唐文芳 徐升勝 龍雯虹

摘要：【目的】克隆黃獨赤霉素受體（GID1）基因DbGID1s，并對其進行生物學信息分析，為深入探究DbGID1s蛋白在黃獨生長發(fā)育中的作用機制提供理論參考。【方法】采用RT-PCR技術(shù)克隆DbGID1s基因，利用生物信息學軟件對其理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域、磷酸化位點及系統(tǒng)發(fā)育進化進行預測分析?！窘Y(jié)果】克隆獲得4個DbGID1s基因序列，命名為DbGID1A、DbGID1B1、DbGID1B2和DbGID1C，GenBank登錄號為MT648372、MT648374、MT648375和MT648373，長度分別為862、1273、1081和1164 bp，編碼292、340、289和360個氨基酸殘基。4個DbGID1s蛋白的分子量為32079.17～40301.83 Da，理論等電點（pI）為6.05～8.62，為不穩(wěn)定的外在膜親水性蛋白，不存在信號肽序列，其磷酸化位點主要以絲氨酸（Ser，S）為主，且4個蛋白的磷酸位點均有重合位點和突變位點，不僅具有α/β折疊水解酶超級家族羧酸脂肪酶水解活性區(qū)域，還具有激素脂肪酶（HSL）的保守結(jié)構(gòu)域（HGG和GXSXG）和催化聯(lián)合位點（S、D和H）。DbGID1s蛋白與其他植物GID1蛋白序列具有較高的氨基酸序列相似性，其中與山藥的相似性達90%以上?！窘Y(jié)論】DbGID1s基因具有多種植物GID1 基因的基本特征，其編碼的蛋白具有GID1蛋白典型的結(jié)構(gòu)域，其可能參與赤霉素（GA）信號轉(zhuǎn)導，調(diào)節(jié)黃獨的生長發(fā)育。

關(guān)鍵詞： 黃獨;赤霉素受體（GID1）;基因克隆;生物信息學分析

中圖分類號： S567.239 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）08-2053-08

Cloning and bioinformatics analysis of gibberellin insensitive dwarf1 gene DbGID1s in ?Dioscorea bulbiferas

TANG Wen-fang， XU Sheng-sheng， LONG Wen-hong*

（College of Landscape and Horticulture，Yunnan Agricultural University，Kunming ?650201，China）

Abstract：【Objective】The aim of this study was to clone gibberellin insensitive dwarf1（GID1） gene DbGID1s in Dio-scorea bulbifera，conduct bioinformatics analysis，and to provide a theoretical reference for further exploring the mechanism of DbGID1s protein in the growth and development of D. bulbifera. 【Method】DbGID1s were cloned by RT-PCR method; the physical and chemical properties， domains， phosphorylation sites and phylogenetic evolution of these genes were pridicted with bioinformatics softwares. 【Result】Four sequences of gene DbGID1A were obtained， namely DbGID1A （GenBank accession number：MT648372），DbGID1B1 （GenBank accession number：MT648374），DbGID1B2（GenBank accession number：MT648375） and DbGID1C （GenBank accession number：MT648373） . The lengths of four nucleic acid sequences were 862，1273，1081 and 1164 bp，respectively， ?and encoding 292，340，289 and 360 amino acids residues，respectively. The molecular weights of the four DbGID1s proteins were 32079.17-40301.83 Da， and their theoretical isoelectric points（pI） varied from 6.05 to 8.62. They were unstable，hydrophilic proteins and located on external membrane. No signal peptide was found in the four DbGID1s proteins. Their phosphorylation sites were mainly serine （Ser， S）， and the phosphorylation sites of the four proteins had coincidence sites and mutation sites. The four proteins not only had the hydrolytic activite area of α/β folding hydrolase superfamily carboxylic acid lipase， but also had conserved domains （HGG and GXSXG） and catalytic joint sites（S， D and H） of hormone lipase （HSL）. The similarity of proteins between D. bulbifera and other species was high，and the homology between D. bulbifera and yam was over 90%. 【Conclusion】The DbGID1s gene in D. bulbifera has the basic characteristics of GID1 genes in many plants and the encoded proteins have the typical domain of GID1 protein， so it is possible that DbGID1s genes participate in gibberellin signal transduction and regulate the growth and development of organs of D. bulbifera.

1. 4 生物信息學分析

利用NCBI進行同源比對;對4個基因序列進行多重比對分析;NCBI ORFfinder在線分析4個基因開放閱讀框（ORF）編碼的氨基酸序列;利用NCBI的CCD（Conserved domain）在線分析4個基因編碼蛋白的保守結(jié)構(gòu)域，利用ExPASy的ProtParam在線分析氨基酸序列;運用ProtScale預測蛋白的親/疏水性;使用TMHMM Serverv 2.0分析蛋白的跨膜區(qū);使用SignalP 4.1對蛋白的信號肽進行預測分析;利用SOPMA和SWISS-MODEL預測分析蛋白的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu);NetPhos 3.1在線預測蛋白的磷酸化位點;下載與DbGID1s基因序列相似性較高的其他植物基因序列，并對其CDS序列進行多重比對，利用Clustal X和MAGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹（孫偉博等，2018）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 總RNA提取和cDNA合成結(jié)果

由圖1-A可知，利用植物總RNA提取試劑盒提取的黃獨嫩葉總RNA條帶清晰，且完整性較好。利用微量分光光度計測定總RNA樣品A260和A280值，計算RNA純度（A260/A280）平均值為1.98，表明提取的RNA樣品可用于后續(xù)試驗。利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成的cDNA第一鏈條帶較清晰（圖1-B），可用于后續(xù)試驗。

2. 2 DbGID1s基因克隆結(jié)果

以cDNA為模板，利用設計的4對引物PCR擴增出4個序列（圖2）。經(jīng)純化和測序分析，發(fā)現(xiàn)4個序列長度分別為862、1273、1081和1164 bp。

2. 3 DbGID1s基因序列分析結(jié)果

利用NCBI的BLASTx對擴增出的4個序列進行比對分析，確定4個序列均為DbGID1s基因，其多重比對結(jié)果圖3所示。4個DbGID1s基因序列間的相似性為48.06%，表明4個基因序列為GID1基因家族的不同成員，分別命名為DbGID1A、DbGID1B1、DbGID1B2和DbGID1C，GenBank登錄號依次為MT648372、MT648374、MT648375和MT648373，分別編碼292、340、289和360個氨基酸殘基。NCBI的CCD預測結(jié)果顯示，DbGID1s蛋白屬于水解酶超級家族羧酸脂肪酶家族，具有該家族水解活性區(qū)域。

2. 4 DbGID1s蛋白的生物信息學分析結(jié)果

2. 4. 1 理化性質(zhì) 由表2可知，4個DbGID1s蛋白的分子量為32079.17～40301.83 Da，理論等電點（pI）為6.05～8.62，負電荷殘基（Asp+Glu）總數(shù)為30～38，正電荷殘基（Arg+Lys）總數(shù)為26～38;DbGID1A和DbGID1C蛋白為不穩(wěn)定的堿性蛋白，DbGID1B1和DbGID1B2蛋白為不穩(wěn)定的酸性蛋白;DbGID1A、DbGID1B1、DbGID1B2和DbGID1C總體平均親水性GRAVY值分別為-0.295、 -0.099、-0.200和-0.209，表明DbGID1s蛋白為親水性蛋白;DbGID1s蛋白均位于膜外，為外在膜蛋白，且不存在信號肽序列。

2. 4. 2 二、三級結(jié)構(gòu)預測結(jié)果 由表3可知，4個DbGID1s蛋白二級結(jié)構(gòu)均具有α-螺旋、β-折疊、延伸鏈、無規(guī)則卷曲，其中均以α-螺旋和無規(guī)則卷曲為主要元件。由圖4可知，DbGID1A、DbGID1B1和DbGID1C蛋白與建模殘基序列（2zsh.1.A）的相似性分別為73.36%（286aa）、64.97%（331aa）和70.55%（347aa），而DbGID1B2蛋白與建模殘基序列（3ebl.1.A）的相似性為71.06%（234aa）。DbGID1A蛋白的三級核心結(jié)構(gòu)由8條β-折疊和9個α-螺旋組成，DbGID1B1蛋白的三級核心結(jié)構(gòu)由8條β-折疊和10個α-螺旋組成，DbGID1B2蛋白的三級核心結(jié)構(gòu)由8條β-折疊和7個α-螺旋組成，DbGID1C蛋白的三級核心結(jié)構(gòu)由8條β折疊和11個α-螺旋組成?？梢姡珼bGID1家族的2個建模具有相同的β-折疊。此外，由于2zsh.1.A具有GA3 GID1-DELLA晶體結(jié)構(gòu)，3ebl.1.A具有水稻GID1與GA4復合物的晶體結(jié)構(gòu)，因此，DbGID1A、DbGID1B1和DbGID1C蛋白具有GA3 GID1-DELLA晶體結(jié)構(gòu)，DbGID1B1蛋白具有水稻GID1與GA4復合物的晶體結(jié)構(gòu)。結(jié)合基因序列的CCD預測結(jié)果和蛋白預測結(jié)果可得出4個DbGID1s蛋白屬于α/β折疊水解酶超級家族羧酸脂肪酶家族。

2. 4. 3 結(jié)構(gòu)域預測結(jié)果 將DbGID1s蛋白與6個物種的同源蛋白進行氨基酸序列多重比對，結(jié)果如圖5-A所示。DbGID1s蛋白與其他物種GID1蛋白具有較高的氨基酸序列相似性，且其具有保守序列，如激素酶感酯酶（Hormone sensitive lipase，HSL）的HGG和GXSXG活性區(qū)域，及HSL家族催化位點的保守氨基酸即絲氨酸（Ser，S）和天冬氨酸（Asp，D），但DbGID1s蛋白的HSL家族催化位點即組氨酸（His，H）被異亮氨酸（Ile，I）取代。

2. 4. 4 磷酸化位點預測結(jié)果 將4個DbGID1s蛋白進行多重比較，結(jié)果（圖5-B）發(fā)現(xiàn)其同源性較高。利用NetPhos在線預測DbGID1s蛋白中的絲氨酸（Ser，S）、蘇氨酸（Thr，T）和酪氨酸（Tyr，Y）磷酸化位點，結(jié)果（圖5-B）顯示，DbGID1A、DbGID1B1、DbGID1B2和DbGID1C蛋白磷酸化位點分別為23、21、34和31個，其中，絲氨酸位點最多，分別為16、14、22和16個;蘇氨酸位點分別為3、4、6和8個;酪氨酸位點分別為4、3、6和7個?？梢姡珼bGID1s蛋白的磷酸化位點主要以絲氨酸為主，且4個蛋白的磷酸位點均有重合位點和突變位點。

2. 4. 5 系統(tǒng)發(fā)育進化分析結(jié)果 利用最大近似法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，結(jié)果如圖6所示。4個DbGID1s蛋白與山藥GID1蛋白的親緣關(guān)系最近，氨基酸序列相似性達90%以上。其中，DbGID1A蛋白與山藥DpGID1A蛋白相似性最高，處于同一小分支，與其他的GID1蛋白（除小立碗蘚GID1以外）并列;其余3個DbGID1s蛋白與山藥GID1B1均處于同一個分支，其中，DbGID1B1與山藥GID1B1的氨基酸序列相似性最高。推測DbGID1A基因與另外3個基因的分化可能早于雙子葉植物與單子葉植物的分化。

3 討論

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性信號肽具有促進植物膜蛋白表達的作用（Boehm et al.，2000）。本研究生物信息學分析結(jié)果顯示，DbGID1s不存在信號肽序列和跨膜結(jié)構(gòu)域，說明DbGID1s為非分泌性蛋白，可直接在細胞內(nèi)發(fā)揮作用;DbGID1s蛋白不僅不穩(wěn)定，而且不耐熱，其表達、純化及保存應在低溫下進行;DbGID1s為親水蛋白，較易溶于水溶液，可依據(jù)等電點配置適合的酸堿緩沖液，有利于表達模型的創(chuàng)建及細胞試驗等方面的應用。此外，磷酸化是蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，可有效調(diào)控蛋白活力和功能，并在細胞信號轉(zhuǎn)導過程中起重要作用。蛋白的磷酸化位點（S、T、Y）在GA信號傳導中發(fā)揮非常重要作用，分析磷酸化位點的變異規(guī)律有助于在合理歸類的基礎上探究蛋白質(zhì)翻譯后修飾調(diào)控的機制（梁前進等，2012）。本研究通過磷酸化位點預測發(fā)現(xiàn)DbGID1s蛋白的氨基酸序列含有多個磷酸化位點，為研究GA在黃獨體內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導提供理論依據(jù)。

據(jù)前人研究報道，GID1蛋白是一類含HGG和GXSXG保守結(jié)構(gòu)域的激素敏感脂肪酶受體，在植物生長發(fā)育過程中起重要調(diào)控作用（Shimada et al.，2008;Sun，2010）。HSL蛋白具有特殊的活性結(jié)構(gòu)域（HGG和GXSXG），不僅維持蛋白功能，還維持GA的穩(wěn)態(tài)并調(diào)節(jié)GA與其他植物激素之間的相互作用（Aleman et al.，2008）;HSL家族蛋白還具有3種保守氨基酸（S、D和H）的催化聯(lián)合位點，其對蛋白功能至關(guān)重要（Ueguchi-Tanaka et al.，2005）。由于GID1蛋白具有HSL蛋白的保守結(jié)構(gòu)域和催化聯(lián)合位點，故GID1蛋白具有HSL蛋白的生物學功能，可維持GA穩(wěn)態(tài)，并調(diào)節(jié)GA與其他植物激素之間的相互作用（Ileperuma et al.，2007）。DbGID1s蛋白屬于α/β折疊水解酶超級家族，與HSL家族蛋白結(jié)構(gòu)相似，推測DbGID1s蛋白具有HSL蛋白的功能。宋松泉等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥GID1a具有調(diào)控種子休眠的功能，且在種子萌發(fā)過程中，GA的信號轉(zhuǎn)導有可能受GA受體基因類型決定。本研究發(fā)現(xiàn)，DbGID1s蛋白的結(jié)構(gòu)域與擬南芥GID1a的結(jié)構(gòu)域較一致（圖5），故推測DbGID1s蛋白具有調(diào)控黃獨組織休眠的功能;DbGID1s蛋白存在2種三級結(jié)構(gòu)建模（圖3），故推測黃獨塊莖組織萌發(fā)中可能存在2種GA信號轉(zhuǎn)導途徑。今后應深入探究DbGID1s蛋白在2種GA信號轉(zhuǎn)導途徑的作用機制，并深入解析塊莖組織休眠和萌發(fā)機制。

參考文獻：

白文欽，胡明瑜，潘曉雪，蔣曉英，吳紅，雷開榮，羅明. 2019. 玉米赤霉素受體基因ZmGID1a的克隆及功能研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學學報，46（1）：133-140. [Bai W Q，Hu M Y，Pan X X，Jiang X Y，Wu H，Lei K R，Luo M. 2019. Clo-ning and functional study of ZmGID1a gene in maize[J]. Journal of Anhui Agricultural University，46（1）：133-140.] doi：10.13610/j.cnki. 1672-352x.20190314.008.

曹天天. 2015. 赤霉素信號轉(zhuǎn)導相關(guān)基因OsGID1調(diào)控水稻對褐飛虱抗性[D]. 杭州：浙江大學. [Cao T T. 2015. A gibberellin signaling-related gene OsGID1 regulates rice resistance to the brown plantthohopper Nilaparvata lugens[D]. Hangzhou：Zhejiang University.]

高秀華，傅向東. 2018. 赤霉素信號轉(zhuǎn)導及其調(diào)控植物生長發(fā)育的研究進展[J]. 生物技術(shù)通報，34（7）：1-13. [Gao X H，F(xiàn)u X D. 2018. Research progress for the gibberellin signaling and action on plant growth and development[J]. Biotechnology Bulletin，34（7）：1-13.] doi：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0447.

梁前進，王鵬程，白燕榮. 2012. 蛋白質(zhì)磷酸化修飾研究進展[J]. 科技導報，30（31）：73-79. [Liang Q J，Wang P C，Bai Y R. 2012. Summarization on the progress in protein phosphorylation[J]. Science & Technology Review，30（31）：73-79.] doi：10.3981/j.issn.1000-7857.2012.31.011.

龍雯虹，孟金貴，徐升勝，張雪梅，段延碧，楊榮萍. 2019. 山藥赤霉素受體基因DoGID1A的克隆及表達分析[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報，27（11）：1933-1941. [Long W H，Meng J G，Xu S S，Zhang X M，Duan Y B，Yang R P. 2019. Cloning and expression analysis of gibberellin receptor gene DoGID1A in Dioscorea opposita[J]. Journal of Agricultural Biotechnology，27（11）：933-1941.] doi：10.3969/j.issn. 1674-7968.2019.11.004.

齊蒙，李國瑞，黃鳳蘭，程永勝. 2017. 赤霉素的代謝途徑及其受體GID1的功能研究進展[J]. 種子科技，35（4）：122-123. [Qi M，Li G R，Huang F L，Cheng Y S. 2017. Research progress on the metabolic pathway of gibberellin and the function of its receptor GID1[J]. Seed Science & Technology，35（4）：122-123.] doi：10.3969/j.issn.1005-2690.2017.04.087.

宋松泉，劉軍，黃薈，伍賢進，徐恒恒，張琪，李秀梅，梁娟. 2020. 赤霉素代謝與信號轉(zhuǎn)導及其調(diào)控種子萌發(fā)與休眠的分子機制[J]. 中國科學：生命科學，50（6）：599-615. [Song S Q，Liu J，Huang H，Wu X J，Xu H H，Zhang Q，Li X M，Liang J. 2020. Gibberellin metabolism and signaling and its molecular mechanism in regulating seed germination and dormancy[J]. Scientia Sinica（Vitae），50（6）：599-615.] doi：10.1360/SSV-2019-0289.

孫偉博，馬曉星，諸葛強. 2018. 楊樹TLP基因家族的生物信息學分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報，49（7）：1265-1272. [Sun W B，Ma X X，Zhuge Q. 2018. Bioinformatics analysis of TLP gene family in poplar[J]. Journal of Southern Agriculture，49（7）：1265-1272.] doi：10.3969/j.issn.2095-1191. 2018.07.02.

葉華谷. 2016. 中國藥用植物[M]. 北京：化學工業(yè)出版社.[Ye H G. 2016. Chinese medicinal plants[M]. Beijing：Chemical Industry Press.]

袁媛，黃璐琦，崔光紅，毛瑩，何希榮. 2008. 赤霉素及其合成抑制劑對丹參酮類活性物質(zhì)含量的影響[J]. 中國實驗方劑學雜志，14（6）：1-3. [Yuan Y，Huang L Q，Cui G H，Mao Y，He X R. 2008. Effect of gibberellins and its synthesis inhibitor on metabolism of tanshinones[J]. Chinese Joumal of Experimental Traditional Medical Formulae，14（6）：1-3.] doi：10.13422/j.cnki.syfjx. 2008.06.003.

岳川，曾建明，曹紅利，郝心愿，章志芳，王新超，楊亞軍. 2013. 茶樹赤霉素受體基因CsGID1a的克隆與表達分析[J]. 作物學報，39（4）：599-608. [Yuan C，Zeng J M，Cao H L，Hao X Y，Zhang Z F，Wang X C，Yang Y J. 2013. Cloning and expression analysis of gibberellin receptor gene CsGID1a in tea tree（Camellia sinensis）[J]. Acta Agronomica Sinica，39（4）：599-608.] doi：10.3724/SP.J.1006. 2013.00599.

Aleman L，Kitamura J，Abdel-mageed H，Lee J，Sun Y，Nakajima M，Ueguchi-Tanaka M，Matsuoka M，Allen R D. 2008. Functional analysis of cotton orthologs of GA signal transduction factors GID1 and SLR1[J]. Plant Mole-cular Biology，68（1-2）：1-16. doi：10.1007/s11103-008-9347-z.

Boehm R，Sommer S，Severin K，Li S M，Heide L. 2000. Active expression of the ubiA gene from E. coli in tobacco：Influence of plant ER-specific signal peptides on the expression of a membrane-bound prenyltransferase in plant cells[J]. Transgenic Research，9（6）：477-486. doi：10.1023/ A：1026507803067.

Hirano K，Kouketu E，Katoh H，Aya K，Ueguchi-Tanaka M，Matsuoka M. 2012. The suppressive function of the rice della protein slr1 is dependent on its transcriptional activation activity[J]. The Plant Journal，71（3），443-453. doi： 10.1111/j.1365-313X.2012.05000.x.

Hirano K，Nakajima M，Asano K，Nishiyama T，Sakakibara H，Kojima M，Katoh E，Xiang H Y，Tanahashi T，Hasebe M. 2007. The GID1-mediated gibberellin perception mechanism is conserved in the lycophyte Selaginella moellendorffii but not in the bryophyte physcomitrella patens[J]. The Plant Cell，19（10）：3058-3079. doi：10.1105/TPC.107. 051524.

Hirano K，Ueguchi-Tanaka M，Matsuoka M. 2008. GID1-mediated gibberellin signaling in plants[J]. Trends in Plant Science，13（4）：192-199. doi：10.1016/j.tplants.2008.02. 005.

Ileperuma N R，Marshall S D G，Squire C J，Baker H M，Oakeshott J G，Russel R J L，Plummer K M，Newcomb R D，Baker E N. 2007. High-resolution crystal structure of plant carboxylesterase AeCXE1，from Actinidia eriantha，and its complex with a high-affinity inhibitor paraoxon[J]. Biochemistry，46（7）：1851-1859. doi：10.1021/bi062046w.

Nemoto K，Ramadan A，Arimura G I，Imai K，Tomii K，Shinozaki K，Sawasaki T. 2017. Tyrosine phosphorylation of the GARU E3 ubiquitin ligase promotes gibberellin signalling by preventing GID1 degradation[J]. Nature Communications，8（1）：1-15. doi：10.1038 /s41467-017-01005-5.

Olszewski N，Sun T P，Gubler F. 2002. Gibberellin signaling：Biosynthesis，catabolism，and response pathways[J]. The Plant Cell，14：61-80. doi：10.1105/TPC.010476.

Shimada A，Ueguchi-Tanaka M，Nakatsu T，Nakajima M，Naoe Y，Ohmiya H，Kato H，Matsuoka M. 2008. Struc-tural basis for gibberellin recognition by its receptor GID1[J]. Nature，456（7221）：520-523. doi：10.1038/nature07 546.

Sun T P. 2010. Gibberellin-GID1-DELLA：A pivotal regulatory module for plant growth and development[J]. Plant Phy-siology，154（2）：567-570.

Ueguchi-Tanaka M，Ashikari M，Nakajima M，Itoh H，Katoh E，Kobayashi M，Hsing Y I，Yamaguchi I，Matsuoka M. 2005. GIBBERELLIN INSENSITIVE DWARF1 encodes a soluble receptor for gibberellin[J]. Nature，437（7059）：693-698. doi：10.1038/nature04028.

Ueguchi-Tanaka M，Nakajima M，Katoh E，Ohmiya H，Matsuoka M. 2007. Molecular interactions of a soluble gibberellin receptor，GID1，with a rice DELLA protein，SLR1，and gibberellin[J]. The Plant cell，19（7）：2140-2155. doi： 10.1105/TPC.106.043729.

Yoshida H，Tanimoto E，Hirai T，Miyanoiri Y，Mitani R，Kawamura M，Takeda M，Takehara S，Hirano K，Kainosho M，Akagi T，Matsuoka M，Ueguchi-Tanaka M. 2018. Evolution and diversification of the plant gibberellin receptor GID1[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，115（33）：E7844-E7853. doi：10.1073/pnas.1806040115.

（責任編輯 陳 燕）

收稿日期：2020-08-13

基金項目：國家自然科學基金項目（31460322）

通訊作者：龍雯虹（1972-），https：//orcid.org/0000-0001-6919-6038，博士，副教授，主要從事蔬菜育種、資源評價與利用研究工作，E-mail：lwh57@sina.com

第一作者：唐文芳（1995-），https：//orcid.org/0000-0002-8752-2324，研究方向為蔬菜資源評價與利用，E-mail：T2676630889@126.com