蘇柘僮，肖勁邦，錢柏霖，朱潁琨，周劍婧，朱秋祥，楊世林，馮育林，高紅偉，沈留紅

(1.廣西英路維特藥物有限公司，廣西 荔浦 546600 ； 2.四川農業(yè)大學動物醫(yī)學院 動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130 ； 3.江西中醫(yī)藥大學 中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，江西 南昌 330006 ； 4.廣西中醫(yī)藥大學, 廣西 南寧 530000)

乳房炎是全世界公認的奶牛三大疾病之一，嚴重制約了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前其防控主要手段是使用抗生素，但長期大劑量甚至超劑量使用抗生素，不僅會導致耐藥菌株產生耐藥性，還會導致乳汁內抗生素殘留的公共衛(wèi)生安全隱患[1-4]。中草藥及其制劑因其療效好、副作用少、無殘留等優(yōu)勢，在奶牛養(yǎng)殖中的應用越來越廣泛，牧場常選用具有抗菌消炎、提高免疫、抗氧化、抗內毒素等作用的中藥或中藥組方治療奶牛乳房炎，并取得一定效果[5-6]。白頭翁及其主要成分白頭翁皂苷B4具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲等功效，人醫(yī)臨床上常用于抗炎抑菌[7-9]、增強免疫[10]和抗氧化[11]等，其兼?zhèn)涞目寡住⒁志?、抗氧化和提升免疫力等藥效，與乳房炎清除細菌、緩解炎癥、提高自身免疫力以幫助自愈的治療需求密切吻合。因此，本試驗旨在探究不同劑量白頭翁皂苷B4對奶牛臨床型乳房炎奶牛體溫、呼吸頻率、心率、單次反芻咀嚼次數(shù)、產奶量、治愈時間和治愈率的影響，從臨床的角度探明白頭翁皂苷B4治療臨床型乳房炎的最佳劑量，為后續(xù)試驗及其臨床推廣應用提供基礎數(shù)據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 選用四川某規(guī)?；膛霭敕忾]統(tǒng)一飼舍的中國荷斯坦奶牛，體重(612±47)kg，年齡3～4周歲，2～3胎泌乳高峰期健康奶牛20頭和患臨床型乳房炎的奶牛50頭。從中選取泌乳天數(shù)、產奶量相近的臨床檢查健康奶牛12頭和患臨床型乳房炎奶牛36頭進行本試驗，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑 白頭翁皂苷B4注射液(100 mL/瓶，白頭翁皂苷B4含量66.67%)，由四川英路維特醫(yī)藥科技有限公司惠贈，經江西中醫(yī)藥大學中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心鑒定。

1.3 主要儀器 阿波羅(ALPRO)牛群管理系統(tǒng)，瑞士DeLaval股份有限公司；TGLB-16G臺式離心機，Sigma公司；JS-B電子臺秤，上海升徽電子有限公司；DW-86L828W超低溫冰箱，青島海爾股份有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 奶牛臨床型乳房炎判斷標準 本試驗臨床型乳房炎奶牛均為自然發(fā)病病例，由牧場同一執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師判定，其判定標準：奶牛乳腺紅、腫、觸之敏感，患區(qū)乳房表面溫度升高，乳腺腫大，產奶量顯著減少或停止，乳汁異常，呈淺黃色或淺紅色，稀薄或黏稠，有絮狀物。

1.4.2 試驗奶牛給藥方法及分組 根據乳房灌注、頸部肌內注射和頸靜脈注射白頭翁皂苷B4治療奶牛臨床型乳房炎(5、10 mL/次和15 mL/次，3 次/d，連續(xù)給藥4～6 d)均有效的預試驗結果。因頸部肌內注射給藥最簡單，本試驗選擇頸部肌內注射的方法給藥。將12頭健康奶牛(對照組)記為A組，36頭臨床型乳房炎奶牛(試驗組)隨機均分為B、C、D三組。A組不注射藥物，B、C組和D組分別頸部肌內注射白頭翁皂苷B4 15、30 mL和60 mL，1 次/d，發(fā)病當天即開始用藥(采樣均在用藥之前)，記為第1天，連續(xù)給藥4～6 d，觀察至第12天。

1.4.3 試驗奶牛體溫、呼吸頻率、心率、單次反芻咀嚼次數(shù)測定 每日上午8:00應用體溫表測定并記錄健康和臨床型乳房炎奶牛第1～7天直腸溫度；利用秒表記錄連續(xù)5 min心率、呼吸頻率，記錄連續(xù)3次的單次反芻咀嚼次數(shù)，并均取平均值。

1.4.4 療效判定方法和標準 治療期間及治愈后，對比每一天臨床癥狀和乳汁性狀進行分析[12]。痊愈：乳房或患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀完全消失，產奶量回升，泌乳量和乳汁恢復正常；有效：乳房或患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀減輕或基本消失，乳汁無凝塊或有少量絮狀物或基本恢復正常，泌乳量回升或基本恢復正常；無效：乳房或患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀無明顯改善或加重，泌乳量下降，乳汁異常。

1.4.5 試驗奶牛產奶量、治愈時間和治愈率的測定 依據ALPRO牛群管理系統(tǒng)記錄健康及臨床型乳房炎奶牛試驗第1～7天的產奶量，觀察臨床型乳房炎奶牛每天的臨床癥狀(包括乳房質地、性狀、乳汁性狀等)判斷治愈情況，并計算12 d內的治愈時間、有效率及治愈率等。

2 結果

2.1 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛體溫的影響 如表1所示，臨床型乳房炎奶牛和健康奶牛體溫均在正常范圍波動，B、C、D組奶牛體溫均呈逐漸下降趨勢，第5天后均接近對照組(組內差異均不顯著)(P>0.05)。其中B組1～3 d差異不顯著(P>0.05)，C組1～3 d差異顯著(P<0.05)，D組1～5 d差異均顯著(P<0.05)。試驗前4天，3個試驗組組間均分別差異不顯著(P>0.05)，但均明顯高于對照組(P<0.05)；第5～6天，B組仍明顯高于A組(P<0.05)，第7天時，各組體溫差異均不顯著(P>0.05)。

表1 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛體溫的影響Table 1 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the temperature of dairy cows with clinical mastitis (℃、n=12)

2.2 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛呼吸頻率的影響 如表2所示，A組奶牛呼吸頻率1～7 d均在正常范圍波動(P>0.05)；B、C、D組奶牛呼吸頻率均呈下降趨勢，其中B組第3～4、5～7天差異均分別不顯著(P>0.05)，但第1、2、3～4、5～7天間分別差異顯著(P<0.05)；C組第3～4、4～6、5～7天差異均分別不顯著(P>0.05)，但第1、2、3、5～7天間分別差異顯著(P<0.05)；D組第5～7天差異均分別不顯著(P>0.05)，但第1、2、3、4、7天間分別差異顯著(P<0.05)。另外，B、C、D組前3天均顯著高于A組(P<0.05)；第4天，C、D組均分別與A、B組差異顯著(P<0.05)；第5～6天，B組顯著高于A組(P<0.05)；第7天，A組與B、C、D組差異均分別不顯著(P>0.05)，但B組和C組差異顯著(P<0.05)。

表2 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛呼吸頻率的影響Table 2 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the respiratory rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.3 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛心率的影響 如表3所示，A、B、C、D各組間和組內奶牛第1～7天試驗奶牛心率均無明顯變化趨勢，差異均分別不顯著(P>0.05)。

表3 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛心率的影響Table 3 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the heart rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.4 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛單次反芻咀嚼次數(shù)的影響 由表4可見，試驗期間A組奶牛各天單次反芻咀嚼次數(shù)均差異不顯著(P>0.05)。B、C、D組奶牛隨用藥時間推進，治療前3天，B、C、D組(組間差異不顯著)均明顯低于A組(P<0.05)，且3 d后，B組明顯低于C組或D組(P<0.05)， C、D組(第4天與A組差異不顯著)效果優(yōu)于B組(第7天仍低于A組)，但C、D組差異均不顯著(P>0.05)。第4天后基本恢復正常，組內差異不顯著(P>0.05)。

表4 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛單次反芻咀嚼次數(shù)的影響Table 4 Effect of Pulsatilla saponin B4 on mastications per rumination of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.5 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛泌乳量的影響 由表5可見，試驗期間A組奶牛各天產奶量均差異不顯著(P>0.05)。B、C、D組除第2天低于第1天外，均隨治療時間推進，呈上升趨勢，C、D組第4天后明顯高于前3天，B組第5天后才明顯高于前3天(P<0.05)。臨床型乳房炎奶牛產奶量明顯低于健康奶牛(P<0.05)，治療7 d均也明顯低于A組(P<0.05)，且第3天后，B組明顯低于C、D組(P<0.05)，D組高于C組，但組間差異不顯著(P>0.05)。

表5 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛泌乳量的影響Table 5 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the milk production of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.6 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛治愈時間及治愈率的影響 如表6所示，B、C、D組臨床型乳房炎奶牛12 d內治療有效率均達100.00%，總治愈率分別為75.00%、75.00%和91.67%，呈明顯量效關系；平均治愈時間分別為6.33、6.11 d和6.91 d，其中，治療第6天，C組即有6頭臨床治愈，B、D組均為4頭。綜上，選取C組30 mL/d的劑量即可達到理想臨床治療效果。

表6 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛治愈時間及治愈率的影響Table 6 Effect of Pulsatilla saponin B4 on cure time and cure rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

3 討論

3.1 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛主要臨床指標的影響 體溫、呼吸頻率、心率和單次反芻次數(shù)是評價奶牛機體健康狀況和生理狀態(tài)的重要臨床指標。奶牛屬于恒溫動物，其體溫僅在較為恒定的范圍內發(fā)生細微變化，但臨床型乳房炎會造成奶牛體溫不同程度升高，從而刺激呼吸感受器，經呼吸中樞整合增強呼吸反射，導致奶牛呼吸頻率上升[13]，進而促使心交感神經興奮，心臟收縮力加強，心率加快。本試驗結果表明，臨床型乳房炎奶牛體溫、呼吸頻率、心率和單次反芻次數(shù)均在正常生理范圍波動，但體溫、呼吸頻率均高于健康奶牛，使用白頭翁皂苷B4治療后均呈下降趨勢，并在第7天時，各組間奶牛體溫、呼吸頻率均分別差異不顯著(P>0.05)，與王爽[5]和鄭會超等[14]研究結果一致，說明臨床型乳房炎引起奶牛體溫和呼吸頻率不同程度的升高，而白頭翁皂苷B4可發(fā)揮抗炎、解熱作用，并呈一定量效關系緩解體溫和呼吸頻率的升高。臨床型乳房炎奶牛的心率在發(fā)病初期及治療過程中與健康奶牛無明顯變化(P>0.05)，與肖定福等[15]利用青蒿、薄荷、佩蘭、金銀花和甘草等按一定比例配制組成的中藥組方降低熱應激奶牛心率的結果相符，一方面可能由于牧場揭發(fā)臨床型乳房炎較為及時，尚無嚴重全身癥狀；另一方面表明白頭翁皂苷B4對奶牛心率無明顯副作用。奶牛是反芻動物，反芻活動對其采食和消化具有重要意義，當奶牛處于疾病或應激狀態(tài)下，反芻咀嚼次數(shù)會發(fā)生顯著變化[16-17]。本試驗結果發(fā)現(xiàn)，試驗第1～3天各組臨床型乳房炎奶牛單次反芻咀嚼次數(shù)均顯著低于健康奶牛(P<0.05)，但隨治療時間的推進，單次反芻咀嚼次數(shù)逐漸恢復，在第4天時發(fā)生顯著改善，說明臨床型乳房炎會影響奶牛的反芻和消化功能，而白頭翁皂苷B4具備解熱、抗炎、抑菌、提高免疫的作用，可有效緩解奶牛炎癥和疼痛應激狀態(tài)，恢復單次咀嚼和反芻次數(shù)，改善采食。

3.2 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛治愈時間、治愈率和泌乳量的影響 臨床型乳房炎大多是由細菌感染引起炎癥反應，會導致奶牛乳腺損傷和產奶量下降，抑制細菌和消除炎癥是治療奶牛乳房炎的2個關鍵。研究表明，白頭翁兼具良好的抗菌和抗炎作用，白頭翁皂苷B4的α、β不飽和酮結構是抗炎所必需基團，可調節(jié)血管收縮，增加血流量，減輕白細胞與內皮細胞黏附反應，控制白細胞傳出血管壁，減少炎癥組織中白細胞數(shù)，從而減輕炎癥反應，其效應與局部血流量相關，而奶牛每產1 kg牛奶需500 kg的血液流經乳腺[18]，因此推測對乳腺也會有相應的效果，文獻報道應用白頭翁散加減治療奶牛出血性乳房炎，灌服1劑后乳汁紅色變淡，續(xù)服2劑，4 d后痊愈[19]；金蘭梅等[20]通過體外抑菌試驗發(fā)現(xiàn)，單味白頭翁對引起奶牛乳房炎的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌均有較強抑制作用；呂平等[6]研究認為，白頭翁提取物均對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有一定抑菌作用。本試驗結果顯示，各組臨床型乳房炎奶牛12 d內治療有效率均達100%，總治愈率分別為75.00%、75.00%和91.67%，其中在治療第7天，3個組治愈頭數(shù)相近，在超出給藥時間后，C、D組分別有1頭和2頭自愈，且在治療過程中，泌乳量均呈逐漸上升趨勢，C組和D組第3天開始，泌乳量回升趨勢均顯著高于B組(P<0.05)， 表明不同劑量白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎均具有較好治療效果，呈明顯量效關系。但考慮治療成本和減輕注射應激，推薦30 mL頸部肌內注射，1 次/d，連續(xù)4～6 d，即可達到理想治療效果。