桂 強(qiáng)

黃石有色醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北黃石 435005

惡性腫瘤、結(jié)核性胸膜炎等病理改變均可導(dǎo)致胸腔積液/腹水的發(fā)生，患者主要表現(xiàn)為呼吸困難、胸痛、腹痛、惡心嘔吐等癥狀，嚴(yán)重影響患者的身體健康，而準(zhǔn)確判斷胸腔積液/腹水的良惡性對(duì)醫(yī)師診療疾病具有重要的意義[1-2]。近年來，隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，癌胚抗原(CEA)、糖類抗原199(CA199)等血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在惡性胸腔積液/腹水的診斷中得到了廣泛應(yīng)用，該方法具有可定性、可定量的特點(diǎn)，但診斷靈敏度、特異度較低，容易出現(xiàn)漏診、誤診[3-4]。細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查具有操作便捷、快速，特異度較高的優(yōu)勢(shì)，在良惡性胸腔積液/腹水的鑒別中得到了逐步應(yīng)用和推廣[5-6]。為了探討更加準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，本文就細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)惡性胸腔積液/腹水的診斷價(jià)值進(jìn)行了探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院收治的93例胸腔積液/腹水患者，其中胸腔積液患者57例，腹水患者36例，病例選擇時(shí)間為2018年3月至2020年3月。根據(jù)胸腔積液/腹水病理檢查結(jié)果，將患者分為良性組(45例)與惡性組(48例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)因胸腔積液/腹水而遵醫(yī)囑行胸腔積液/腹水抽取的病例；(2)臨床資料保存完整；(3)患者同意配合本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)血液系統(tǒng)疾病者；(2)癲癇患者；(3)妊娠或哺乳期女性；(4)認(rèn)知功能障礙、語言表達(dá)能力障礙、精神病等無法配合研究者。患者中男50例，女43例；年齡34～82歲；平均(58.01±9.67)歲；肺癌21例，胃癌13例，膽管癌8例，卵巢癌4例，肝癌2例，結(jié)核性胸膜炎20例，肝炎14例，肝硬化11例。患者均對(duì)本研究知情同意，本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過。良、惡性組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具有可比性。見表1。

表1 兩組一般資料對(duì)比

1.2方法 使用EDTA-K2專用抗凝管收集患者胸腔積液/腹水10 mL，1 600 r/min離心10 min，取上清液行CEA、CA199、腺苷脫氨酶(ADA)檢測(cè)。將管底剩余殘?jiān)鶆蚧旌虾笥梦芪?0 μL，制作3張涂片，待其自然干燥后使用瑞士染色液進(jìn)行涂色處理，使用OLYMPUS CX31-P顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。每張涂片選出3～9個(gè)異常細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)量化檢測(cè)，從細(xì)胞體大小、核質(zhì)比、細(xì)胞核大小、細(xì)胞分布特點(diǎn)、核仁/核5個(gè)方面觀察細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞形態(tài)學(xué)計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)如下：大小差異>2倍計(jì)1分，大小差異≤2倍計(jì)0.5分，大小一致計(jì)0分；核質(zhì)比<0.3計(jì)0分，0.3～0.5計(jì)0.5分，>0.5計(jì)1分；細(xì)胞核直徑<12 μm計(jì)0分，12～20 μm計(jì)0.5分，>20 μm計(jì)1分；核仁/核<0.20計(jì)0分，0.20～0.25計(jì)0.5分，>0.25計(jì)1分；細(xì)胞分布特點(diǎn)，單個(gè)、質(zhì)界清楚計(jì)0分，質(zhì)界模糊計(jì)0.5分，成堆、細(xì)胞質(zhì)融合計(jì)1分?？偡e分≥3.5分即可判斷為陽性[7]。采用羅氏Cobas e601電化學(xué)發(fā)光儀，借助化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定CEA、CA199水平，配套試劑購于上海雙贏生物科技有限公司；采用TOSHIBA KF120全自動(dòng)生化分析儀，使用速率法測(cè)定ADA，檢測(cè)試劑購于北京利德曼生化股份有限公司。ADA參考值<25 U/L；CEA參考值<5 U/L；CA199參考值<37 U/mL，超過參考值判定為陽性，在參考值范圍內(nèi)判斷為陰性[8]。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較兩組良惡性胸腔積液/腹水患者的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、CEA、CA199、ADA檢測(cè)陽性率。(2)分析細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA與CEA、CA199、ADA單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)診斷惡性胸腔積液/腹水的結(jié)果，聯(lián)合診斷時(shí)，單項(xiàng)指標(biāo)為陽性即可判斷為陽性，均為陰性即可判斷為陰性[9]。(3)以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA，以及CEA、CA199、ADA單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)診斷惡性胸腔積液/腹水的效能，包括準(zhǔn)確性、特異度、靈敏度、漏診率、誤診率。靈敏度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))，特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))，準(zhǔn)確性=(真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù))/總例數(shù)，漏診率=假陰性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))，誤診率=假陽性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、CEA、CA199、ADA陽性率對(duì)比 惡性組患者的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、CEA、CA199、ADA陽性率高于良性組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者細(xì)胞形態(tài)學(xué)、CEA、CA199、ADA陽性率對(duì)比[n(%)]

2.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA檢測(cè)診斷惡性胸腔積液/腹水的結(jié)果對(duì)比 見表3。

表3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA檢測(cè)診斷惡性胸腔積液/腹水的結(jié)果對(duì)比(n)

2.3聯(lián)合檢測(cè)與各指標(biāo)單項(xiàng)檢測(cè)的診斷效能評(píng)價(jià) 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA診斷惡性胸腔積液/腹水的靈敏度、準(zhǔn)確性高于CEA、CA199、ADA單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果(P<0.05)，漏診率低于CEA、CA199、ADA單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果(P<0.05)，特異度、誤診率與CEA、CA199、ADA單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 聯(lián)合檢測(cè)與各指標(biāo)單項(xiàng)檢測(cè)的診斷效能評(píng)價(jià)[%(n/n)]

3 討 論

惡性胸腔積液/腹水主要由乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤引發(fā)，隨著患者病情的發(fā)展，癌細(xì)胞擴(kuò)散，嚴(yán)重威脅患者的生命健康。既往采用的涂片法在實(shí)際操作中易受到人為因素的影響，存在陽性率低、腫瘤分型難度高等方面的缺陷[10-11]。脫落細(xì)胞學(xué)檢查可能會(huì)受到細(xì)胞變異等因素的干擾，出現(xiàn)漏診、誤診情況。臨床中腫瘤患者體內(nèi)代謝的有毒產(chǎn)物會(huì)刺激機(jī)體組織細(xì)胞，加快細(xì)胞代謝，致使大量腫瘤抗原釋放入血后引起胸腔積液/腹水，使胸腔積液/腹水中腫瘤標(biāo)志物水平升高情況[12-13]。由于不同腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腔積液/腹水的靈敏度、特異度存在一定差異，因此聯(lián)合檢測(cè)已成為未來診斷惡性胸腔積液/腹水的主要發(fā)展趨勢(shì)[14-15]。

既往關(guān)于血清腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腔積液/腹水的報(bào)道較多，但大多集中在陽性率、準(zhǔn)確性方面，而有關(guān)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA的報(bào)道較為少見，且本研究對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)指標(biāo)展開了量化分析，并從細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)惡性胸腔積液/腹水的鑒別診斷價(jià)值展開了探討。本研究結(jié)果顯示，與良性胸腔積液/腹水患者比較，惡性胸腔積液/腹水患者的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、CEA、CA199、ADA陽性率更高，提示患者的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、ADA、CA199、CEA變化可為醫(yī)師區(qū)分良惡性胸腔積液/腹水提供參考。分析后可知，CEA、CA199是常用的腫瘤標(biāo)志物之一，CEA主要存在于惡性組織細(xì)胞表面、胚胎胃腸黏膜上皮，CA199屬于胃腸癌相關(guān)抗原，與結(jié)腸癌、胃癌、膽囊癌、胰腺癌有關(guān)，在惡性胸腔積液/腹水患者中，胸腔積液/腹水中的CEA、CA199不易釋放入血被肝臟代謝，因此通常呈高表達(dá)狀態(tài)。ADA是腺嘌呤核苷代謝途徑中的一種酶，在人體脾、胸、腹、淋巴結(jié)等組織部位中廣泛分布，其表達(dá)水平與人體免疫功能密切相關(guān)，ADA在未分化、未成熟的細(xì)胞中呈高表達(dá)狀態(tài)，而在惡性腫瘤細(xì)胞中由于T淋巴細(xì)胞受到抑制，ADA活性會(huì)隨之降低。細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是一種新興的檢查方法，能夠根據(jù)細(xì)胞形態(tài)特征進(jìn)行積分，更加客觀地描述細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞形態(tài)的量化檢測(cè)。因此，細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查、ADA、CEA、CA199水平變化可為醫(yī)師篩查惡性胸腔積液/腹水提供重要的參考依據(jù)。

相關(guān)報(bào)道顯示，胸腔積液/腹水細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查能夠通過描述異常細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤細(xì)胞，輔助醫(yī)師診斷惡性胸腔積液/腹水[16]。本文中細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA檢測(cè)診斷惡性胸腔積液/腹水的靈敏度、準(zhǔn)確性分別為91.67%、91.40%。高于CEA、CA199、ADA單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果，漏診率為8.33%，低于CEA、CA199、ADA單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果，特異度、誤診率與CEA、CA199、ADA單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這說明采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA檢測(cè)可提高診斷惡性胸腔積液/腹水的靈敏度和準(zhǔn)確性，減少漏診，為醫(yī)師準(zhǔn)確檢出惡性胸腔積液/腹水提供參考。本研究還發(fā)現(xiàn)，單一腫瘤標(biāo)志物診斷惡性胸腔積液/腹水的靈敏度、特異度存在一定差異，多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可彌補(bǔ)單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)存在的不足。而聯(lián)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查能夠輔助醫(yī)師從細(xì)胞體大小、細(xì)胞核大小、核質(zhì)比、細(xì)胞分布等處入手，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變鑒別惡性腫瘤細(xì)胞，并將細(xì)胞形態(tài)特征與ADA、CA199、CEA檢測(cè)相結(jié)合，有效提高診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少漏診病例。本研究中細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA診斷惡性胸腔積液/腹水僅漏診4例，漏診率較低。

綜上所述，在惡性胸腔積液/腹水診斷中應(yīng)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合CEA、CA199、ADA檢測(cè)可明顯提高診斷結(jié)果的靈敏度、準(zhǔn)確性，為醫(yī)師鑒別診斷惡性胸腔積液/腹水提供可靠的參考依據(jù)，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。但值得注意的是，為了保證細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的準(zhǔn)確性，建議在采集標(biāo)本后30 min內(nèi)盡快送檢，并在1 h內(nèi)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行固定和處理，并由工作經(jīng)驗(yàn)豐富、熟悉掌握細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)的同一位檢驗(yàn)人員完成各項(xiàng)檢測(cè)操作，以減少人為因素對(duì)檢查結(jié)果帶來的干擾，保障臨床診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。