段群棚，趙 碩，周英寧，盧冰霞，何文娜，全琛宇，陳婷婷，許心婷，秦毅斌，趙 武，梁家幸，蔣冬福，李 斌，盧敬專(zhuān)，陳忠偉，何 穎

（1.廣西獸醫(yī)研究所，廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530001；2.廣西大學(xué)，廣西南寧 530005）

偽狂犬?。╬seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，以妊娠母豬繁殖障礙，新生仔豬神經(jīng)紊亂、腹瀉與高死亡率，育肥豬呼吸障礙和生長(zhǎng)緩慢為主要特征，各年齡段豬對(duì)其均易感，其中成年豬多表現(xiàn)為隱性感染，可長(zhǎng)期帶毒、排毒，因而給PR 防制和根除帶來(lái)了巨大困難[1-3]。

gE基因是PRV 主要毒力基因之一，其編碼蛋白在介導(dǎo)感染細(xì)胞融合、病毒在細(xì)胞間擴(kuò)散、病毒粒子釋放及病毒延神經(jīng)突觸擴(kuò)散等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[4-5]。同時(shí)，gE基因是病毒增殖的非必須基因，缺失后的病毒既可保持免疫原性，毒力也會(huì)大大降低，因此國(guó)內(nèi)外普遍采用PRVgE基因缺失疫苗進(jìn)行PR 免疫，同時(shí)配套使用PRV gE 抗體檢測(cè)試劑盒，評(píng)價(jià)豬群的PRV 野毒感染狀況[6-7]，淘汰感染豬只，從而凈化豬場(chǎng)PR。PRVgB基因是PRV 最為保守的基因之一，其編碼的蛋白為PRV增殖所必需的囊膜糖蛋白，在病毒粘附細(xì)胞及隨后病毒囊膜與細(xì)胞膜融合過(guò)程中發(fā)揮重要作用，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體[8]，因而在gE 抗體陰性的情況下，gB 抗體可以用來(lái)評(píng)價(jià)豬場(chǎng)的PR 免疫效果。PRVgE基因缺失疫苗對(duì)預(yù)防和控制豬PR 起到了重要作用，使得PR 在我國(guó)得到有效控制。但自2011 年以來(lái)，我國(guó)出現(xiàn)了PRV 新型變異毒株，而PRVgE基因缺失弱毒疫苗對(duì)其不能提供足夠保護(hù)，導(dǎo)致免疫豬群仍感染發(fā)病，因此加強(qiáng)豬場(chǎng)PR 監(jiān)測(cè)及防控研究對(duì)促進(jìn)和保障養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展有重要意義[9-11]。

廣西獸醫(yī)研究所病毒研究室于2017 年1 月—2020 年12 月，應(yīng)用 ELISA 方法對(duì)來(lái)自廣西14 個(gè)地市部分豬場(chǎng)送檢的血清樣品進(jìn)行PRV 抗體檢測(cè)，并對(duì)不同年份、不同季節(jié)、不同地區(qū)、不同生長(zhǎng)階段豬群的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)豬場(chǎng)PRV 野毒感染陽(yáng)性比例分布狀況，以了解廣西豬場(chǎng)PRV 野毒感染情況和免疫狀況，為豬場(chǎng)防控和凈化PR 提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試劑盒 美國(guó)IDEXX 公司的PRV gpI（gE）抗體檢測(cè)試劑盒和PRV gB 抗體檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京愛(ài)德仕元亨生物科技有限公司。

1.1.2 血清樣品 血清樣品均為各豬場(chǎng)被動(dòng)送檢樣品，為各豬場(chǎng)隨機(jī)采樣，采樣豬群均免疫過(guò)PRVgE基因缺失活疫苗。2017 年1 月—2020 年12 月，廣西14 個(gè)地級(jí)市687 個(gè)豬場(chǎng)先后自主送檢了15 326 份血清樣品，其中597 個(gè)豬場(chǎng)13 291 份血清檢測(cè)了PRV gE 抗體，436 個(gè)豬場(chǎng)9 582 份血清檢測(cè)了PRV gB 抗體。采樣豬群涵蓋6 個(gè)生長(zhǎng)階段，即哺乳仔豬（1～4 周齡）、保育豬（4～9 周齡）、育肥豬（9 周齡及以上）、種公豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬。不同豬場(chǎng)的檢測(cè)項(xiàng)目及送檢血清樣品數(shù)量不一（表1）。

表1 2017—2020 年血清樣品送檢情況

1.2 方法

1.2.1 血清樣品制備 經(jīng)豬前腔靜脈或耳緣靜脈無(wú)菌采集非抗凝血液樣本2～3 mL，室溫靜置2～4 h后，3 000 r/min 離心3～5 min，取上清置于滅菌離心管中，置-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 PRV gE、gB 抗體檢測(cè) 血清樣品抗體檢測(cè)均嚴(yán)格按照IDEXX 公司生產(chǎn)的PRV gE 抗體檢測(cè)試劑盒和PRV gB抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.3 結(jié)果判定 PRV gE 和gB 抗體檢測(cè)結(jié)果判定，均按照檢測(cè)試劑盒中提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。本次檢測(cè)的豬血清樣品均來(lái)自使用PRVgE基因缺失疫苗免疫的豬場(chǎng)。在對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行結(jié)果判定時(shí)，只要豬場(chǎng)有1 個(gè)樣品PRV gE 抗體判定為陽(yáng)性，則判定該豬場(chǎng)為PRV 感染場(chǎng)。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定，PRV gB抗體個(gè)體陽(yáng)性率≥70%的豬場(chǎng)，判為免疫合格場(chǎng)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析 2017 年1 月—2020 年12 月，應(yīng)用 ELISA 方法對(duì)來(lái)自廣西14 個(gè)地市687個(gè)豬場(chǎng)送檢的15 326 份血清樣品進(jìn)行PRV 抗體檢測(cè)，分析不同年份、不同季節(jié)、不同地區(qū)、不同生長(zhǎng)階段豬群的PRV 感染和疫苗免疫情況，并統(tǒng)計(jì)豬場(chǎng)PRV 感染比例分布狀況。3—5 月為春季、6—8 月為夏季、9—11 月為秋季、12 月至次年2 月為冬季。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0，對(duì)檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)（χ2檢驗(yàn)），統(tǒng)計(jì)分析其差異性。

2 結(jié)果

2.1 不同年份

由表2 可知，2020 年P(guān)RV gE 抗體場(chǎng)陽(yáng)性率最低，與2017 年、2019 年相比差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于2018 年（P＜0.05）；2017—2020 年P(guān)RV gB 抗體場(chǎng)合格率差異均不顯著（P＞0.05）；2018 年P(guān)RV gE 抗體個(gè)體陽(yáng)性率顯著高于2017 年（P＜0.05），但2018 年后PRV gE 抗體個(gè)體陽(yáng)性率呈顯著下降趨勢(shì)（P＜0.05）；2019年P(guān)RV gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率最低，均顯著低于其他年份（P＜0.05）。

表2 不同年份豬PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果 %

2.2 不同季節(jié)

由表3 可知，冬季PRV gE 抗體場(chǎng)陽(yáng)性率最低，與春季、秋季差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于夏季（P＜0.05）；PRV gB 抗體場(chǎng)合格率在一年四季差異均不顯著（P＞0.05）。冬季PRV gE、gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率均最低，與春季、夏季和秋季差異均顯著（P＜0.05）。

表3 不同季節(jié)豬PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果 %

2.3 不同地區(qū)

由表4 可知，廣西14 個(gè)地市均存在不同程度的PRV 野毒感染，不同地區(qū)感染率差異明顯，其中桂東地區(qū)的玉林市和貴港市野毒感染最為嚴(yán)重，桂南地區(qū)的北海市、防城港市、欽州市，桂東地區(qū)的賀州市和梧州市，桂西地區(qū)的百色市和河池市野毒感染相對(duì)較輕。廣西14 個(gè)地市PRV gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率均較高，PRV gB 場(chǎng)合格率方面，除梧州偏低外，其他地市均較高。

表4 不同地區(qū)豬PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果 %

2.4 不同生長(zhǎng)階段豬群

由表5 可知，2017—2020 年，后備母豬、育肥豬PRV gE 和gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率均顯著低于其他生長(zhǎng)階段豬群（P＜0.05）。

表5 2017—2020 年不同生長(zhǎng)階段豬群PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果 %

2.5 感染比例分布

由表6 可知，2017—2020 年受檢豬場(chǎng)的PRV gE 抗體陰性豬場(chǎng)占比分別為50.69%、42.29%、56.67%和68.65%，其中2018 年后PRV gE 抗體陰性豬場(chǎng)占比呈逐年上升趨勢(shì)，即PRV gE 抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)占比呈逐年下降趨勢(shì)。2017—2020 年受檢豬場(chǎng)血清樣本gE 抗體個(gè)體陽(yáng)性率在50%以上的豬場(chǎng)占比分別為19.35%、22.92%、18.33%和10.45%，表明2018 年后廣西受檢豬場(chǎng)PRV 感染率逐年下降。

表6 2017—2020 年豬場(chǎng)PRV 感染比例分布統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 討論

3.1 免疫情況

PR 仍是嚴(yán)重威脅我國(guó)豬養(yǎng)殖業(yè)的重要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制PR 的重要手段，同時(shí)建立豬場(chǎng)合理科學(xué)的免疫程序至關(guān)重要。通過(guò)定期監(jiān)測(cè)PRV gB 抗體情況，可及時(shí)了解豬群的免疫情況，優(yōu)化疫苗免疫程序。本次調(diào)查對(duì)全區(qū)采集的436 個(gè)豬場(chǎng)9 582 份血清樣品進(jìn)行了PRV 免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2017—2020 年P(guān)RV gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率均明顯高于國(guó)家規(guī)定的群體免疫合格水平（70%），說(shuō)明近年來(lái)廣西豬群PRV 免疫抗體一直維持在較高水平。從不同季節(jié)PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，冬季PRV gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率均顯著低于其他季節(jié)，說(shuō)明較低的溫度和高濕度有可能對(duì)疫苗免疫效力產(chǎn)生影響。從不同地區(qū)豬場(chǎng)PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，各地區(qū)豬PRV gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率雖然存在一定差異，但均在84%以上，說(shuō)明廣西各地區(qū)PRV 免疫抗體水平均較高。從不同生長(zhǎng)階段豬群PRV 抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，不同生長(zhǎng)階段豬群豬PRV gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率存在顯著差異，后備母豬、育肥豬PRV gB 抗體水平較低，個(gè)體陽(yáng)性率均顯著低于其他生長(zhǎng)階段豬群，說(shuō)明后備母豬、育肥豬存在免疫空白，需加強(qiáng)免疫；另一方面，公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、哺乳仔豬和保育豬PRV gB 抗體和gE抗體個(gè)體陽(yáng)性率均顯著高于后備母豬和育肥豬，表明較高的gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率并不能完全保護(hù)豬群不受PRV 野毒感染，這與李海琴等[12]的調(diào)查結(jié)論一致，也反映出PRV 野毒感染可能還存在其他較高的風(fēng)險(xiǎn)因素，與寧慧波等[13]在2016—2018 年我國(guó)規(guī)模化豬場(chǎng)PRV 感染的血清學(xué)及傳播風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的一點(diǎn)式生產(chǎn)模式、公豬感染、仔豬肌注免疫頻率等17 項(xiàng)因素與PRV 傳播有較強(qiáng)聯(lián)系的結(jié)論相符合，說(shuō)明僅依靠疫苗免疫并不能徹底控制PR 發(fā)生與流行。

3.2 感染情況

本次調(diào)查共檢測(cè)來(lái)自廣西14 個(gè)地級(jí)市597個(gè)豬場(chǎng)的13 291 份血清樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2017—2020 年廣西豬場(chǎng)PRV gE 抗體平均場(chǎng)陽(yáng)性率為50.25%，PRV gE 抗體平均個(gè)體陽(yáng)性率為19.37%，相比陳馳等[14]報(bào)道的2018—2019 年江蘇場(chǎng)陽(yáng)性率75.61%、個(gè)體陽(yáng)性率38.44%，河南場(chǎng)陽(yáng)性率88.24%、個(gè)體陽(yáng)性率63.28%，江西場(chǎng)陽(yáng)性率71.70%、個(gè)體陽(yáng)性率30.48%，廣西豬場(chǎng)PRV 感染程度均低于上述省份。2018—2020 年廣西PRV gE抗體場(chǎng)陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率均呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明近年來(lái)廣西豬場(chǎng)PRV 野毒感染狀況有明顯好轉(zhuǎn)。其原因可能受非洲豬瘟疫情影響，大量PRV 野毒感染嚴(yán)重且生物安全等級(jí)較低的中小規(guī)模豬場(chǎng)轉(zhuǎn)行或被淘汰，大批生物安全等級(jí)較高的大型規(guī)模豬場(chǎng)逐漸增多，以及豬場(chǎng)普遍加強(qiáng)生物安全管理。但目前PRV 野毒感染情況在廣西豬場(chǎng)中仍普遍存在，須繼續(xù)加強(qiáng)豬場(chǎng)PR 綜合防控和凈化。

不同季節(jié)檢測(cè)結(jié)果顯示，PR 一年四季均有發(fā)生，夏季的PRV gE 抗體場(chǎng)陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率最高，均顯著高于冬季，說(shuō)明廣西PR 具有季節(jié)性流行特點(diǎn)，夏季多發(fā)，冬季發(fā)病率較低，這與王昌建等[15]報(bào)道的2018 年湖南規(guī)模豬場(chǎng)夏季PRV gE 抗體陽(yáng)性率最高（25.1%），冬季PRV gE 抗體陽(yáng)性率最低（13.2%）的結(jié)論基本一致，但與早期研究報(bào)道的冬春兩季多發(fā)不一致[3]。分析原因可能是，當(dāng)前流行的PRV 新型變異毒株流行特點(diǎn)出現(xiàn)了新變化，具體原因有待深入研究探討。

不同地區(qū)的檢測(cè)結(jié)果表明，廣西14 個(gè)地級(jí)市均存在PRV 野毒感染，不同地區(qū)感染率差異明顯，其中生豬主產(chǎn)區(qū)玉林市、貴港市的感染率均顯著高于其他地區(qū)。這是因?yàn)橛窳?、貴港市送檢血清樣品多來(lái)自中小規(guī)模豬場(chǎng)，而中小規(guī)模豬場(chǎng)多存在免疫及檢疫程序不合理、生物安全意識(shí)不強(qiáng)、飼養(yǎng)管理水平不高等疫病防控缺陷問(wèn)題，從而導(dǎo)致豬場(chǎng)PRV 野毒感染情況嚴(yán)重。這一分析與黃曉慧等[16]、高建鵬等[17]報(bào)道的中小型規(guī)模豬場(chǎng)PRV野毒感染率較高的研究結(jié)論一致。

本次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同生長(zhǎng)階段的豬群均有PRV 感染，說(shuō)明不同生長(zhǎng)階段豬群對(duì) PRV 均易感。哺乳仔豬、保育豬、育肥豬PRV gE 抗體個(gè)體陽(yáng)性率呈逐漸下降趨勢(shì)，很可能是來(lái)自經(jīng)產(chǎn)母豬的PRV 母源抗體隨著時(shí)間逐漸消失所致。研究表明，自然狀態(tài)下，PRV 母源抗體在120 d 左右才消失[18]。廣西育肥豬PRV gE 抗體個(gè)體陽(yáng)性率最低，與傅宏慶等[19]報(bào)道的2016—2018 年江蘇省育肥豬PRV 感染率最高，李海琴等[20]報(bào)道的2016—2017年江西省育肥豬PRV 感染率最高，林日丹等[21]報(bào)道的2013—2018 年福建省育肥豬感染率較高等研究結(jié)論均不一致，說(shuō)明相較于江蘇、江西、福建，廣西育肥豬PRV 感染率偏低。公豬、后備母豬均存在不同程度的感染，說(shuō)明豬場(chǎng)需加強(qiáng)引種前檢疫，確保引進(jìn)的公豬、后備母豬均未感染PRV。種豬群較高的PRV 野毒陽(yáng)性率是導(dǎo)致整個(gè)豬場(chǎng)持續(xù)陽(yáng)性的根本原因，而由于種豬飼養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一旦感染PRV 野毒，可長(zhǎng)期帶毒排毒，引起持續(xù)性感染。

4 結(jié)論

本次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，近年來(lái)隨著疫苗免疫的加強(qiáng)，廣西規(guī)模豬場(chǎng)PRV 的防控凈化已初見(jiàn)成效，但PRV 野毒感染情況仍普遍存在，說(shuō)明僅依靠疫苗免疫并不能徹底控制PR 的發(fā)生與流行。因此，還需加強(qiáng)引種前檢疫，提高豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理水平，建立完善的豬場(chǎng)生物安全防控體系，同時(shí)定期開(kāi)展血清抗體監(jiān)測(cè)，制定合理的免疫程序，及時(shí)淘汰感染豬，最終達(dá)到凈化PR 的目的。