何 苗，齊利麗，朱麗紅,，袁寧霞，楊小頎

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng)712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng)712046）

妊娠期缺鐵性貧血（iron deficiency anemia，IDA）是產(chǎn)科常見(jiàn)病，屬于高危妊娠因素之一，我國(guó)妊娠期IDA發(fā)病率約20%，給孕婦及胎兒造成了嚴(yán)重影響[1]。鐵是細(xì)胞能量平衡、呼吸鏈傳遞、DNA復(fù)制等必不可少的元素，機(jī)體鐵代謝穩(wěn)態(tài)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育十分重要[2]。目前，妊娠期IDA常見(jiàn)治療手段為消除病因的同時(shí)補(bǔ)充鐵劑。琥珀酸亞鐵是傳統(tǒng)補(bǔ)鐵藥物，可有效糾正貧血，但同時(shí)存在吸收不理想和副作用多的缺點(diǎn)[3]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脾腎陽(yáng)虛、氣血兩虧是貧血的發(fā)病機(jī)制，因此治療應(yīng)以氣血雙補(bǔ)為原則。當(dāng)歸補(bǔ)血湯屬中醫(yī)補(bǔ)氣生血名方，方中黃芪與當(dāng)歸配伍使用，健脾益腎、補(bǔ)氣養(yǎng)血功效顯著，目前臨床中多用于輔助化療改善癌癥預(yù)后、治療消化道出血等[4]，但其對(duì)妊娠期IDA鐵代謝的作用及調(diào)控機(jī)制報(bào)道較少。為此，本研究通過(guò)復(fù)制妊娠期IDA大鼠模型，探討當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)模型大鼠鐵代謝的調(diào)節(jié)作用，并將當(dāng)歸補(bǔ)血湯與傳統(tǒng)鐵劑聯(lián)合應(yīng)用觀察其輔助治療作用，以期為臨床治療妊娠期IDA提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6周齡SPF級(jí)健康雌性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量160～180 g，8周齡SPF級(jí)健康雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量280～320 g，均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。大鼠均于12 h/12 h明暗交替，23～25℃、相對(duì)濕度58%～60%條件下飼養(yǎng)。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)：20191001。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作符合動(dòng)物倫理學(xué)，試驗(yàn)方案符合減少、替代和優(yōu)化原則。

1.2 藥物與試劑黃芪（批號(hào)：YP1227）、當(dāng)歸（批號(hào)：70560225）均購(gòu)自北京同仁堂制藥有限公司。稱取黃芪30 g和當(dāng)歸6 g，加入500 mL水浸泡30 min，陶瓷罐煎煮1 h，紗布過(guò)濾藥物殘?jiān)@得濾液，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，獲得生藥質(zhì)量濃度1.5 g/mL的當(dāng)歸補(bǔ)血湯，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

琥珀酸亞鐵片（金陵藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H10930005，批號(hào)：20190316）；AIN-93低鐵飼料（貨號(hào)：TP0302）、AIN-93標(biāo)準(zhǔn)飼料（貨號(hào)：TP0302C）均購(gòu)自南通特洛菲飼料科技有限公司；大鼠鐵蛋白ELISA試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司，貨號(hào)：HLE20338）；兔抗大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）一抗（貨號(hào)：ab214039）、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1（TfR1）一抗（貨號(hào)：ab108985）、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2一抗（TfR2）（貨號(hào)：ab185550）、二甲金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體（Dmt1）一抗（貨號(hào)：ab55735）、膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Fpn）一抗（貨號(hào)：ab239583）均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG單抗二抗（美國(guó)艾美捷科技有限公司，貨號(hào)：4050-05）；PrimeScript RT Master Mix逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本Takara公司，貨號(hào)：RR036A）；BCA蛋白定量分析試劑盒（美國(guó)Thermo公司，貨號(hào)：23227）。

1.3 主要儀器DxH600型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（美國(guó)Beck-Man Coulter公司）；ELXSOSIU型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）；7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）；CheniDoc XRS型化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)（美國(guó)Bio-rad公司）。

1.4 造模與分組適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，取60只未孕雌鼠采用體質(zhì)量隨機(jī)排序法分為對(duì)照組、模型組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組和聯(lián)合組，每組12只。除對(duì)照組的大鼠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料、自來(lái)水喂養(yǎng)外，其余組各組的大鼠參照文獻(xiàn)[5]制備妊娠期IDA模型，即給予低鐵飼料、去離子水喂養(yǎng)，每周眼眶靜脈叢放血1 mL/次，連續(xù)4周后，眼眶靜脈叢采血檢測(cè)血紅蛋白（haemoglobin，Hb）濃度，以Hb＜110 g/L認(rèn)為造模成功，否則剔除。取IDA模型雌鼠，以2∶1比例與雄鼠合籠，次日早晨進(jìn)行陰道涂片觀察，以出現(xiàn)陰栓或精子認(rèn)為妊娠期IDA建模成功（即孕0 d）。

1.5 實(shí)驗(yàn)給藥根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[6]計(jì)算大鼠當(dāng)歸補(bǔ)血湯的臨床等效劑量為生藥7.5 g/kg，琥珀酸亞鐵的臨床等效劑量為鐵劑21.6mg/kg。當(dāng)歸補(bǔ)血湯組大鼠按生藥7.5 g/kg灌胃當(dāng)歸補(bǔ)血湯，琥珀酸亞鐵組大鼠按鐵劑21.6 mg/kg灌胃琥珀酸亞鐵，聯(lián)合組大鼠同時(shí)灌胃7.5 g/kg當(dāng)歸補(bǔ)血湯和21.6 mg/kg琥珀酸亞鐵。對(duì)照組和模型組大鼠灌胃2 mL/kg生理鹽水。各組大鼠于孕11 d開(kāi)始灌胃給藥，至產(chǎn)后21 d（斷乳）為止。

1.6 取材各組大鼠末次給藥2h后，經(jīng)眼眶靜脈叢采血1 mL，置于EDTA抗凝管中，將抗凝血置于-20℃?zhèn)溆?。另從眼眶靜脈叢采血1 mL，置于非抗凝管中，室溫靜置分層后，3 000 r/min離心10 min，取上層血清置于-20℃?zhèn)溆?。采血結(jié)束后，立即脫頸處死各組大鼠，解剖取肝臟、心臟、脾臟組織，取部分臟器組織，按照1∶9比例制備組織勻漿液，離心取上清液，將組織勻漿上清液置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 一般情況 觀察給藥期間各組大鼠一般情況變化，包括活動(dòng)情況、毛色、耳廓、腳趾色澤、體質(zhì)量變化等。

1.7.2 血液學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定抗凝血中血紅蛋白（Hb）、血細(xì)胞比容（HCT）、紅細(xì)胞（RBC）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）。

1.7.3 血清及組織中鐵蛋白（SF）含量檢測(cè) 取未抗凝血清及肝臟、心臟、脾臟組織勻漿上清液，采用ELISA試劑盒測(cè)定待測(cè)液中SF水平，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作，于酶標(biāo)儀上測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處吸光度（A）值，根據(jù)制作的濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算血清及組織中SF濃度。

1.7.4 紅細(xì)胞免疫功能指標(biāo)檢測(cè) 取1滴眼眶靜脈血，與4 mL生理鹽水混勻，離心取沉淀，再次混勻洗滌2次，最后重懸調(diào)整紅細(xì)胞密度為1.25×107個(gè)/mL；兩支試管各加入1滴紅細(xì)胞懸液，再分別加入1滴補(bǔ)體致敏和未致敏酵母多糖液，混勻、37℃孵育30min；取出后輕搖，各加入10滴生理鹽水及2滴0.25%戊二醛；混勻后涂片，自然干燥，常規(guī)瑞氏染色，高倍鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞出現(xiàn)酵母菌花環(huán)數(shù)量（以結(jié)合2個(gè)以上酵母菌的紅細(xì)胞為1個(gè)花環(huán)），結(jié)合補(bǔ)體致敏酵母菌的花環(huán)數(shù)量/200即為紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率（RBC-C3bR），結(jié)合補(bǔ)體未致敏酵母菌的花環(huán)數(shù)量/200即為紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（RBC-IcR）。

1.7.5 肝臟組織中鐵代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 取-80℃保存的肝臟組織，Trizol法提取肝組織中的總mRNA，逆轉(zhuǎn)錄法獲得互補(bǔ)鏈cDNA，以之為模板鏈進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR），反應(yīng)體系按照試劑盒說(shuō)明書(shū)設(shè)定，反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸45 s，共40個(gè)循環(huán)，以GAPDH為內(nèi)參對(duì)照，記錄擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（CT），以2-△△CT公式計(jì)算目的基因Tf mRNA、TfR1 mRNA、TfR2 mRNA、Dmt1 mRNA、Fpn mRNA的相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.7.6 肝臟組織中鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測(cè) 取-80℃保存的肝臟組織，液氮中研磨，加入RIPA裂解液，置于冰上孵育20 min，12 000 r/min離心10 min（離心半徑12 cm），取離心上清液，進(jìn)行總蛋白濃度檢測(cè)，置于100℃水浴10 min變性，取50 μg待測(cè)蛋白進(jìn)行恒定電流的SDS-PAGE電泳，將分離膠用封閉液封閉2 h后，加入封閉液稀釋的一抗（1:1 000），4℃孵育過(guò)夜，TBST洗滌3次×5 min，加入封閉液稀釋的二抗（1:5 000），室溫中孵育2 h，電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯影和定影，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)掃描，圖像處理軟件Image J進(jìn)行灰度值分析，計(jì)算Tf、TfR1、TfR2、Dmt1、Fpn與內(nèi)參GAPDH的灰度值比值，即為蛋白的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料均以（±s）表示。多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；重復(fù)計(jì)量資料比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般情況模型組9只、當(dāng)歸補(bǔ)血湯組9只、琥珀酸亞鐵組10只和聯(lián)合組10只大鼠妊娠期IDA模型復(fù)制成功，10只未復(fù)制成功的大鼠中，6只Hb＞110 g/L、4只未受孕剔除，對(duì)照組2只未受孕剔除。對(duì)照組實(shí)驗(yàn)期間無(wú)明顯異常，其余各組大鼠造模期間活動(dòng)量先增加后逐漸減少，耳廓及腳趾逐漸蒼白，毛發(fā)無(wú)光澤，孕11 d～產(chǎn)后21 d體質(zhì)量明顯低于對(duì)照組；開(kāi)始干預(yù)后，當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠進(jìn)食量增加，耳廓及腳趾顏色逐漸恢復(fù)，毛發(fā)逐漸恢復(fù)光澤，以聯(lián)合組改善最為明顯；琥珀酸亞鐵組大鼠偶見(jiàn)嘔吐情況，孕11 d～產(chǎn)后21 d體質(zhì)量明顯高于模型組。（見(jiàn)圖1）

圖1 各組大鼠給藥期間（孕11 d～產(chǎn)后21 g）體質(zhì)量變化（±s）

2.2 各組大鼠血液學(xué)指標(biāo)比較模型組大鼠Hb、HCT、RBC、MCHC水平均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠Hb、HCT、RBC、MCHC水平均高于模型組（P＜0.05），且聯(lián)合組大鼠Hb、HCT、RBC、MCHC水平均高于琥珀酸亞鐵組和當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05），琥珀酸亞鐵組大鼠Hb、HCT、RBC、MCHC水平高于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）。（見(jiàn)表2）

表2 各組大鼠血液學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表2 各組大鼠血液學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸補(bǔ)血湯組比較，cP＜0.05；與琥珀酸亞鐵組比較，dP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 當(dāng)歸補(bǔ)血湯劑量（g/kg） 琥珀酸亞鐵劑量（mg/kg） Hb（g/L） HCT（%） RBC（1012/L） MCHC（g/L）對(duì)照組 10 - - 140.62±5.60 45.58±1.54 6.50±0.78 322.19±11.38模型組 9 - - 87.50±4.28a 16.12±0.98a 4.11±0.60a 240.67±10.02a當(dāng)歸補(bǔ)血湯組9 7.5 - 98.85±6.14b 25.40±1.31b 4.75±0.52b 255.81±9.84b琥珀酸亞鐵組10 - 21.6 132.60±7.22bc 36.87±1.26bc 5.42±0.61bc 289.90±10.14bc聯(lián)合組 10 7.5 21.6 146.78±6.55bc d 44.20±1.24bc d 6.60±0.58bc d 320.65±10.22bc d F 85.694 90.220 101.357 65.784 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 各組大鼠血清及各臟器組織中鐵含量比較模型組大鼠血清及肝臟、心臟、脾臟組織中鐵含量均低于對(duì)照組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠血清及肝臟、心臟、脾臟組織中鐵含量均高于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠血清及肝臟、心臟、脾臟組織中鐵含量均高于琥珀酸亞鐵組和當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05），琥珀酸亞鐵組大鼠血清及肝臟中鐵含量均高于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）。（見(jiàn)表3）

表3 各組大鼠血清及肝臟、心臟、脾臟組織中鐵含量比較（±s）

表3 各組大鼠血清及肝臟、心臟、脾臟組織中鐵含量比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸補(bǔ)血湯組比較，cP＜0.05；與琥珀酸亞鐵組比較，dP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 當(dāng)歸補(bǔ)血湯劑量（g/kg） 琥珀酸亞鐵劑量（mg/kg） 血清（ng/mL） 肝臟（μg/g） 心臟（μg/g） 脾臟（μg/g）對(duì)照組 10 - - 320.60±15.16 485.60±10.21 382.40±8.94 375.49±8.57模型組 9 - - 144.58±12.20a 314.52±11.34a 256.31±10.25a 221.67±9.54a當(dāng)歸補(bǔ)血湯組 9 7.5 - 189.36±13.37b 369.40±12.20b 301.24±11.34b 291.36±10.06b琥珀酸亞鐵組 10 - 21.6 264.37±12.69bc 390.44±10.94bc 311.50±12.40b 305.87±12.31b聯(lián)合組 10 7.5 21.6 330.55±14.08bcd 445.90±11.87bcd 367.17±11.94bcd 344.05±11.58bcd F 224.310 105.681 54.220 51.692 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.4 各組大鼠紅細(xì)胞免疫功能比較模型組大鼠RBC-C3bR水平低于對(duì)照組（P＜0.05），而RBC-IcR水平高于對(duì)照組（P＜0.05）。當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠RBC-C3bR水平均高于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠RBC-C3bR水平高于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組大鼠RBC-C3bR水平高于琥珀酸亞鐵組（P＜0.05）。當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠RBC-IcR水平均低于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠RBC-IcR水平低于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05），當(dāng)歸補(bǔ)血湯組大鼠RBC-IcR水平低于琥珀酸亞鐵組（P＜0.05）。（見(jiàn)表4）

表4 各組大鼠紅細(xì)胞免疫功能比較（±s，%）

表4 各組大鼠紅細(xì)胞免疫功能比較（±s，%）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸補(bǔ)血湯組比較，cP＜0.05；與琥珀酸亞鐵組比較，dP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）當(dāng)歸補(bǔ)血湯劑量（g/kg）琥珀酸亞鐵劑量（mg/kg）RBC-C3bR RBC-IcR對(duì)照組 10 - - 7.15±0.72 4.21±0.66模型組 9 - - 3.06±0.60a 8.50±0.85a當(dāng)歸補(bǔ)血湯 9 7.5 - 7.02±0.85b 4.10±0.61b琥珀酸亞鐵組10 - 21.6 5.38±0.84bc 7.25±0.70bc聯(lián)合組 10 7.5 21.6 8.62±0.91bcd 3.09±0.46bcd F 62.715 95.307 P 0.000 0.000

2.5 各組大鼠肝臟鐵代謝相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量比較模型組大鼠Tf mRNA、TfR1 mRNA、TfR2 mRNA、Dmt1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組（P＜0.05），F(xiàn)pn mRNA相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠Tf mRNA、TfR1 mRNA、TfR2 mRNA、Dmt1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠Tf mRNA、TfR1 mRNA、TfR2 mRNA、Dmt1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于琥珀酸亞鐵組（P＜0.05），琥珀酸亞鐵組大鼠Tf mRNA、TfR1 mRNA、TfR2 mRNA、Dmt1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠Fpn mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠Fpn mRNA相對(duì)表達(dá)量低于琥珀酸亞鐵組（P＜0.05），琥珀酸亞鐵組大鼠Fpn mRNA相對(duì)表達(dá)量低于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）。（見(jiàn)圖2）

圖2 各組大鼠肝臟鐵代謝相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

2.6 各組肝臟鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)比較模型組大鼠Tf、TfR1、TfR2、Dmt1蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組（P＜0.05），F(xiàn)pn蛋白相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠Tf、TfR1、TfR2、Dmt1蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠Tf、TfR1、TfR2、Dmt1蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于琥珀酸亞鐵組（P＜0.05），琥珀酸亞鐵組大鼠Tf、TfR1、TfR2、Dmt1蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）；當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠Fpn蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于模型組（P＜0.05），其中聯(lián)合組大鼠Fpn蛋白相對(duì)表達(dá)量低于琥珀酸亞鐵組（P＜0.05），琥珀酸亞鐵組大鼠Fpn蛋白相對(duì)表達(dá)量低于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組（P＜0.05）。（見(jiàn)圖3～4）

圖3 各組大鼠肝臟鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)Western blotting圖

圖4 各組大鼠肝臟鐵代謝相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

3 討 論

鐵是Hb及機(jī)體多種代謝酶的重要組成部分，是機(jī)體必需微量元素，育齡期女性由于生理周期的存在更易發(fā)生貧血，且妊娠后需供應(yīng)胎兒能量，更易發(fā)生IDA[7]。研究證實(shí)，妊娠期IDA不僅對(duì)母體產(chǎn)生不良影響，使患者產(chǎn)生眩暈、神疲乏力、睡眠質(zhì)量不佳等癥狀，而且對(duì)胎兒體質(zhì)量及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育也造成嚴(yán)重影響[8-9]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，部分妊娠期IDA患者對(duì)傳統(tǒng)鐵劑不能耐受或補(bǔ)鐵效果不理想，服藥依從性變差。因此，在祛除病因的同時(shí)有效補(bǔ)充鐵劑十分重要。

IDA屬中醫(yī)“黃病”“血虛”等范疇，由于胃腸疾病、妊娠失養(yǎng)、慢性失血等多種因素，導(dǎo)致脾胃虛弱，致胃受納無(wú)力，氣血生化無(wú)源，則致血虛。根據(jù)中醫(yī)辨證原則，健脾益氣、氣血雙補(bǔ)為本病治療原則[10]。中醫(yī)藥具有療效確切且副作用少的優(yōu)點(diǎn)，中西醫(yī)結(jié)合治療妊娠期IDA逐漸成為研究熱點(diǎn)。近年來(lái)，已有文獻(xiàn)對(duì)中西醫(yī)結(jié)合治療妊娠期IDA進(jìn)行了報(bào)告，孫麗穎等[11]將生血寧片與琥珀酸亞鐵聯(lián)合治療67例妊娠期IDA患者，取得良好效果，治療后血液學(xué)指標(biāo)及鐵代謝指標(biāo)均得到改善。當(dāng)歸補(bǔ)血湯源自《內(nèi)外傷辯惑論》，方中黃芪歸脾、肺經(jīng)，善于補(bǔ)氣，當(dāng)歸歸脾、肝、心經(jīng)，善于補(bǔ)血，以黃芪為君藥，重補(bǔ)脾肺之氣而固肌表，以資化源，輔以當(dāng)歸養(yǎng)血和營(yíng)，氣旺血生。何文靜等[12]將當(dāng)歸補(bǔ)血湯與鐵劑聯(lián)合用于治療老年心力衰竭伴輕度貧血患者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者貧血癥狀改善，Hb水平升高，提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有改善貧血的作用。阿魏酸、黃芪甲苷均是黃芪有效活性成分，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷可改善機(jī)體造血功能、提高免疫力[13]。另有研究顯示，當(dāng)歸中主要活性成分當(dāng)歸多糖可與三價(jià)鐵形成多糖鐵復(fù)合物，有效促進(jìn)鐵的吸收，改善IDA血液學(xué)指標(biāo)及鐵代謝指標(biāo)[14]。上述研究均說(shuō)明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯有助于促進(jìn)機(jī)體對(duì)鐵的吸收，改善鐵缺乏癥狀。

本研究發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠Hb、HCT、RBC、MCHC水平，血清及各臟器組織中鐵含量均升高，且聯(lián)合組最高，提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯可輔助琥珀酸亞鐵改善妊娠期IDA大鼠鐵缺乏癥狀。與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠RBC-C3bR水平升高，其中聯(lián)合組高于琥珀酸亞鐵組，琥珀酸亞鐵組高于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組；與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯組、琥珀酸亞鐵組及聯(lián)合組大鼠RBC-IcR水平降低，其中聯(lián)合組低于琥珀酸亞鐵組，琥珀酸亞鐵組低于當(dāng)歸補(bǔ)血湯組，提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯可輔助琥珀酸亞鐵改善妊娠期IDA大鼠紅細(xì)胞免疫功能。分析其原因可能與當(dāng)歸補(bǔ)血湯改善貧血大鼠機(jī)體自身修復(fù)功能，紅細(xì)胞免疫復(fù)合物減少有關(guān)。此外，當(dāng)歸補(bǔ)血湯能提高機(jī)體對(duì)鐵的利用率，促進(jìn)紅細(xì)胞生成，改善紅細(xì)胞免疫功能。

機(jī)體中鐵代謝穩(wěn)態(tài)依賴于鐵的吸收、存儲(chǔ)、釋放等過(guò)程，肝主藏血，故本研究以肝臟為主要研究對(duì)象觀察鐵代謝過(guò)程。機(jī)體吸收鐵后大部分用于合成血紅蛋白進(jìn)而生成Hb，血紅蛋白主要于肝臟合成[15]。肝臟主要由Tf途徑和非Tf途徑結(jié)合鐵，TfR屬于跨膜蛋白，主要包括TfR1、TfR2兩種亞型，介導(dǎo)Tf對(duì)鐵的攝取，Dmt1介導(dǎo)非Tf途徑結(jié)合鐵[16]。Fpn是分布于細(xì)胞表面的鐵轉(zhuǎn)出相關(guān)蛋白，負(fù)責(zé)將細(xì)胞漿中的鐵轉(zhuǎn)入血液循環(huán)。研究顯示，當(dāng)機(jī)體鐵儲(chǔ)存量增加時(shí)Fpn表達(dá)下調(diào)，促進(jìn)鐵排出體外，反之表達(dá)增加，滿足細(xì)胞對(duì)鐵的需求[17]。本研究給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯干預(yù)后，當(dāng)歸補(bǔ)血湯組及聯(lián)合組大鼠Tf mRNA、TfR1 mRNA、TfR2 mRNA、Dmt1 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于模型組，F(xiàn)pn mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于模型組，且聯(lián)合組改變更為明顯，提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯可直接或輔助琥珀酸亞鐵調(diào)節(jié)肝臟中鐵代謝相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)鐵代謝發(fā)揮改善妊娠期IDA大鼠鐵缺乏癥狀的作用。

綜上所述，當(dāng)歸補(bǔ)血湯可輔助琥珀酸亞鐵改善妊娠期IDA大鼠鐵缺乏癥狀，可能通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟中鐵代謝相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)鐵代謝發(fā)揮作用。本研究主要集中于當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)孕鼠鐵代謝的影響，在進(jìn)一步的研究中應(yīng)研究其對(duì)子代鐵代謝及生長(zhǎng)發(fā)育的影響，為臨床妊娠期IDA防治提供更多依據(jù)。