王志強，任建煒，溫建新

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，山東青島 266109)

貓細小病毒病(Feline panleukopenia，F(xiàn)P)又稱貓泛白細胞減少癥、貓瘟、貓傳染性腸炎，是由貓細小病毒(Feline Panleukopenia Virus，F(xiàn)PV)引起的一種急性高度接觸性傳染病，1歲齡以下的貓最容易感染，尤其是3～6月齡的幼貓，病貓主要表現(xiàn)為機體內(nèi)白細胞數(shù)量急劇減少，F(xiàn)PV還對貓科動物的消化道系統(tǒng)造成巨大傷害，病貓表現(xiàn)出嚴重的消化道癥狀[1]。FP已經(jīng)被歐洲、美洲的多個國家定義為貓最嚴重的傳染病之一。在我國FP全年均能發(fā)病，在每年的冬季及初春季節(jié)多發(fā)。目前FP的病例量占貓傳染病病例量的60%以上，是名副其實的貓科動物的頭號殺手。

1 貓細小病毒病的臨床癥狀

FPV侵入動物機體后通常會有1周左右的潛伏期，有的動物會長期少量帶毒[2]，當(dāng)外界環(huán)境出現(xiàn)變化或出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)時則發(fā)病。由于個體因素、外界環(huán)境因素、病毒毒株因素等影響，患病貓表現(xiàn)的臨床癥狀也多種多樣，通常會呈現(xiàn)雙相型熱，先升至40 ℃左右的高溫，隨后體溫恢復(fù)正常，1～2 d后又升至高溫狀態(tài)。發(fā)病早期通常會出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退，甚至廢絕、腹瀉的癥狀，緊接著會出現(xiàn)脫水、貧血、頑固性腹瀉、嘔吐的癥狀，之后會出現(xiàn)便血、吐血、眼球下陷、體溫降低等嚴重癥狀，此時查血常規(guī)會發(fā)現(xiàn)白細胞數(shù)量降至2.0×109/L以下(正常為5.50×109/L～19.50×109/L)，淋巴細胞和嗜中性白細胞減少的數(shù)量最多[3]，接著白細胞會進一步降低，當(dāng)白細胞數(shù)量降至1.0×109/L以下時，死亡率接近100%。最急性的病例常常會不見任何癥狀而突然死亡，常被懷疑為中毒死亡。妊娠母貓常會表現(xiàn)流產(chǎn)的癥狀，因為FPV可透過血胎屏障進行垂直傳播感染[2]。

2 貓細小病毒病的病理變化

被FPV感染的貓，尸體外觀通常為被毛粗亂，暗淡無光，出現(xiàn)眼球下陷，皮下組織干燥的脫水癥狀。剖檢的病理變化主要在消化道，表現(xiàn)為胃腸擴張，腸黏膜充血出血、壞死，腸系膜水腫。空腸和回腸處出現(xiàn)滲出，腸絨毛變短或消失，腸壁增厚。腸系膜淋巴結(jié)腫大、充血出血，甚至壞死，呈現(xiàn)大理石樣花紋。肝臟、腎臟等實質(zhì)器官變化不是很明顯，只是出現(xiàn)充血癥狀，脾臟會有針尖樣出血點[4]。

3 貓細小病毒病的臨床檢測方法

FP的檢測方法有快速試紙板檢測法、血凝和血凝抑制(HA-HI)試驗、電鏡觀察、免疫熒光試紙檢測、實時熒光PCR檢測等，但基于操作的方便性及營收狀況，主要的臨床確診方法有膠體金試紙板檢測、免疫熒光試紙檢測、實時熒光PCR檢測等方法。

3.1 膠體金試紙板檢測

膠體金試紙板檢測實際是利用膠體金免疫層析法的技術(shù)，以膠體金作為示蹤標(biāo)志物，樣本抗原滴加到樣品孔內(nèi)，發(fā)生層析作用至膠體金標(biāo)記的抗體處與之結(jié)合，形成金標(biāo)抗原抗體復(fù)合物，在檢測線處與固定抗體結(jié)合出現(xiàn)結(jié)果，層析至對照線處與二抗結(jié)合出現(xiàn)對照結(jié)果[5]。此方法操作簡單，檢測結(jié)果出具迅速，約5～10 min即可判定結(jié)果，當(dāng)病毒含量較低時，容易出現(xiàn)假陰性或淡淡的一條標(biāo)記，容易導(dǎo)致寵物醫(yī)生漏診，膠體金試紙板檢測方法逐漸被替代。

3.2 實時熒光PCR檢測

實時熒光PCR檢測是通過將標(biāo)有熒光素的Taqman探針與處理后的抗原DNA、正反向引物混合，進行DNA擴增，擴增后DNA酶會將Taqman探針切斷，使得熒光素游離在體系內(nèi)，進而通過特定光的照射，產(chǎn)生熒光，隨著反應(yīng)的進行，熒光會呈現(xiàn)指數(shù)式增長，進而求得Ct值[6]。實時熒光PCR的檢測結(jié)果十分準(zhǔn)確，即使較低含量的病毒亦可以檢出，并且可以同時檢測多個樣本，但目前儀器購買和使用成本均較高，市面上常見的8孔儀器大約需要6萬元，試劑均價也在100元/個左右，并且操作耗時相對較長，寵物醫(yī)院接受率較低，目前只有少數(shù)醫(yī)院使用。

3.3 免疫熒光試紙檢測

免疫熒光試紙檢測是一種新興的檢測技術(shù)，具有操作簡單、準(zhǔn)確率相對較高的優(yōu)點，目前被大多數(shù)醫(yī)院接受。免疫熒光試紙檢測采用的是熒光免疫層析技術(shù)，該試紙板由樣品墊、含熒光微球交聯(lián)的檢測抗體標(biāo)記墊、含二抗的硝酸纖維素、吸水紙及底板組成。具體原理如下：在加樣孔處滴入抗原溶液，抗原溶液沿層析方向擴散至標(biāo)記墊處，此時抗原被抗體結(jié)合形成抗原-抗體-熒光微球復(fù)合物，該復(fù)合物繼續(xù)擴散至硝酸纖維素膜處，與二抗結(jié)合，形成二抗-抗原-抗體-熒光微球復(fù)合物，未被二抗標(biāo)記的復(fù)合物繼續(xù)層析被吸水紙吸收，最后根據(jù)熒光信號強度可以檢測出抗原的濃度，此法原理與膠體金試紙板類似，不過相比較而言，它的靈敏性比膠體金試紙板高很多。有研究表明，免疫熒光試紙板的靈敏度是普通膠體金試紙板的10倍，免疫熒光試紙板比實時熒光PCR檢測節(jié)省大量金錢成本和時間成本，正在被快速普及[7]。

4 貓細小病毒病的治療

臨床上對FP的治療一般都遵循對癥治療原則，采用鎮(zhèn)痛消炎、適當(dāng)止吐、強力止瀉、營養(yǎng)支持、補液補鉀的治療方法?；疾∝堅谇?～2 d的治療是非常關(guān)鍵的，如果治療得當(dāng)，病情將會逐漸好轉(zhuǎn)，體內(nèi)白細胞數(shù)量將恢復(fù)正常，預(yù)后也將會良好；倘若治療不當(dāng)或者遇到強毒株感染，在第3～4 d患貓就會出現(xiàn)便血、吐血等癥狀，白細胞數(shù)量會迅速下降至3.0×109/L以下，甚至?xí)椭?.0×109/L，之后常常會愈后不良；并且被FPV感染后的第2～3 d，患貓就可對外界排毒，造成其他寵物貓的感染，最長可達30 d左右[8]。所以住院治療既是治療的需要，也是對家庭環(huán)境的保護。被FPV感染后的治療方案分為特異性治療和對癥治療。

特異性治療主要是抗病毒治療，首選是貓重組干擾素-ω(Feline recombinant interferon-ω, feIFN-ω)、FPV單克隆抗體等生物制品。臨床試驗發(fā)現(xiàn)feIFN-ω具有廣譜的抗病毒作用，對FP的治療有較好的效果，它主要通過與靶細胞表面的受體結(jié)合、調(diào)節(jié)機體的免疫效果、強化免疫細胞活性、誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生抗體蛋白，從而從多方面抑制病毒的復(fù)制。feIFN-ω最早是在1994年由日本批準(zhǔn)生產(chǎn)的用于貓杯狀病毒治療的生物制劑，慢慢的經(jīng)過多年發(fā)展，也被用作FP病例的治療[9]。在國內(nèi)的試驗研究證實，feIFN-ω對FPV有很好的臨床效果，feIFN-ω對 γ-球蛋白和免疫球蛋白的產(chǎn)生有較好的刺激作用[10]；其次，特異性治療可以選用FPV單克隆抗體和FPV血清等。目前常用的FPV單克隆抗體的效果不如CPV單克隆抗體效果已成為獸醫(yī)界的共識，許多生物制品廠家也在加速研發(fā)，并進行大量臨床投放試驗，其臨床效果還有待證實。

對癥治療主要是輔助性抗菌治療，這是治療方案中重要的一環(huán)，F(xiàn)PV入侵消化道系統(tǒng)，會給腸道帶來巨大的破壞作用，使得黏膜屏障損傷，有害菌會輕易的進入血液循環(huán)系統(tǒng)，造成敗血癥的發(fā)生，所以使用抗菌藥物會起到至關(guān)重要的作用。常用的藥物有頭孢菌素類藥物如頭孢噻呋、頭孢喹肟等，氟喹諾酮類藥物也可以起到較好的效果[11]，這些藥物對腸道內(nèi)的厭氧菌、革蘭氏陰性菌的作用效果良好，對敗血癥的預(yù)防起到關(guān)鍵作用。針對嘔吐腹瀉的癥狀，常采用強力止瀉、適度止吐的方法，避免電解質(zhì)的大量流失，止瀉藥物常采用穿心蓮注射液等藥物，可以在短時間內(nèi)達到止瀉的效果。止吐一般采用檸檬酸馬羅匹坦等藥物，但應(yīng)該注意使用的用量和頻率，過分的止吐會導(dǎo)致患貓出現(xiàn)腸套疊、腸梗阻等癥狀，更容易引起敗血癥的發(fā)生，所以在治療時應(yīng)該時常關(guān)注寵物狀態(tài)，每天用B超進行掃查，降低發(fā)生率。對于補液常采用靜脈滴注5%的葡萄糖溶液、0.9%的生理鹽水溶液和乳酸林格溶液進行補液，靜脈補液可以較好的補充丟失的水分，調(diào)節(jié)PH值，補充流失的電解質(zhì)；補液的量會參照患貓的脫水程度進行判定，通常為80～100 mL/kg；當(dāng)血液膠體滲透壓出現(xiàn)變化時，還要對血漿蛋白進行補充，常用的有白蛋白和球蛋白等[12]。當(dāng)出現(xiàn)便血癥狀時需要對其進行凝血治療。

5 貓細小病毒疫苗的研究進展

5.1 傳統(tǒng)疫苗概述

FP主要是通過注射疫苗的方式進行預(yù)防。目前預(yù)防FP的傳統(tǒng)疫苗主要有兩種，一種是美國碩騰公司生產(chǎn)的“妙三多”疫苗，此疫苗為滅活苗，不易產(chǎn)生病毒擴散的風(fēng)險；另一種是美國默沙東(原荷蘭英特威)公司生產(chǎn)的“貓三聯(lián)”疫苗，它是一種弱毒苗?！懊钊唷笔俏覈壳拔ㄒ辉谟玫囊豢頕P疫苗?！懊钊唷币呙绯丝梢灶A(yù)防貓細小病毒病外，還可以預(yù)防貓杯狀病毒病和貓皰疹病毒病?！懊钊唷币呙绲某Ｒ?guī)免疫程序為：貓2月齡時進行首免，3月齡時進行二免，4月齡時進行三免，如果錯過首免日期，二免、三免日期也隨之后延?；A(chǔ)免疫完成后，以后每年再進行加強免疫1次?！懊钊唷币呙绲腇PV毒株采用的是標(biāo)準(zhǔn)株FPV-CU4毒株，F(xiàn)PV-CU4毒株是在1990年報道的，目前FPV-CU4毒株被用作多種抗體的制備及疫苗生產(chǎn)。

5.2 新型疫苗概述

隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多學(xué)者正在加緊研制亞單位疫苗、基因工程疫苗等新型疫苗，用于FPV的預(yù)防。基因工程疫苗是指將基因表達的蛋白加以純化，制作成抗原，從而達到制備新型疫苗的目的，這種疫苗具有安全性高、可量產(chǎn)等特點[13]。曾有報道指出，昆蟲的細胞表達系統(tǒng)可以表達VP2蛋白，作為制備疫苗的免疫原[14]。將表達的VP2蛋白注射小鼠，采集小鼠血清可將VP2的特異性中和抗體生產(chǎn)出來，而且產(chǎn)生速度較快[15]?；蛞呙缬址Q作核苷酸疫苗，是指將含有抗原基因的序列導(dǎo)入質(zhì)粒中，以質(zhì)粒作為載體注入到宿主體內(nèi)，誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，達到預(yù)防疾病的目的[15]。目前我國關(guān)于VP2基因疫苗的研究表明將VP2基因的主要抗原表位克隆在表達載體pVAX1中，結(jié)果顯示能夠在細胞中產(chǎn)生較好的免疫原性，也可以在小鼠體內(nèi)成功表達[16]。但是目前這些新型疫苗都還處于試驗階段，并沒有真正用于臨床，但這些技術(shù)已漸趨于成熟，相信隨著科技的不斷發(fā)展，新型疫苗的成本也將大大降低，最終實現(xiàn)臨床應(yīng)用。