王琪，黃霖

景德鎮(zhèn)市市場監(jiān)督管理綜合檢驗(yàn)檢測中心，江西 景德鎮(zhèn) 333000

氨芐西林是廣譜半合成的青霉素類抗生素，屬于β-內(nèi)酰胺類抗生素，抗菌作用較強(qiáng)，具有廣譜、低毒、高效和價(jià)廉等特點(diǎn)。用于治療敏感細(xì)菌所致泌尿道、消化道、呼吸道、耳鼻喉、皮膚和軟組織等感染［1］。根據(jù)原料藥生產(chǎn)企業(yè)提供的工藝資料及參考相關(guān)文獻(xiàn)［2-4］，氨芐西林原料藥在合成過程中，涉及乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺共5種有機(jī)溶媒，為提高產(chǎn)品的安全與可靠，需對(duì)殘留溶劑的量進(jìn)行控制，故此本文建立氣相色譜法，測定氨芐西林原料藥中有機(jī)溶劑的殘留量。結(jié)果表明，建立的方法準(zhǔn)確、可靠。

1 儀器與試藥

安捷倫7890B 型氣相色譜儀（配FID 檢測器），電子天平（梅特勒-托利多公司，MS205DU 型）。氨芐西林原料藥來源于珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司（批號(hào)為31018013001）、華北制藥集團(tuán)先泰藥業(yè)有限公司（批號(hào)為1021801021009）。乙醇、異丙醇（永華化學(xué)股份有限公司，純度≥99.9%）、丙酮（永華化學(xué)科技江蘇有限公司，純度≥99.8%）、二氯甲烷（江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司，純度≥99.9%）、三乙胺、二甲基亞砜均為色譜純（Sigma-Aldrich 公司，純度均≥99.9%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624（長度30.0 m×內(nèi)徑0.53 mm，膜厚3.0 μm）；柱溫：50 ℃保持3 min，以每分鐘10 ℃的速率升溫至200 ℃，保持8 min；進(jìn)樣口、FID 檢測器溫度分別為220 ℃與250 ℃；載氣：高純氮?dú)?；恒流模式，流速?.0 mL/min；氫氣為40 mL/min；空氣為400 mL/min；分流比8∶1。頂空進(jìn)樣模式，頂空瓶、定量環(huán)、傳輸線溫度依次為90 ℃、95 ℃、100 ℃，平衡時(shí)間30 min；進(jìn)樣量1.0 mL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 稱取二氯甲烷61.22 mg、乙醇512.36 mg、丙酮508.49 mg、異丙醇501.27 mg、三乙胺515.39 mg，置同一100 mL 量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備溶液，精密量取1.0 mL，置50 mL 量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5 mL 置20 mL 頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約0.1 g，精密稱定，置20 mL 頂空瓶中，加5 mL 二甲基亞砜使溶解，密封，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺色譜峰的理論板數(shù)均不低于5 000，各色譜峰之間分離度均大于2.0，詳見圖1。

圖1 氣相色譜圖：A.對(duì)照品溶液；B.空白溶液；C.供試品溶液

2.4 線性關(guān)系、檢出限及定量限

精密量取對(duì)照品貯備溶液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，置50 mL 量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL 頂空瓶中，搖勻。根據(jù)上述色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積為縱坐標(biāo)（y），濃度為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行線性回歸。另取對(duì)照品溶液逐步稀釋，進(jìn)樣測定，以信噪比3∶1作為檢測限，以信噪比10∶1 作為定量限［5-8］，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系、檢出限及定量限

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液6 份，每份5.0 mL，置20 mL 頂空瓶中，密封，測定峰面積。結(jié)果乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺色譜峰的峰面積RSD 分別為0.4%、0.6%、0.1%、1.7%、1.2%（n=6）。結(jié)果表明，5種成分色譜峰的峰面積RSD 均小于2.0%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司生產(chǎn)的氨芐西林原料藥（批號(hào)為31018013001），按“2.2.2”項(xiàng)下方法，平行制備6 份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺均未檢出。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取對(duì)照品貯備溶液0.8、1.0、1.2 mL，分別置50 mL 量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為相當(dāng)于對(duì)照品溶液80%、100%、120%的溶液。再取珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司生產(chǎn)的氨芐西林原料藥（批號(hào)為31018013001）9 份，每份約0.1g，精密稱定，置20 mL 頂空瓶中，分為3 組，各3 份，分別加入相當(dāng)于對(duì)照品溶液80%、100%、120%的溶液5 mL，密封，進(jìn)樣測定并計(jì)算。結(jié)果乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺的平均回收率（n=9）分別為98.2%、97.5%、100.5%、102.1%、99.6%；RSD 分別為0.53%、0.79%、0.42%、1.23%、0.95%。

2.8 樣品測定

取2批氨芐西林原料藥各約0.1 g，精密稱定，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，并記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果2批氨芐西林原料藥中5種有機(jī)溶劑的殘留量均低于檢出限，均以未檢出計(jì)。

3 討論

3.1 殘留溶劑的限度

氨芐西林原料藥在合成過程中，涉及乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺這5種有機(jī)溶劑，根據(jù)《中國藥典》2020年版四部0861 殘留溶劑測定法中的規(guī)定［9］，二氯甲烷屬于殘留溶劑中第二類溶劑，應(yīng)該限制使用，限度為0.06%；乙醇、丙酮、異丙醇、三乙胺均為第三類溶劑，應(yīng)在藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用，限度均為0.5%。通過加樣回收率試驗(yàn)，結(jié)果測得5種殘留溶劑的平均回收率在97.5%～102.1%，RSD 在0.42%～1.23%。根據(jù)方法學(xué)研究的結(jié)果，表明該氨芐西林殘留溶劑測定方法可滿足實(shí)驗(yàn)要求，樣品測定結(jié)果符合藥典規(guī)定。

3.2 色譜柱的選擇

乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺這5種有機(jī)溶劑均能溶于二甲基亞砜，故選擇二甲基亞砜作為溶劑。本次試驗(yàn)考察的氣相色譜柱的固定液有聚乙二醇、苯基甲基硅氧烷、甲基聚硅氧烷等，結(jié)果選擇分離效果較好的DB-624 毛細(xì)管柱。

該實(shí)驗(yàn)方法快捷、簡便，靈敏度和準(zhǔn)確度都較好?？捎糜诎逼S西林原料藥中乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、三乙胺這5種有機(jī)溶劑殘留量的檢測。