李海潔 郭國(guó)軍 郭朝輝 王林楓 王春秀 李 明 李國(guó)喜 劉變枝

(1. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院, 鄭州 450046; 2. 河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院, 鄭州 450046)

杜仲(Eucommia ulmoides)是我國(guó)特有名貴藥用落葉喬木, 傳統(tǒng)以皮入藥。隨著對(duì)杜仲資源利用的深入挖掘, 現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)杜仲葉同樣含有木脂素類、黃酮類和苯丙素類等成分, 其化學(xué)組成和藥理作用與杜仲皮所含物質(zhì)相似, 具抑菌、抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力和抗感染的作用。杜仲葉還具有脂肪和蛋白質(zhì)含量高, 含有多種氨基酸、微量元素及維生素等特點(diǎn)[1—3]。畜禽中的研究已經(jīng)證實(shí)在飼料中添加適量杜仲葉粉或其提取物可有效提高機(jī)體生產(chǎn)性能、免疫及抗氧化能力, 改善肉質(zhì)品質(zhì)[4]。

近年來(lái)水產(chǎn)品已成為人類動(dòng)物蛋白質(zhì)的主要來(lái)源, 但隨著資源和環(huán)境約束的進(jìn)一步加大, 水體環(huán)境保護(hù)和水產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題日益突出。在農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194號(hào)公告發(fā)布后, 我國(guó)穩(wěn)步推進(jìn)飼料行業(yè)“減抗”行動(dòng), 開(kāi)發(fā)綠色、安全、高效和無(wú)抗的飼料成為水產(chǎn)飼料從業(yè)者的首要工作重點(diǎn)。在“無(wú)抗”背景下, 杜仲葉價(jià)廉易得、抗菌消炎的特性受到了廣泛關(guān)注。已有部分研究證實(shí)在飼料中添加杜仲葉或者杜仲提取物等可提高水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)性能、免疫應(yīng)答水平及肌肉品質(zhì)[5—9], 說(shuō)明杜仲葉及其提取物可作為潛在的中草藥應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖中。但鑒于現(xiàn)有研究多以幼魚(yú)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象, 缺乏大規(guī)格魚(yú)種和成魚(yú)階段的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù), 魚(yú)類對(duì)飼料物質(zhì)的利用效率又受種屬和食性等的影響, 即使同種魚(yú),不同品種和不同規(guī)格間也存在物質(zhì)利用效率的差異[10,11]。因此, 開(kāi)展杜仲葉粉在大規(guī)格魚(yú)種和成魚(yú)階段魚(yú)類飼料中的應(yīng)用評(píng)估, 將為更有效地利用杜仲葉這一生物資源提供有效數(shù)據(jù)支撐。

黃河鯉(Cyprinus carpio)是黃河流域主要優(yōu)質(zhì)魚(yú)類, 因金鱗赤尾、肉質(zhì)鮮美聞名, 是我國(guó)內(nèi)陸水域重要養(yǎng)殖品種, 深受廣大消費(fèi)者歡迎。目前有關(guān)飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉影響的報(bào)道較少, 為滿足不同生長(zhǎng)階段魚(yú)類對(duì)營(yíng)養(yǎng)素利用差異性和集約化規(guī)模養(yǎng)殖下對(duì)精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)飼喂的需求, 本實(shí)驗(yàn)以黃河鯉成魚(yú)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象研究不同添加水平杜仲葉粉對(duì)黃河鯉成魚(yú)生長(zhǎng)、體成分、血液及肝臟抗氧化能力等方面的影響, 以期為黃河鯉成魚(yú)新型健康飼料的配制提供有效的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚(yú)和試驗(yàn)分組管理

試驗(yàn)用魚(yú)來(lái)源于河南省水產(chǎn)研究院黃河鯉育種中心, 正式試驗(yàn)前入圓形暫養(yǎng)缸(直徑2.00 m, 高0.75 m, 有效水體積1.88 m3)暫養(yǎng)2星期, 以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境。在暫養(yǎng)結(jié)束后, 挑選表觀健康, 規(guī)格一致的試驗(yàn)魚(yú)[初始規(guī)格: (505.13±1.37) g], 分別放入15個(gè)(直徑0.80 m, 高0.72 m, 有效水體積: 0.30 m3)水族缸內(nèi),每缸放魚(yú)15尾。

試驗(yàn)共分5個(gè)處理組, 以0添加組為對(duì)照, 以2%、4%、6%和8%杜仲葉粉添加組為試驗(yàn)組, 每組3個(gè)平行。養(yǎng)殖系統(tǒng)為室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng), 試驗(yàn)用水為曝氣24h的自來(lái)水, 實(shí)驗(yàn)期間水溫維持在29—32℃, 光照周期12L∶12D(光照時(shí)間8: 00—20: 00),溶氧量≥6.00 mg/L, 氨氮≤0.70 mg/L。

實(shí)驗(yàn)期間, 每天上午9: 00、下午15: 00各飽食投喂1次, 每次少量多次循環(huán)投喂1h, 投喂結(jié)束記錄每缸殘餌顆粒數(shù), 用以計(jì)算攝食數(shù)據(jù)。每天投喂量為魚(yú)體體重的2%—3%, 具體視魚(yú)的攝食情況適當(dāng)調(diào)整。

1.2 試驗(yàn)飼料配置

試驗(yàn)飼料以魚(yú)粉和豆粕為主要蛋白源, 以豆油和玉米油為脂肪源, 配制蛋白含量30.05%—31.27%,脂肪含量5.71%—7.27%的試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)用杜仲葉粉(由國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心提供)來(lái)自河南省汝陽(yáng)縣杜仲種植基地, 為秋后采集的鮮葉經(jīng)曬干和粉碎, 過(guò)40目篩制成, 其常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分為干物質(zhì)(Dry matter, DM)89.46%、總能(Gross energy,GE)19.47 MJ/kg、粗蛋白質(zhì)(Crude protein, CP)12.38%、粗灰分(Crude ash)12.79%、鈣(Ca)2.06%和磷(P)0.05%。

所有原料經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后, 過(guò)40目篩并充分混勻后加水, 制成粒徑大小2.50 mm左右的濕顆粒, 自然風(fēng)干后保存于-4℃冰箱備用。試驗(yàn)飼料配方及成分組成見(jiàn)表 1。

表1 黃河鯉試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成Tab. 1 Formulation and nutrition composition of the experimental diet of yellow river carp

1.3 取樣方法

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)整缸稱重并計(jì)數(shù), 用以計(jì)算生長(zhǎng)性能; 每缸取樣5尾魚(yú), 經(jīng)間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(3-Aminobenzoic acid ethyl ester methanesulfonate,MSS-22, 50 mg/L)麻醉后, 3尾用肝素鈉潤(rùn)洗后的注射器在尾靜脈處采血, 轉(zhuǎn)入肝素鈉潤(rùn)洗過(guò)的EP管中, 4000 r/min離心15min, 取上清液置于新的EP管中, 液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中冷凍保存, 用于血液生理指標(biāo)測(cè)定; 抽過(guò)血的黃河鯉于冰上解剖, 取其肝臟, 預(yù)冷生理鹽水沖洗干凈后, 濾紙吸干水分,放入EP凍存管中, 用于肝臟生理指標(biāo)測(cè)定; 同時(shí)解剖刀取背脊以下、側(cè)線以上肌肉放入樣品袋中, 液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中冷凍保存, 用于分析肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分和氨基酸組成。剩余2尾稱重并記錄抹干重用于體成分分析。

1.4 樣品分析

試驗(yàn)飼料、魚(yú)體背肌和全魚(yú)體成分組成采用AOAC(1995)方法進(jìn)行測(cè)定, 具體方法如下: 水分(Moisture)含量在105℃烘箱中烘至恒定進(jìn)行測(cè)定;粗蛋白質(zhì)(Crude protein)含量按照凱氏定氮法測(cè)定樣品中氮的含量后, 乘以系數(shù)6.25計(jì)算得出; 粗脂肪(Crude lipid)含量采用索氏抽提儀測(cè)定; 粗灰分(Crude ash)含量用馬弗爐550℃度灼燒至恒重測(cè)定。

魚(yú)體肌肉氨基酸組成測(cè)定根據(jù)GB5009.124-2016標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(鄭州)檢測(cè)。血液和肝臟谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)和酸性磷酸酶(Acid phosphatase, ACP)等用購(gòu)自南京建成科技有限公司的試劑盒測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)魚(yú)的增重率(Weight gain rate,WGR)、特定生長(zhǎng)率(Specific growth rate,SGR)和飼料轉(zhuǎn)化效率(Feed conversion rate,FCR)的計(jì)算公式如下:

增重率(WGR, %)=100×(終末體重-初始體重)/初始重量

特定生長(zhǎng)率(SGR, %/d)=100×(ln魚(yú)體末重-ln魚(yú)體初重)/飼養(yǎng)天數(shù)

飼料轉(zhuǎn)化效率(FCR, %)=100×增重/投喂量

數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)”表示, 利用SPSS 25.0軟件進(jìn)行分析處理。數(shù)據(jù)經(jīng)齊性檢驗(yàn)后(Homogeneity of variances), 進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA), 如果數(shù)據(jù)差異顯著(P＜0.05),進(jìn)行Duncan’s多重比較(Duncan’s multiple range test)。

2 結(jié)果

2.1 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉生長(zhǎng)性能和飼料利用的影響

由表 2可知, 在飼料中添加不同含量杜仲葉粉對(duì)黃河鯉的增重率、特定生長(zhǎng)率及飼料轉(zhuǎn)化效率均無(wú)顯著性差異影響(P＞0.05)。

表2 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對(duì)黃河鯉生長(zhǎng)性能和飼料利用的影響Tab. 2 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on growth and feed utilization of yellow river carp

2.2 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉肌肉和魚(yú)體成分組成的影響

由表 3可知, 黃河鯉肌肉中水分含量以6%杜仲葉粉添加組最低, 顯著低于其他處理組(P＜0.05), 肌肉粗灰分含量在各處理組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。肌肉中粗脂肪含量隨著飼料中杜仲葉粉的添加量升高顯著下降, 以8%杜仲葉粉添加組最低, 顯著低于0添加組和2%添加組(P＜0.05); 粗蛋白含量則隨著飼料中杜仲葉粉的添加呈顯著上升趨勢(shì), 于6%杜仲葉粉添加組魚(yú)體肌肉粗蛋白含量最高, 顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

表3 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對(duì)黃河鯉肌肉成分的影響Tab. 3 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on muscle composition of yellow river carp

由表 4可知, 在飼料中添加杜仲葉粉顯著影響黃河鯉魚(yú)體粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分的含量(P＜0.05)。魚(yú)體水分含量隨飼料中杜仲葉粉含量的增加整體呈顯著下降趨勢(shì), 以8%添加組水分含量最低(P＜0.05)。除6%添加組外, 魚(yú)體粗灰分、粗蛋白和粗脂肪含量均表現(xiàn)出隨飼料中杜仲葉粉含量升高而上升趨勢(shì), 均以8%處理組最高(P＜0.05)。

表4 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對(duì)黃河鯉體成分的影響Tab. 4 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on body composition of yellow river carp

2.3 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉肌肉氨基酸組成的影響

對(duì)黃河鯉肌肉中16種氨基酸含量進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 黃河鯉肌肉中蘇氨酸(Thr)、絲氨酸(Ser)和組氨酸(His)的含量隨飼料中杜仲葉粉含量的增加整體呈先升高后降低趨勢(shì)(P＜0.05; 表 5)。蘇氨酸(Thr)含量在4%和6%添加組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);絲氨酸(Ser)含量則在4%杜仲葉粉添加組最高(P＜0.05), 顯著高于對(duì)照組(P＜0.05); 組氨酸(His)含量在2%處理組顯著最高(P＜0.05)。各處理組總氨基酸含量、總必需氨基酸占總氨基酸比值、總非必需氨基酸占總氨基酸比值均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

表5 不同杜仲葉粉添加水平對(duì)黃河魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響Tab. 5 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on muscle amino acid composition of yellow river carpody

黃河鯉肌肉中呈味氨基酸總量、甜味氨基酸總量、苦味氨基酸總量、酸味氨基酸總量及鮮味氨基酸總量在各處理組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05),但均在4%—6%杜仲葉粉添加組較高(表 6)。

表6 不同杜仲葉粉添加水平對(duì)黃河魚(yú)肌肉中功能氨基酸含量的影響Tab. 6 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on function amino acid composition of yellow river carp muscle

將各處理組呈味氨基酸與黃河鯉肌肉中氨基酸總量比較分析發(fā)現(xiàn), 酸味氨基酸與總氨基酸比值在2%添加組顯著高于其他處理組, 藥效氨基酸與總氨基酸的比值則在2%添加組最低, 顯著低于其他處理組(P＜0.05), 以6%添加組最高(表 7)。

表7 不同杜仲葉粉添加水平對(duì)黃河鯉肌肉中各功能氨基酸含量占肌肉總氨基酸百分比的影響Tab. 7 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on the rate of function amino acid to total amino acid of yellow river carp muscle

2.4 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉血漿生理指標(biāo)的影響

由表 8可知, 在飼料中添加杜仲葉粉顯著影響黃河鯉血漿GSH-PX、SOD、ACP、AKP的活性和MDA含量(P＜0.05)。血漿GSH-PX、MDA和AKP隨飼料中杜仲葉粉含量的添加整體呈先升高后降低的趨勢(shì), GSH-PX活性和MDA含量均在6%處理組顯著最高(P＜0.05)。ACP活性在8%添加組最高(P＜0.05), 顯著高于其他處理組(P＜0.05)。AKP活性在4%處理組顯著最高(P＜0.05), SOD活性則隨飼料中杜仲葉粉含量增加顯著, 以2%處理組顯著最低(P＜0.05), 至8%處理組升至對(duì)照水平。

表8 飼料中不同添加水平杜仲葉粉對(duì)黃河鯉血漿生理指標(biāo)的影響Tab. 8 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on plasma physiological indexes of yellow river carp

2.5 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉肝臟生理指標(biāo)的影響

由表 9可知, 肝臟中GSH-PX、AKP、ACP活性及MDA的含量均隨飼料中杜仲葉粉含量的增加呈先上升后下降的趨勢(shì), 其中GSH-PX活性和MDA含量在4%處理組顯著最高(P＜0.05), ACP活性在4%處理組顯著升至最高后維持在此水平(P＜0.05),AKP活性則在6%處理組顯著最高(P＜0.05)。肝臟SOD含量則隨著杜仲葉粉的添加持續(xù)上升, 至8%處理組升至最高, 顯著高于其他處理組(P＜0.05)。

表9 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對(duì)黃河鯉肝臟生理指標(biāo)的影響Tab. 9 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on liver physiological indexes of yellow river carp

3 討論

3.1 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉生長(zhǎng)性能和飼料利用的影響

現(xiàn)有研究表明, 在飼料中添加杜仲葉粉、杜仲提取物或杜仲活性成分等并不都能改善魚(yú)類生長(zhǎng)性能、降低飼料系數(shù)[6—9,12—15], 如冷向軍等[13]在飼料中添加4%的杜仲葉粉顯著提高規(guī)格為(425.8±37.6) g的草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)增重率、降低飼料系數(shù), 但許曉瑩等[14]在飼料中添加2%的杜仲卻對(duì)規(guī)格為(215±0.4) g的草魚(yú)生長(zhǎng)無(wú)顯著影響。飼料中添加20 g/kg的杜仲可顯著提高規(guī)格為(95.1±0.3) g的草魚(yú)增重率, 但對(duì)規(guī)格為(47.1±0.8) g的草魚(yú)生長(zhǎng)無(wú)顯著促進(jìn)作用[6,7]。飼料中添加0.5%—4.0%杜仲皮水提物也未能顯著提高虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[規(guī)格: (145.56±4.12) g]的生長(zhǎng)效率[9]。飼料中添加5和20 g/kg的杜仲葉粉甚至顯著降低大菱鲆(Scophthalmus maximus)的攝食率、終末體重和特定生長(zhǎng)率[15]。這種不一致性可能與實(shí)驗(yàn)魚(yú)種屬、規(guī)格、杜仲添加濃度及活性成分等直接相關(guān)。已有數(shù)據(jù)表明杜仲不同活性成分引起魚(yú)類生長(zhǎng)效果差異顯著: 如與綠原酸相比, 杜仲提取物京尼平苷酸和京尼平苷對(duì)草魚(yú)魚(yú)種生長(zhǎng)無(wú)促進(jìn)作用[16], 在大鼠(Rattus norvegicus)飼料中添加京尼平苷酸甚至抑制其攝食, 導(dǎo)致體重下降[17]; 即使同一杜仲提取物對(duì)同一物種不同規(guī)格的魚(yú)類也可能產(chǎn)生不同的生長(zhǎng)效果, 如杜仲提取物綠原酸對(duì)小規(guī)格草魚(yú)(3—40 g)的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用[18], 但對(duì)較大規(guī)格草魚(yú)魚(yú)種[(95.1±0.3) g]作用不明顯[6]。與上述文獻(xiàn)報(bào)道相比, 本試驗(yàn)中添加不同含量杜仲葉粉對(duì)黃河鯉成魚(yú)生長(zhǎng)性能及飼料利用均無(wú)顯著作用, 推測(cè)可能因?qū)嶒?yàn)魚(yú)種屬、規(guī)格或者不同來(lái)源杜仲產(chǎn)品成分差異所致。

3.2 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉體成分和氨基酸組成的影響

本實(shí)驗(yàn)中添加適量杜仲葉粉可有效降低黃河鯉背肌粗脂肪含量, 提高背肌粗蛋白含量, 這和楊航等[5]、冷向軍等[13]、羅慶華等[19]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。也有研究表明在飼料中添加杜仲葉粉、杜仲皮或其提取物對(duì)魚(yú)類肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分無(wú)顯著影響[9,14,20]。在虹鱒飼料中添加杜仲皮水提物顯著提高其肌肉中粗脂肪含量[21]。杜仲葉粉引起機(jī)體肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量變化趨勢(shì)不一致的現(xiàn)象在哺乳類中也有報(bào)道[22]。這種不一致性可能受實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種、實(shí)驗(yàn)條件和杜仲活性成分組成等影響, 如Sun等[7]研究發(fā)現(xiàn)綠原酸和京尼平苷可顯著降低草魚(yú)[規(guī)格: (47.1±0.6) g]肌肉脂肪含量, 但相同添加濃度(400 mg/kg)的京尼平苷酸卻對(duì)草魚(yú)肌肉脂肪含量無(wú)顯著影響。在規(guī)格為(18.50±0.40) g的草魚(yú)實(shí)驗(yàn)中, 肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分未受飼料中京尼平苷酸(400 mg/kg)和京尼平苷(400 mg/kg)的影響[5]。攝食不同杜仲提取物的草魚(yú)肌肉轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果顯示, 杜仲活性成分顯著影響草魚(yú)肌肉代謝通路, 槲皮素處理組、京尼平苷酸處理組和京尼平苷處理組顯著富集的KEGG通路分別為37條、4條和5條,其中槲皮素處理組37條通路中大部分參與肌肉收縮、脂質(zhì)代謝、免疫和抗氧化, 京尼平苷酸處理組的4條通路中有3條與脂質(zhì)代謝相關(guān), 而京尼平苷處理組的5條通路有4條與免疫相關(guān)。哺乳類的研究也表明杜仲葉或者杜仲成分可通過(guò)影響機(jī)體血液代謝組學(xué)、脂肪和糖類代謝相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在生物體內(nèi)的分配[23,24]。在本試驗(yàn)飼料中添加一定量杜仲葉粉顯著降低黃河鯉肌肉粗脂肪的蓄積, 顯著提高肌肉粗蛋白及全魚(yú)魚(yú)體粗蛋白和粗脂肪含量, 應(yīng)該是杜仲葉中各活性成分共同作用調(diào)控營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在黃河鯉體內(nèi)分配的結(jié)果。

氨基酸是維持機(jī)體生命機(jī)能的重要物質(zhì), 大都因具有酸、甜、苦和鮮等味道決定了食物的風(fēng)味和營(yíng)養(yǎng)功效, 部分氨基酸如Asp、Glu、Arg、Gly和Met等還因具有特殊功效被稱為藥效氨基酸。肌肉中氨基酸種類、含量和比例等是肉類營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)和影響肉類風(fēng)味的重要因素。在本研究中, 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉肌肉中人體必需氨基酸總量、非必需氨基酸總量、總氨基酸含量、甜味氨基酸總量、苦味氨基酸總量、酸味氨基酸總量及藥效氨基酸總量無(wú)顯著影響, 但顯著影響黃河鯉肌肉中Thr、Ser、His的含量及酸味氨基酸和藥效氨基酸與黃河鯉肌肉中總氨基酸的比值。黃河鯉肌肉Thr含量在4%—6%杜仲葉粉添加組、Ser含量在2%—4%添加組顯著高于對(duì)照組, 說(shuō)明在飼料中添加一定量的杜仲葉粉可顯著提高肌肉中Thr和Ser的含量。楊航等[5]、Sun等[7]在草魚(yú)同樣觀察到杜仲產(chǎn)物促進(jìn)肌肉中Thr和Ser含量的蓄積。張安青等[9]在虹鱒中也報(bào)道了杜仲水提物提高了虹鱒肌肉中Ser和His含量。本試驗(yàn)中黃河鯉肌肉His含量隨杜仲葉粉添加顯著上升后又顯著下降,說(shuō)明添加一定量杜仲葉粉對(duì)黃河鯉肌肉His沉積有促進(jìn)作用, 添加量過(guò)高則降低黃河鯉肌肉中His的含量, 這與Sun等[7]在草魚(yú)中的研究結(jié)果相一致。杜仲產(chǎn)物促進(jìn)肌肉Ser合成的現(xiàn)象在雞中也有報(bào)道[25]。也有文獻(xiàn)報(bào)道顯示在飼料中添加杜仲葉粉對(duì)肌肉Thr和Ser含量無(wú)顯著影響, 如張青紅[8]研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加杜仲葉粉對(duì)青魚(yú)(Mylopharyngodon piceus)肌肉Gly、Asp、Ala和Glu四種呈鮮味氨基酸及Lys、Ile、Val和Met的合成有顯著促進(jìn)作用, 但對(duì)Thr和Ser含量無(wú)顯著促進(jìn)作用。在本試驗(yàn)中, 黃河鯉肌肉中呈味氨基酸總量和各呈味氨基酸在各處理組間均無(wú)顯著差異, 但均以4%—6%添加組略高。酸味氨基酸總量與總氨基酸之比在2%處理組顯著最高, 藥效氨基酸總量與總氨基酸之比隨著杜仲葉粉添加量顯著上升, 說(shuō)明杜仲葉粉添加對(duì)黃河鯉肌肉中呈味氨基酸有一定影響。但不同文獻(xiàn)報(bào)道間肌肉氨基酸數(shù)據(jù)受杜仲葉粉影響的差異性提示杜仲或其活性成分對(duì)機(jī)體肌肉氨基酸沉積的影響需進(jìn)行更為深入和精準(zhǔn)的研究。

3.3 飼料中添加杜仲葉粉對(duì)黃河鯉血液和肝臟生理指標(biāo)的影響

血液是維持生物體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要組成部分, 肝臟是生命體物質(zhì)代謝的重要器官, 血液和肝臟生理指標(biāo)可直觀反應(yīng)生物體健康程度。GSHPX和SOD是機(jī)體內(nèi)2種重要的抗氧化酶, 是機(jī)體抵抗外界應(yīng)激的重要屏障。AKP和ACP作為溶酶體的重要組成部分, 可作用于病原體表面結(jié)構(gòu)進(jìn)而促進(jìn)巨噬細(xì)胞對(duì)病原體的識(shí)別和吞噬, 在提高機(jī)體免疫力、轉(zhuǎn)移磷酸基團(tuán)和物質(zhì)消化吸收中發(fā)揮重要作用[26]。MDA是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物,反映機(jī)體氧化損傷的程度。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明隨飼料中杜仲葉粉含量增加黃河鯉血漿和肝臟中GSHPX和AKP活性均先顯著上升后下降。在飼料中添加一定量的杜仲葉粉可顯著提高血漿和肝臟中ACP活性和SOD活性, 這和張青紅等[8]、張純等[27]、李軍濤等[28]、彭密軍等[29]的研究結(jié)果相一致, 說(shuō)明在飼料中添加一定含量的杜仲葉粉有助于促進(jìn)黃河鯉成魚(yú)機(jī)體抗氧化和非特異性免疫力的提升。

在本試驗(yàn)中, 黃河鯉血漿和肝臟MDA含量隨杜仲葉粉含量呈先顯著上升后下降, 說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)所用杜仲葉粉可在一定程度上引起魚(yú)體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng), 這和Yang等[20]在草魚(yú)中的研究結(jié)果相異, 但和李軍濤等[28]在凡納濱對(duì)蝦(Penaeus vannamei)中得到的結(jié)果相一致。Yang等[20]研究發(fā)現(xiàn)杜仲葉和杜仲皮提取物顯著降低草魚(yú)機(jī)體MDA含量, 李軍濤等[28]研究卻發(fā)現(xiàn)飼料中添加0.1—0.7 g/kg杜仲葉提取物導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦血清MDA含量先顯著升高后又降至對(duì)照水平, 肝胰腺中MDA含量則在0.7 g/kg處理組顯著高于其他處理組。劉波等[12]的研究也發(fā)現(xiàn)飼料中杜仲添加量過(guò)低或者過(guò)高均可導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦血清MDA含量升高, 這可能和杜仲葉添加水平及其含有的活性成分有關(guān)。杜仲和杜仲葉中含有100多種活性物質(zhì)[30], 其藥效活性成分因采收季節(jié)、產(chǎn)地、生長(zhǎng)年限、采收部位和加工貯存方法等而異[31]。劉榮華等[32]對(duì)國(guó)內(nèi)17個(gè)不同產(chǎn)地杜仲葉活性成分測(cè)定數(shù)據(jù)表明河南產(chǎn)杜仲葉中京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷含量較高, 提示河南產(chǎn)杜仲葉中環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)含量較高。哺乳類中的研究已經(jīng)表明杜仲或其活性成分可致慢性毒性作用[33],杜仲活性成分環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)(京尼平苷、京尼平苷酸等)可能是導(dǎo)致杜仲慢性毒性作用的主要物質(zhì)[34,35]。京尼平苷在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物京尼平可引起HepG2細(xì)胞內(nèi)總活性氧水平明顯升高, 且呈顯著濃度依賴效應(yīng)[36]。本實(shí)驗(yàn)所用杜仲葉粉來(lái)自河南汝陽(yáng)縣杜仲種植基地, 可能含有較多環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì), 這或許是導(dǎo)致本試驗(yàn)中黃河鯉血漿和肝臟中MDA含量上升的原因。在本試驗(yàn)中隨著杜仲葉粉添加量的進(jìn)一步增加黃河鯉血漿和肝臟MDA含量下降說(shuō)明此時(shí)杜仲葉粉中活性物質(zhì)的抗氧化作用超過(guò)了氧化作用, 這可由黃河鯉血漿和肝臟中GSH-PX及SOD含量隨杜仲葉粉添加整體呈上升趨勢(shì)證實(shí)。

整體而言, 綜合考慮本實(shí)驗(yàn)血液和肝臟生理指標(biāo), 建議黃河鯉成魚(yú)飼料中杜仲葉粉的添加量以4%—6%為宜。

致謝:

本實(shí)驗(yàn)所用杜仲葉粉和黃河鯉分別由國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心和河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院水產(chǎn)養(yǎng)殖與遺傳魚(yú)種研究室提供。感謝在實(shí)驗(yàn)魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中張言浩、張苗苗、楊?yuàn)W昆和丁仕萍四位同學(xué)給予的幫助！