王中曉 曲震理 王斌 薛娣 薛士鵬 魏嚴(yán) 劉慶春

作者單位：南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南 南陽 473000

阿霉素是目前較為常用的抗腫瘤藥物，但阿霉素長(zhǎng)期使用可導(dǎo)致心肌損害并出現(xiàn)心臟毒性癥狀，影響惡性腫瘤患者的預(yù)后，這種心臟毒性損害與氧化損傷有關(guān)[1～3]。為了減輕其心臟毒性，在應(yīng)用阿霉素時(shí)給予相應(yīng)藥物來減輕對(duì)心臟的毒性損傷。艾葉提取物是從中藥艾葉中提取而得?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明[2]，艾葉提取物具有抗自由基及抗氧化損傷的作用。艾葉提取物中有咖啡酸酯、艾葉多糖、艾葉總黃酮等成分，咖啡酸酯具有中度抗氧化活性，艾葉多糖、艾葉總黃酮可清除自由基，有抗氧化活性?，F(xiàn)探討艾葉提取物對(duì)阿霉素所致大鼠心肌損傷的保護(hù)作用，以期為臨床應(yīng)用艾葉提取物減輕阿霉素所致心臟毒性提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康成熟大鼠75 只，體重200～250g。均由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。

1.1.2 藥物與試劑 艾葉提取物購于西安源森生物科技有限公司；注射用鹽酸阿霉素購于浙江海正藥業(yè)股份有限公司；心肌酶譜（天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶、肌酸激酶同工酶）試劑盒、丙二醛和超氧化物歧化酶試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 選擇動(dòng)物和分組 所選大鼠隨機(jī)分為5 組，每組15 只，分別為：對(duì)照組（正常大鼠）、模型組（腹腔注射阿霉素致心肌損傷）、高劑量組（在阿霉素所致心肌損傷基礎(chǔ)上，給予高劑量艾葉提取物）、中劑量組（在阿霉素所致心肌損傷基礎(chǔ)上，給予中劑量艾葉提取物）和低劑量組（在阿霉素所致心肌損傷基礎(chǔ)上，給予低劑量艾葉提取物）。

1.2.2 動(dòng)物造模和給藥 采用腹腔注射阿霉素建立阿霉素心臟毒性損傷大鼠模型。模型組大鼠腹腔注射阿霉素2.5mg/kg，每周注射1 次，連續(xù)注射4 周。高、中、低劑量組注射阿霉素的劑量和時(shí)間同模型組。對(duì)照組大鼠注射同體積的生理鹽水，每天1 次，注射時(shí)間和模型組相同。高、中、低劑量組在阿霉素所致心肌損傷基礎(chǔ)上均給予艾葉提取物灌胃給藥，高劑量組劑量為2.24g·kg-1·d-1、中劑量組劑量為1.12g·kg-1·d-1、低劑量組劑量為0.56g·kg-1·d-1。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 測(cè)定大鼠血清心肌酶譜水平 各組大鼠在最后一次灌胃結(jié)束后12h，采用0.3%戊巴比妥鈉1ml/100g 劑量實(shí)施腹腔麻醉，麻醉成功后在右心室取血，取血后在4℃下靜置20min，而后12 000r/min離心20min，吸取上清液（血清）測(cè)定大鼠心肌酶譜：天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶、肌酸激酶同工酶。用全自動(dòng)生化儀測(cè)定大鼠血清心肌酶譜，具體測(cè)定按照試劑盒提供的詳細(xì)步驟進(jìn)行。

1.3.2 測(cè)定大鼠心肌勻漿中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性 大鼠麻醉取血后，立即取米粒大小的心肌組織剪碎并加入9 倍重量的生理鹽水（預(yù)冷，4℃）制成心肌組織勻漿。勻漿制備完畢后，在4℃下離心（轉(zhuǎn)數(shù)為10 000r/min）15min，取離心后上清液（心肌細(xì)胞混懸液），置于-70℃冰箱保存，以備測(cè)定丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。具體測(cè)定步驟依據(jù)試劑盒提示的詳細(xì)步驟進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組間比較采用單因素方差分析和最小差值（LSD）檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心肌酶譜測(cè)定結(jié)果比較模型組心肌酶譜測(cè)定結(jié)果高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。艾葉提取物高、中、低劑量組心肌酶譜測(cè)定結(jié)果均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組和中劑量組心肌酶譜測(cè)定結(jié)果均低于低劑量組（P<0.05），高劑量組心肌酶譜測(cè)定結(jié)果低于中劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 各組大鼠心肌酶譜測(cè)定結(jié)果比較（±s，U/L）

表1 各組大鼠心肌酶譜測(cè)定結(jié)果比較（±s，U/L）

組別n 天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶磷酸肌酸激酶乳酸脫氫酶肌酸激酶同工酶對(duì)照組15128±25261±46289±61301±47模型組15 704±38◆ 951±63◆ 861±48◆ 967±53◆低劑量組 15 512±41▼ 713±45▼ 642±52▼ 708±41▼中劑量組 15 409±52▼* 536±57▼* 453±39▼* 529±66▼*高劑量組 15 213±36▼*▲ 357±71▼*▲ 384±62▼*▲369±58▼*▲

2.2 各組大鼠心肌勻漿中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量比較模型組超氧化物歧化酶活性低于對(duì)照組，艾葉提取物高、中、低劑量組超氧化物歧化酶測(cè)定結(jié)果均高于模型組，高劑量組和中劑量組超氧化物歧化酶測(cè)定結(jié)果均高于低劑量組，高劑量組超氧化物歧化酶測(cè)定結(jié)果高于中劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組丙二醛含量高于對(duì)照組，艾葉提取物高、中、低劑量組丙二醛測(cè)定結(jié)果均低于模型組，高劑量組和中劑量組丙二醛測(cè)定結(jié)果均低于低劑量組，高劑量組丙二醛測(cè)定結(jié)果低于中劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 各組大鼠心肌勻漿中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量比較（±s）

表2 各組大鼠心肌勻漿中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，◆P<0.05；與模型組比較，▼P<0.05；與低劑量組比較，*P<0.05；與中劑量組比較，▲P<0.05

組別n超氧化物歧化酶（ng/ml）丙二醛（nmol/ml）對(duì)照組157.104±0.3470.964±0.235模型組151.697±0.115◆6.091±0.198◆低劑量組 153.017±0.224▼4.107±0.261▼中劑量組 154.113±0.309▼*3.354±0.189▼*高劑量組 155.624±0.427▼*▲1.967±0.203▼*▲

3 討論

阿霉素是目前較為常用的抗腫瘤藥物，有較好的抗腫瘤效果，廣泛應(yīng)用于多種腫瘤化療中。但阿霉素長(zhǎng)期應(yīng)用于腫瘤化療時(shí)可產(chǎn)生一定程度的毒副作用，如心肌損傷、皮膚毒性、胃腸道反應(yīng)、導(dǎo)致造血功能低下等。其中阿霉素引起心肌細(xì)胞損傷也較為常見，可導(dǎo)致患者產(chǎn)生心肌損傷相關(guān)癥狀。長(zhǎng)期應(yīng)用阿霉素抗腫瘤化療的患者可出現(xiàn)心力衰竭的表現(xiàn)，心肌舒縮功能障礙導(dǎo)致心臟射血分?jǐn)?shù)下降，出現(xiàn)心力衰竭癥狀，如肺循環(huán)淤血或靜脈系統(tǒng)淤血相關(guān)臨床癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和長(zhǎng)期抗腫瘤效果，因此有些患者放棄使用阿霉素化療。在對(duì)阿霉素毒副作用的研究中發(fā)現(xiàn)，阿霉素所致心肌損傷的案例并不少，所以阿霉素所致的心肌損傷機(jī)制研究是目前阿霉素所致毒副作用研究的熱點(diǎn)之一。阿霉素所致心肌損傷的機(jī)制較多，其中氧化損傷是其重要的損傷機(jī)制[4～6]。阿霉素可引起氧自由基增多，導(dǎo)致膜類結(jié)構(gòu)損傷，引起心肌細(xì)胞損傷。正常情況下，活性氧在代謝過程中產(chǎn)生的自由基可被體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)清除，如谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶等，使細(xì)胞免受此類自由基損傷。超氧化物歧化酶對(duì)體內(nèi)自由基有清除作用，減輕氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷。丙二醛是脂質(zhì)過氧化物的最終產(chǎn)物，其水平高低與體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度有關(guān)。通過觀察丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性有助于了解體內(nèi)氧化損傷及改善情況。

尋找其他藥物來改善阿霉素所致的心臟損傷是目前研究的熱點(diǎn)之一。中藥提取物在阿霉素所致心肌損傷保護(hù)作用方面研究較多，為中藥改善阿霉素所致心肌損傷提供一定理論基礎(chǔ)。艾葉提取物來自于中藥艾葉，艾葉來源廣泛，在國內(nèi)多個(gè)地方均有生長(zhǎng)或種植。艾葉提取物的藥理學(xué)研究提示，其有助于改善實(shí)驗(yàn)糖尿病小鼠的多飲多食及體重減輕的癥狀，能夠顯著降低糖尿病小鼠的空腹血糖水平，對(duì)糖尿病小鼠的脂質(zhì)紊亂狀況有改善作用。還有研究表明，艾葉提取物含有抗氧化相關(guān)成分，如咖啡酸酯、艾葉多糖、艾葉總黃酮等，這些成分均有一定的抗氧自由基及抗氧化損傷作用[7～9]。

心肌酶譜異常是指心肌酶的水平和正常水平相比表現(xiàn)異常。而心肌酶是存在于人體或動(dòng)物體內(nèi)心肌細(xì)胞中的正常酶類，如天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶、肌酸激酶同工酶等。正常情況下上述酶類水平較低。當(dāng)心肌發(fā)生損害后，上述酶類可從心肌細(xì)胞內(nèi)釋放進(jìn)入血液，導(dǎo)致血液中上述酶類水平升高。當(dāng)血清中心肌酶水平升高時(shí)，提示心肌細(xì)胞受損。在疾病早期測(cè)得心肌酶水平，有助于了解心肌細(xì)胞損傷程度和對(duì)預(yù)后的判斷。

本研究顯示，模型組（阿霉素?fù)p傷組）測(cè)得的心肌酶譜水平高于對(duì)照組，心肌酶譜水平升高提示心肌細(xì)胞有損傷，說明大鼠長(zhǎng)期應(yīng)用阿霉素有心肌損傷表現(xiàn)，引起心肌酶譜相關(guān)酶類水平升高。而高、中、低劑量組同時(shí)給予艾葉提取物后測(cè)得的心肌酶譜水平均低于模型組，說明艾葉提取物能夠降低阿霉素所致心肌損傷后的心肌酶譜水平，對(duì)阿霉素心肌細(xì)胞損傷情況有改善作用，對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生一定的保護(hù)作用。

在氧化損傷和保護(hù)方面，模型組心肌組織勻漿中的丙二醛含量高于對(duì)照組，說明長(zhǎng)期應(yīng)用阿霉素后，大鼠體內(nèi)丙二醛水平升高，脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)物增多，這與過度氧化有關(guān)，提示阿霉素引起的心肌損傷與氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。而高、中、低劑量組同時(shí)給予艾葉提取物后，丙二醛含量均低于模型組，說明艾葉提取物能夠降低阿霉素所致的氧化損傷。模型組心肌組織中超氧化物歧化酶水平低于對(duì)照組，說明大鼠長(zhǎng)期應(yīng)用阿霉素后，其體內(nèi)超氧化物歧化酶水平顯著降低，其體內(nèi)抗氧化損傷能力下降。高、中、低劑量組給予艾葉提取物后，超氧化物歧化酶水平均高于模型組，提示艾葉提取物有助于提高大鼠的抗氧化能力，改善阿霉素所致的氧化損傷，降低阿霉素對(duì)心肌氧化損傷的程度。

綜上所述，阿霉素所致的心肌損傷與氧自由基損傷有關(guān)[10～12]，而這種氧化損傷可能被艾葉提取物改善，其保護(hù)機(jī)制可能與艾葉提取物通過增強(qiáng)大鼠抗氧化應(yīng)激能力有關(guān),從而降低阿霉素所致的心肌損傷程度。