肖 揚 陳 康 叢倩倩 安秀榮 邊銀丙*

（1.華中農(nóng)業(yè)大學應用真菌研究所，武漢 430070；2.泰安市農(nóng)業(yè)科學院，山東 泰安 271000）

平菇黃斑病主要是由托拉斯假單胞桿菌（Pseudomonas tolaasii）引起的細菌性病害。平菇種質資源非常豐富，利用品種抗病性防控黃斑病是最經(jīng)濟有效的方法之一。前人對平菇品種黃斑病抗性的室內(nèi)外測定方法進行了探索[1-3]；關注到菌蓋色澤與抗病性存在一定的關系[4,5]；并通過人工接種病原菌試驗將11 個品種的抗病性劃分為高感、中感、中抗和高抗4 個類型，發(fā)現(xiàn)品種抗病性與子實體顏色及出菇溫度存在一定的相關性[6]。以下報道平菇不同品種自然發(fā)病情況的調(diào)查結果，以及品種抗病性和病斑擴展速度與菌柄硬度、菌蓋色澤的關系研究結果。

1 材料與方法

1.1 供試品種及其栽培

選擇97 個平菇品種（表1），在山東省泰安市農(nóng)業(yè)科學院食用菌栽培基地進行春季大棚栽培試驗。大棚長約30 m，寬約10 m，高約3.5 m。采用常規(guī)玉米芯為主料的栽培配方：玉米芯60%、棉籽殼27%、麥麩10%、過磷酸鈣1%、石灰1%、石膏1%。拌料堆制發(fā)酵后，裝袋滅菌。每個供試品種栽培30 袋，設3 個重復，每重復10 袋。

表1 供試平菇品種分別按菌柄硬度和菌蓋色澤的分類

1.2 發(fā)病情況調(diào)查方法與分級標準

病害調(diào)查在2018年4月春季進行。田間調(diào)查由3 人小組共同進行，對每個商品菇進行菌柄硬度和菌蓋色澤判定。依據(jù)菌柄硬度將供試品種分為菌柄偏硬和菌柄偏軟兩類。依據(jù)菌蓋色澤將供試品種分為色澤偏深和色澤偏淺兩類，前者包括黑褐色和灰黑色，后者包括灰色、灰白色和灰褐色。

統(tǒng)計商品菇中直徑大于2 cm 的菌蓋發(fā)病情況，將發(fā)病程度分為6 級：1 級為無病斑；2 級為有零星小病斑或出現(xiàn)少許黃化，病斑不凹陷；3 級為病斑或黃化面積不超過表面積20%，少量病斑凹陷；4 級為病斑或黃化面積達到20%～50%，少量病斑凹陷；5 級為病斑或黃化面積超過50%，但菌蓋不腐爛；6 級為病斑或黃化面積達到80%，或菌蓋變軟腐爛。

統(tǒng)計分析供試品種菌蓋發(fā)病率和病情指數(shù)。病情指數(shù)計算方法為：病情指數(shù)=Σ（各病級的子實體個數(shù)×病級值)／（調(diào)查總個數(shù)×最高級值）×100。

1.3 品種抗性室內(nèi)鑒定與觀察

平菇黃斑病病原菌托拉斯假單胞桿菌菌株為本實驗室保藏菌株，經(jīng)過菌落形態(tài)、16S rDNA 序列分析和Biolog 系統(tǒng)鑒定。制備菌懸液作為接種體，選擇色澤偏深或偏淺的26 個代表性栽培品種，采用活體傷口接種方法，待菌蓋長至直徑約2 cm時，用砂紙輕輕摩擦表面2 次造成微傷口，然后接種，測定品種抗病性。每處理3 次重復，每重復接種5 個菌蓋。菇房空氣相對濕度保持90%以上，連續(xù)觀察發(fā)病癥狀。

1.4 試驗結果統(tǒng)計分析

用Excel 2010 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，IBM SPSS Statistics 24 軟件進行組間的t測驗。

2 結果與分析

2.1 基于菌柄硬度與菌蓋色澤的供試品種歸類

對97 個平菇供試品種依據(jù)菌柄硬度和菌蓋色澤進行歸類，結果見表1。74 個品種歸于菌柄偏硬類，23 個品種歸于菌柄偏軟類。60 個品種歸于色澤偏深類，37 個品種歸于色澤偏淺類。

2.2 供試品種菌柄硬度與病情指數(shù)的相關性分析

調(diào)查表明，菌柄偏硬的74 個品種平均發(fā)病率為18.1%，平均病情指數(shù)8.05，其中19 個品種沒有發(fā)病，其他55 個品種發(fā)病率介于2.0%～100%之間，病情指數(shù)在0.2～50。菌柄偏軟的23個品種，平均發(fā)病率為37.0%，平均病情指數(shù)為21.11，僅2個品種沒有發(fā)病，其他21 個品種發(fā)病率在9.1%～66.7%。t測驗結果，菌柄偏硬的品種抗病能力極顯著高于菌柄偏軟的品種（P＜0.01）（圖1）。

圖1 平菇菌柄不同硬度品種間的抗病能力差異

2.3 供試品種菌蓋色澤與病情指數(shù)的相關性分析

對色澤偏深的60 個品種進行發(fā)病情況調(diào)查，結果有8 個品種沒有發(fā)病，其余52 個品種發(fā)病率為2.8%～85.7%，病情指數(shù)為0.6～45.7；60 個品種平均發(fā)病率為25.9%，平均病情指數(shù)為13.07。

色澤偏淺的37 品種中，11 個品種未發(fā)病，其余26 個品種發(fā)病率為2.0%～100%，病情指數(shù)為0.6～36.9；37 個品種平均發(fā)病率為17.1%，平均病情指數(shù)為8.03。t測驗結果顯示，色澤偏淺與色澤偏深品種的抗病能力差異不顯著（P＞0.05）（圖2）。

圖2 平菇菌蓋不同色澤品種間的抗病能力差異

2.4 不同品種人工接種后的癥狀表現(xiàn)

將菌蓋色澤差異明顯的26 個平菇栽培品種的菌蓋進行傷口涂抹，接種黃斑病病原菌，結果顯示，菌蓋色澤較深的品種感病較快，病斑擴展快，癥狀更明顯，與色澤較淺的品種存在顯著差異。

在氣溫15～25 ℃和空氣相對濕度80%以上時，灰黑色品種‘華平801’菌蓋接種后發(fā)病率達100%，接種后約10 h 開始出現(xiàn)癥狀，最初為黃白色，漸變?yōu)辄S色和黃褐色，病斑漸凹陷，菌肉被感染，后期菌蓋卷曲，抗病能力弱。而灰白色品種‘華平36’在同樣條件下接種，72 h 后才出現(xiàn)少許黃色斑點，色淡，病斑擴展緩慢，且不侵入菌肉內(nèi)部，菌蓋不卷曲，表現(xiàn)出較強的抗病能力（圖3）。

圖3 不同菌蓋色澤平菇品種接種托拉斯假單胞桿菌后的癥狀

3 結論與討論

選育抗病品種是防治平菇黃斑病的重要途徑，而品種抗病性鑒定是選育抗病品種的前提。前期研究探索了品種抗病性鑒定方法，而田間觀察自然栽培環(huán)境條件下不同品種的發(fā)病率，無疑是鑒定品種抗病性的最直觀、最有效的辦法。

平菇黃斑病的病原菌主要是托拉斯假單胞桿菌，但其他細菌在特定條件下也會感染平菇子實體，且其發(fā)生可能與菌蓋表面微傷口存在密切相關。因而，自然環(huán)境中病原菌種類和數(shù)量，栽培過程的溫度、空氣濕度、水分和通風管理條件也能直接影響發(fā)病程度。

在本品比試驗中，菇棚管理水平較高，整體發(fā)病程度中等偏低。不同品種出菇期參差不齊，導致調(diào)查時每個品種商品菇數(shù)量不一致，也影響了發(fā)病率和病情指數(shù)的調(diào)查結果。盡管如此，田間調(diào)查依然可以明顯判斷出不同品種間的抗病性存在差異。

國內(nèi)外研究者早期已經(jīng)觀察到平菇品種的黃斑病抗性與菌蓋色澤存在某種聯(lián)系，且高溫品種抗病性較低溫品種強，但多缺乏系統(tǒng)的統(tǒng)計分析[4,6,7]。本研究對不同品種的菌柄硬度和菌蓋色澤進行歸類，統(tǒng)計分析兩個子實體重要性狀與病情指數(shù)之間的相關性，首次發(fā)現(xiàn)菌柄硬度與抗性密切相關，而菌蓋色澤影響病斑擴展速度。這些研究結果無疑對開展平菇抗病品種選育具有重要參考價值。

盡管平菇子實體兩個農(nóng)藝性狀判斷具有一定的主觀性，但統(tǒng)計分析能彌補部分不足。當然，對菌柄硬度和菌蓋色澤進行更加科學精準的分類判定十分必要，需作進一步深入研究。