張 琴，蘇占營(yíng)，吳成亮，辜 敏，江旺航

江西省九江市婦幼保健院：1.檢驗(yàn)科；2輔助生殖科，江西九江 332000

抑制素B(INH-B)是由睪丸支持細(xì)胞分泌的糖蛋白激素，是由1個(gè)α亞單位和1個(gè)β亞單位組成異二聚體，受下丘腦-垂體-性腺軸激素調(diào)控，也受睪丸內(nèi)環(huán)境改變的影響，血清INH-B比精漿INH-B穩(wěn)定性高,測(cè)量其水平可了解精子生發(fā)狀況[1-4]。男性INH-B缺乏可降低睪丸曲細(xì)精管生精功能甚至導(dǎo)致無(wú)精子癥，有研究者將血清INH-B視為男性精子產(chǎn)生的標(biāo)志物之一，其水平反映男性生精功能[5-6]。研究表明不良生活習(xí)慣和工作壓力加大使男性精子質(zhì)量逐年下降且呈加速下降趨勢(shì)，目前由無(wú)精子癥導(dǎo)致的不孕不育約占男性不育癥的15%且逐年呈上升趨勢(shì)，睪丸活檢依然是診斷無(wú)精子癥的金標(biāo)準(zhǔn)，但其具有巨大的創(chuàng)傷性和潛在并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)[7-9]。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)INH-B和血清性激素水平，探討兩者的關(guān)聯(lián)性，以期為睪丸活檢取精提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2020年12月在本院接受輔助生殖技術(shù)治療的316例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，所有患者均通過(guò)精液常規(guī)檢查并記錄不育年限、睪丸總體積及是否有吸煙、酗酒等不良嗜好史。根據(jù)患者精液濃度檢查結(jié)果將患者分為4組，劃分標(biāo)準(zhǔn)：濃度正常組，精子濃度≥15×106/mL(A組，80例)；輕中度少精子組，精子濃度為5×106～<15×106/mL(B組，104例)；嚴(yán)重少精子組，精子濃度<5×106/mL(C組，78例)；無(wú)精子癥組：兩次精液常規(guī)檢查(3 000 r/min離心15 min)均未見(jiàn)精子(D組，54例)。將D組患者根據(jù)睪丸活檢精子抽吸術(shù)(TESA)的取精結(jié)果分為梗阻性無(wú)精子癥(OA)組(34例)及非梗阻性無(wú)精子癥(NOA)組(20例)2個(gè)亞組。

1.2方法

1.2.1精液留取與分析 全部患者禁欲3～5 d，上午8:00—10:00手淫取精，精液全部收集于無(wú)菌容器中并按WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》第5版標(biāo)準(zhǔn)程序處理，分析精子濃度。

1.2.2INH-B及性激素測(cè)定 早上8:00—9:00空腹抽血3 mL于促凝管中，混勻靜置2 h后3 000 r/min離心10 min。取上層血清采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T)水平，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清INH-B水平。

1.2.3精漿INH-B測(cè)定 精液在37 ℃環(huán)境中液化30 min后3 000 r/min離心10 min，取上層精漿采用ELISA檢測(cè)INH-B水平。

1.3TESA 患者取仰臥位，碘伏消毒、鋪巾，1%利多卡因行精索神經(jīng)局部麻醉。左手固定睪丸，右手握注射器經(jīng)皮刺入睪丸，將穿刺所取的組織物注入培養(yǎng)皿中磨碎以達(dá)到將內(nèi)部精子游離出來(lái)的目的，在倒置顯微鏡下觀察是否有活動(dòng)精子。當(dāng)?shù)?次觀察到活動(dòng)精子即為睪丸活檢成功，如果第1次未觀察到活動(dòng)精子，休養(yǎng)15 d后進(jìn)行第2次活檢，依然沒(méi)有觀察到活動(dòng)精子即為活檢失敗，判定為NOA。兩次活檢中任意一次觀察到活動(dòng)精子即判定為睪丸活檢成功(OA患者)。

2 結(jié) 果

2.1各組一般資料及INH-B水平比較 雙側(cè)睪丸總體積比較：A組和B組雙側(cè)睪丸總體積明顯大于OA組和NOA組(P<0.05)。血清INH-B水平比較：A組和OA組明顯高于C組和NOA組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組與OA組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；精漿INH-B水平比較：A組顯著高于其余各組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組一般資料及INH-B水平比較

2.2各組血清性激素水平比較 C組和NOA組FSH、LH水平顯著高于其余各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組和B組T水平顯著高于其余各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組血清性激素水平比較

2.3INH-B水平與性激素的相關(guān)性分析 血清INH-B水平與血清FSH及LH水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；精漿INH-B水平與血清T水平呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 INH-B水平與性激素水平的相關(guān)性分析(r)

3 討 論

男性精子生發(fā)障礙是指曲細(xì)精管內(nèi)精子生發(fā)不良，臨床表現(xiàn)為少精子癥、弱精子癥、NOA，其中弱精子癥和少精子癥是最常見(jiàn)的表現(xiàn)[10]。不良的生活習(xí)慣和過(guò)大的工作壓力導(dǎo)致男性不育癥患病率逐年升高[11-12]，輸精管阻塞導(dǎo)致無(wú)精子癥患者的生精功能與健康人相似，而NOA患者和重度少精子癥患者生精功能都很差，其中多數(shù)人因生精功能障礙而影響精子生成，睪丸生精功能的差異最終導(dǎo)致精子濃度的差異[12-15]。

INH-B是睪丸支持細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白激素，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族成員[16-17]。它由曲細(xì)精管分泌，受FSH調(diào)控，具有晝夜分泌節(jié)律性[18]，與精子的生發(fā)狀態(tài)存在明顯相關(guān)性，其水平高低反映了生精上皮的功能是否良好，被認(rèn)為是男性生成精子的標(biāo)志物[19]。男性生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié)過(guò)程中，INH-B起到了重要作用，其與FSH形成穩(wěn)定的負(fù)反饋調(diào)控關(guān)系。它在生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié)過(guò)程中可以特異地作用于腺垂體細(xì)胞，對(duì)促性腺激素釋放激素(GnRH)誘導(dǎo)的FSH分泌具有選擇性的抑制作用，并呈劑量依賴關(guān)系，對(duì)FSH具有極強(qiáng)的負(fù)反饋?zhàn)饔肹20]。INH-B作用于睪丸，能減少FSH的生成，進(jìn)而增加精子的生成，并且刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生睪酮[21]。INH-B的水平會(huì)在精子生成障礙時(shí)出現(xiàn)變化，通過(guò)測(cè)定其水平可以對(duì)精子生成狀態(tài)進(jìn)行評(píng)估。INH-B作為評(píng)估精子生成的指標(biāo)，可為臨床醫(yī)師診斷生精障礙和睪丸功能減退提供參考依據(jù)。

本研究表明，血清INH-B水平與FSH呈負(fù)相關(guān)，A組血清和精漿的INH-B水平高于NOA組(P<0.05)，提示非無(wú)精子癥患者INH-B水平可作為評(píng)價(jià)生精功能的指標(biāo)之一。無(wú)精子癥的發(fā)生機(jī)制尚不完全明確，如果能經(jīng)過(guò)睪丸活檢獲得精子，借助第2代試管嬰兒助孕技術(shù)可使部分患者生育自己的后代，但在實(shí)際工作中往往活檢結(jié)局不確定，很多患者在受到身體創(chuàng)傷后無(wú)法獲得精子，進(jìn)一步造成心理創(chuàng)傷。無(wú)精子癥的兩個(gè)亞組間(OA組與NOA組)精漿INH-B水平接近，提示OA組血清中的INH-B由睪丸支持細(xì)胞生成后在進(jìn)入曲細(xì)精管的過(guò)程中受阻，受血液累積效應(yīng)的影響導(dǎo)致血清中的INH-B水平偏高，使OA組精漿中的INH-B水平降低，這與NOA組患者睪丸支持細(xì)胞INH-B生成減少導(dǎo)致的精漿內(nèi)INH-B水平降低的原理不同。這提示臨床醫(yī)師可以根據(jù)INH-B在血清及精漿中的水平差異初步判斷無(wú)精子癥的類型。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于血清及精漿中的INH-B水平與睪丸活檢結(jié)果的相關(guān)性研究還不是很多，既往研究提示INH-B在精子生發(fā)的過(guò)程中的預(yù)測(cè)價(jià)值高于FSH[22]。睪丸支持細(xì)胞在精子的生發(fā)過(guò)程中起著重要的營(yíng)養(yǎng)支持和屏障作用，臨床基礎(chǔ)研究表明男性INH-B全部由睪丸支持細(xì)胞分泌，具有高度特異性[23]。目前在INH-B的相關(guān)研究中，均將其視為無(wú)精子癥患者睪丸取精的預(yù)期指標(biāo)，INH-B水平過(guò)低往往預(yù)示著睪丸活檢成功率低，這種情況下漸進(jìn)性地讓患者接受供精助孕才是輔助生殖技術(shù)的目的，過(guò)分強(qiáng)調(diào)睪丸活檢是不可取的。本研究結(jié)果提示，對(duì)于無(wú)精子癥患者，如果其血清INH-B水平高以及雙側(cè)睪丸體積正常，往往預(yù)示該患者為OA患者，睪丸內(nèi)的精子聚集無(wú)法經(jīng)正常手淫取精排出，此時(shí)直接取睪丸組織活檢在倒置顯微鏡下獲得精子的概率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于NOA患者。臨床上可以將INH-B作為預(yù)測(cè)不同病因的無(wú)精子癥患者睪丸活檢取精結(jié)局的指標(biāo)。