趙蘇南 許丹丹 曹瑜 連云港市紅十字中心血站檢驗(yàn)科 （江蘇 連云港 222001）

內(nèi)容提要： 目的：通過(guò)HBsAg檢測(cè)，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室兩套全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行儀器設(shè)備間的性能和差異比較。方法：固定相同實(shí)驗(yàn)人員、試劑、方法、環(huán)境，設(shè)計(jì)4個(gè)隨機(jī)的實(shí)驗(yàn)組對(duì)常規(guī)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本、弱陽(yáng)性質(zhì)控血清、國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）標(biāo)本進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。對(duì)比不同實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本檢測(cè)的特異性和敏感性、檢測(cè)結(jié)果正確率、弱陽(yáng)性質(zhì)控品S/CO值批內(nèi)均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）和變異系數(shù)（CV）。采用χ2檢驗(yàn)和Kappa檢驗(yàn)等評(píng)價(jià)不同實(shí)驗(yàn)組定性檢測(cè)性能的差異及一致性。結(jié)果：4個(gè)隨機(jī)的實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)結(jié)果特異性（50/50），敏感性均（35/35），結(jié)果一致性（85/85），正確率（85/85）均為100%。HBsAg質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果批內(nèi)CV均＜7%，符合15%以內(nèi)的可接受標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)χ2檢驗(yàn)4個(gè)實(shí)驗(yàn)組兩套儀器設(shè)備間的檢測(cè)一致性為優(yōu)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：兩套全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)檢測(cè)HBsAg結(jié)果具有一致性，血站血液篩查實(shí)驗(yàn)室可以通過(guò)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本、弱陽(yáng)性質(zhì)控品和室間質(zhì)評(píng)樣本檢測(cè)結(jié)果相結(jié)合對(duì)比分析的方式，對(duì)設(shè)備之間的性能和差異進(jìn)行比較。

隨著實(shí)驗(yàn)室生物安全意識(shí)的提高及各地采供血機(jī)構(gòu)血液篩查實(shí)驗(yàn)室能力的逐步建設(shè)，血液檢測(cè)多采用全自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)化的儀器設(shè)備。由于檢測(cè)量、檢測(cè)方法與檢測(cè)策略的不同，各地采供血機(jī)構(gòu)血液篩查實(shí)驗(yàn)室可能存在多臺(tái)或多套設(shè)備檢測(cè)同一項(xiàng)目的情況，《血站技術(shù)操作規(guī)程（2019版）》檢測(cè)設(shè)備使用要求4.3.3明確指出：如果使用多臺(tái)設(shè)備檢測(cè)同一個(gè)項(xiàng)目，應(yīng)定期對(duì)設(shè)備之間的性能和差異進(jìn)行比較[1]。因此，本文設(shè)計(jì)不同的實(shí)驗(yàn)組，通過(guò)固定相同實(shí)驗(yàn)人員、試劑、方法、環(huán)境、檢測(cè)標(biāo)本，采用適宜的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，對(duì)不同儀器設(shè)備之間的性能和差異進(jìn)行分析比較，現(xiàn)將實(shí)踐分析報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 試劑與儀器

HBsAg ELISA試劑盒（英科新創(chuàng)，批號(hào)2020035107），質(zhì)控品HBsAg血清（液體）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（0.2IU/mL康徹思坦，批號(hào)202003003）。全自動(dòng)標(biāo)本處理系統(tǒng)（STAR-8CH）2臺(tái)，全自動(dòng)酶免檢測(cè)系統(tǒng)（FAME24/20）2臺(tái)（瑞士哈美頓公司）。

1.2 標(biāo)本來(lái)源

（1）常規(guī)檢測(cè)標(biāo)本：隨機(jī)抽取本站2020年11月12日～2020年11月14日采集的符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011）且輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物檢測(cè)為陰性的無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本48（人）份（5mL/份，EDTA-K2抗凝，2～8°C保存）。（2）外部商品化弱陽(yáng)性質(zhì)控品HBsAg血清（液體）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（0.2IU/mL康徹思坦，批號(hào)202003003）32支。（3）5份國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)本（EQASBS2071、EQASBS2072、EQASBS2073、EQASBS2074、EQASBS2075，低于-18°C保存）。

1.3 方法

1.3.1 檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)室2臺(tái)全自動(dòng)標(biāo)本處理系統(tǒng)：STAR-8CH（儀器序列號(hào)3435，本實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)稱STAR2,以下簡(jiǎn)稱STAR2），STAR-8CH（儀器序列號(hào)7323，本實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)稱STAR3,以下簡(jiǎn)稱STAR3）。2臺(tái)全自動(dòng)酶免檢測(cè)系統(tǒng)：FAME24/20（儀器序列號(hào)3072，本實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)稱FAME02,以下簡(jiǎn)稱FAME02），F(xiàn)AME24/20（儀器序列號(hào)3428，本實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)稱FAME03,以下簡(jiǎn)稱FAME03）。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)組：（1）實(shí)驗(yàn)組A：STAR2加樣，F(xiàn)AME02后處理檢測(cè)。（2）實(shí)驗(yàn)組B：STAR2加樣，F(xiàn)AME03后處理檢測(cè)。（3）實(shí)驗(yàn)組C：STAR3加樣，F(xiàn)AME02后處理檢測(cè)。（4）實(shí)驗(yàn)組D：STAR3加樣，F(xiàn)AME03后處理檢測(cè)。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)同一批標(biāo)本（85例）進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，參照文獻(xiàn)[2,3]方法，對(duì)比分析4個(gè)實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)的特異性和敏感性、檢測(cè)結(jié)果正確率、弱陽(yáng)性質(zhì)控品S/CO值批內(nèi)均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）和變異系數(shù)（CV）。采用χ2檢驗(yàn)和Kappa檢驗(yàn)評(píng)價(jià)不同實(shí)驗(yàn)組定性檢測(cè)性能的差異及一致性。

1.3.2 質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)操作人員均經(jīng)培訓(xùn)考核合格上崗。使用儀器設(shè)備均在校驗(yàn)周期內(nèi)，且使用前無(wú)故障無(wú)大修使用中運(yùn)行正常。使用有效期內(nèi)同一廠家相同批號(hào)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。環(huán)境溫度20～25°C，環(huán)境濕度40%～50%。常規(guī)標(biāo)本EDTA-K2抗凝，2～8°C保存,以3500r/min離心15min，弱陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)本-18°C以下冷凍保存，使用前復(fù)融并平衡至室溫，采用顛倒30次充分混勻。室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本-18°C以下冷凍保存，檢測(cè)前室溫復(fù)融并平衡至室溫，顛倒8～10次充分混勻。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)空白對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔，均符合有效性判定規(guī)則,外部弱陽(yáng)性質(zhì)控1孔，室內(nèi)質(zhì)控均在控。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS22.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)結(jié)果比較

各實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)48（人）份無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本、32支弱陽(yáng)性質(zhì)控品、5例室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本的HBsAg（其中陽(yáng)性3例、陰性2例）共85例檢測(cè)結(jié)果，經(jīng)過(guò)χ2檢驗(yàn)，各實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），正確率均為為100%，室間質(zhì)評(píng)定性結(jié)果準(zhǔn)確度均為100%，見(jiàn)表1。

表1. 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)結(jié)果敏感性與特異性比較

比較4個(gè)實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)結(jié)果的敏感性與特異性，經(jīng)過(guò)Kappa檢驗(yàn)，K=1，一致性為優(yōu)。敏感性及特異性均為100%，見(jiàn)表2。

表2. 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)結(jié)果敏感性與特異性比較

2.3 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑弱陽(yáng)性定值質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果（S/CO值）比較

比較4個(gè)實(shí)驗(yàn)組弱陽(yáng)性定值質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果（S/CO值），并計(jì)算批內(nèi)均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）和變異系數(shù)（CV），經(jīng)過(guò)單因素方差分析，F(xiàn)=2.637，P=0.053，檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0.05，檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同儀器設(shè)備使用同一種試劑檢測(cè)性能具有較好的一致性。各組S/CO值均在2～3范圍內(nèi)（實(shí)驗(yàn)組A其中一孔1.99屬于隨機(jī)誤差除外），批內(nèi)CV均＜7%，符合15%以內(nèi)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表3。

表3. 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑弱陽(yáng)性定值質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果(S/CO值)比較(±s)

表3. 各實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑弱陽(yáng)性定值質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果(S/CO值)比較(±s)

組別 S/CO值 變異系數(shù)(CV)%實(shí)驗(yàn)組A 2.28±0.13 5.65實(shí)驗(yàn)組B 2.23±0.14 6.39實(shí)驗(yàn)組C 2.32±0.15 6.51實(shí)驗(yàn)組D 2.32±0.16 6.78

3.討論

WHO血液安全的四大戰(zhàn)略措施之一：對(duì)所有捐獻(xiàn)的血液經(jīng)過(guò)輸血傳播疾病篩查，并開(kāi)展血型及相容性檢測(cè)。血站血液篩查實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)程序標(biāo)準(zhǔn)化，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，決定血液的安全性。病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理又對(duì)血液篩查實(shí)驗(yàn)室提出了保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員安全及周邊環(huán)境的要求。隨著實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化管理和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力建設(shè)的不斷加強(qiáng)，自動(dòng)化設(shè)備的投入，血液檢測(cè)程序進(jìn)一步標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，兼顧了保證血液質(zhì)量及維護(hù)實(shí)驗(yàn)室生物安全的雙重保障。

本站年采血量12噸以上，年標(biāo)本量超過(guò)4萬(wàn)人份，按照《血站技術(shù)操作規(guī)程》中檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法具體要求，進(jìn)行ALT檢測(cè)、血型檢測(cè)、輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物（HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋體）血清學(xué)和核酸檢測(cè)以及國(guó)家和省級(jí)衛(wèi)生健康行政部門規(guī)定的地方性、時(shí)限性輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物檢測(cè)，全自動(dòng)儀器設(shè)備的投入大大降低人員勞動(dòng)強(qiáng)度、感染風(fēng)險(xiǎn)，降低人為操作失誤，提高工作效率，提高檢測(cè)的精密度。有關(guān)文獻(xiàn)提出，全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀在測(cè)定結(jié)果的精密度要優(yōu)于手工方法[4]。

我國(guó)是HBV的高流行地區(qū)，人群HBsAg陽(yáng)性攜帶率7.18%[5]，江蘇省乙肝的報(bào)告發(fā)病人群的年齡集中在15～54歲的中青年，男性發(fā)病率遠(yuǎn)高于女性，且高于全國(guó)平均水平[6]。在輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物檢測(cè)中，本站HBsAg不合格率最高。本站使用廈門新創(chuàng)HBsAg檢測(cè)試劑在2020年度室間質(zhì)評(píng)反饋定性結(jié)果100%正確，但分析0.2IU/mL弱陽(yáng)性樣本結(jié)果具體S/CO值有低于2的情況。綜合考慮上述原因及經(jīng)濟(jì)成本，使用廈門新創(chuàng)HBsAg檢測(cè)試劑盒進(jìn)行儀器間的性能及差異比對(duì)實(shí)驗(yàn)。

獻(xiàn)血者血液篩查要求檢測(cè)方法具有較高的敏感性，降低假陰性，保證輸血安全，同時(shí)要求較高的特異性，降低假陽(yáng)性，減少獻(xiàn)血者的心理負(fù)擔(dān)及血液浪費(fèi)。從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，我站不同實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)結(jié)果敏感性與特異性均為100%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

分析0.2IU/mL弱陽(yáng)性質(zhì)控品S/CO值批內(nèi)均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）和變異系數(shù)（CV），我站不同實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)精密度均高。為了避免檢測(cè)結(jié)果精而不準(zhǔn)的情況，加入室間質(zhì)評(píng)樣本同時(shí)檢測(cè)，本站不同實(shí)驗(yàn)組用同一種試劑檢測(cè)準(zhǔn)確度100%，檢測(cè)結(jié)果一致。使用S/CO值在2～5范圍內(nèi)的弱陽(yáng)性質(zhì)控品及全國(guó)室間質(zhì)評(píng)樣本進(jìn)行儀器間的性能和差異比較可行。

本站有兩套全自動(dòng)酶免系統(tǒng)，儀器間的差異主要在以下幾個(gè)方面：第一，使用年限不同，STAR2+FAME02于2009年8月投入使用，使用時(shí)間超過(guò)10年，STAR3+FAME03于2014年8月使用，至今使用6年。從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，超過(guò)10年的全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)與使用時(shí)間10年內(nèi)的儀器設(shè)備相比檢測(cè)性能并無(wú)降低。第二，STAR2使用1000μL的一次性加樣槍尖，STAR3使用300μL的一次性加樣槍尖。從上述精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，對(duì)于廈門新創(chuàng)HBsAg檢測(cè)試劑盒100μL的較大加樣量來(lái)說(shuō)，300μL的一次性加樣槍尖加樣精密度優(yōu)勢(shì)并不明顯。第三，STAR2為中文操作界面，編程對(duì)用戶開(kāi)放。STAR3程序編輯為后臺(tái)英文代碼，并不對(duì)用戶開(kāi)放，降低人為操作失誤修改實(shí)驗(yàn)參數(shù)風(fēng)險(xiǎn)的同時(shí)，也降低了不同組合及檢測(cè)模式探索的便捷性。

綜上所述，本站兩套全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)運(yùn)行性能穩(wěn)定，可以在應(yīng)急情況下為備份。穩(wěn)定的運(yùn)行性能離不開(kāi)科學(xué)的儀器設(shè)備管理：儀器設(shè)備使用前安裝、運(yùn)行、性能確認(rèn)，使用期間有效監(jiān)控及性能定期比對(duì)、使用后有效的維護(hù)保養(yǎng)等。綜合經(jīng)濟(jì)成本及實(shí)際操作，我站并沒(méi)有對(duì)比對(duì)周期做出分析，如每年定期一次、儀器大修或更換主要部件后、改變儀器設(shè)備放置位置后等，可在今后的工作中不斷探索。