(cè)方法、檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的一致性問題。同時(shí)，不同檢測(cè)方法的比對(duì)文件也在與時(shí)俱進(jìn)。檢測(cè)系統(tǒng)或方法的性能是否可接受，通過評(píng)估該分析方法在穩(wěn)定狀態(tài)下具有的誤差，并對(duì)這些誤差做出判斷，來決定檢測(cè)系統(tǒng)能否應(yīng)用于常規(guī)工作，而正確度是其重要分析性能之一[14]。本研究檢測(cè)血液中酒精含量以頂空氣相色譜法為參比方法，干化學(xué)比色法為待評(píng)方法，采用CLSI EP9-A3 指南進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)和偏移評(píng)估。

自1986 年CLSI 首次推出EP9-P 指南以來，經(jīng)過4 次修訂，于2013 年推出新版本EP9-A3 指南，為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供了最新的方法學(xué)比對(duì)及偏移評(píng)估指南[9]。相較EP9-A2，EP9-A3 在比對(duì)方案、離群值檢驗(yàn)、回歸模型選擇和分析等方面均有較大程度改進(jìn)，其適用范圍更廣、實(shí)驗(yàn)方案更合理、不同類型數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法選擇更科學(xué)[15]。EP9-A3 提供了OLR、WLS、Deming 回歸、Passing-Bablok 回歸4 種模型進(jìn)行回歸分析，每種模型均有各自適用范圍。本研究綜合分析2 種系統(tǒng)不同方法學(xué)檢測(cè)血液酒精含量的散點(diǎn)圖、偏差圖，結(jié)果顯示兩種檢測(cè)系統(tǒng)相關(guān)性良好（r2＞0.95），差值具有恒定CV 變化，因此采用WLS回歸分析，結(jié)果顯示在血液酒精含量閾值處（20、80mg/dl），偏倚分別為-2.84%、-1.77%，均小于5%可接受標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，快速、經(jīng)濟(jì)的干化學(xué)比色法可在緊急情況下及時(shí)檢出結(jié)果以供交警參考，及時(shí)處置，之后可再用頂空氣相色譜法檢測(cè)出具司法鑒定報(bào)告。同時(shí)對(duì)酒精中毒及重度酒精依賴患者也能及時(shí)出具檢查報(bào)告，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患者體內(nèi)酒精濃度控制水平，指導(dǎo)臨床及時(shí)調(diào)整更合理的治療方案。