王 彬，楊 璐

食管癌是導(dǎo)致癌癥患者死亡的最常見原因，迄今為止的標(biāo)準(zhǔn)診斷方法包括射線照相術(shù)、超聲和磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)[1]。食管癌的檢測基于細(xì)微的結(jié)構(gòu)變形、顯示接近正常組織密度的腫塊、皮膚增厚和微鈣化[2]。組織病理學(xué)上，食管癌通常表現(xiàn)為腺癌或鱗狀細(xì)胞癌。T1～2a期腫瘤單純手術(shù)治療和局部晚期放化療和手術(shù)三聯(lián)治療僅限于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者。由于癥狀出現(xiàn)較晚，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已屬疾病晚期，主要采用非手術(shù)治療，例如放療和/或化療，導(dǎo)致預(yù)期的5 a生存率低于15%[3]。

MicroRNAs(miRNAs)是一類含有約22個核苷酸的非編碼小RNA分子，存在于植物、動物和一些病毒中，能夠在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上調(diào)節(jié)基因表達(dá)miRNAs[4]。有證據(jù)表明miRNAs在細(xì)胞增殖、凋亡、分化和遷移等多種生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。更多的研究還發(fā)現(xiàn)miRNA調(diào)節(jié)多種癌癥的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和代謝，包括食管癌、肺癌、肝癌和卵巢癌[5]。因此，miRNA還可以作為潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物和各種癌癥的新治療靶點。miR-552是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA，促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖[6]。然而，miR-552在食管癌中的作用鮮為人知。目前，基于血液或組織中腫瘤標(biāo)志物的非侵入性癌癥檢測方法已引起廣泛關(guān)注。本研究重點分析食管癌組織miR-552表達(dá)水平，并與CT征象進(jìn)行對比研究，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料2018年1月至2021年4月漯河市中醫(yī)院外科液氮凍存的61例食管癌組織，男41例，女20例；年齡25～60(51.27±6.82)歲，同時選取相應(yīng)的患者癌旁正常組織作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理檢查確診為食管癌的患者。②患者術(shù)前未接受放化療及其他治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：獲得癌組織但無對應(yīng)癌旁正常組織；樣本因保存不當(dāng)導(dǎo)致RNA降解，或石蠟包埋標(biāo)本。提前告知患者標(biāo)本采集情況，簽署知情同意書，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法所有受試者在檢查前禁食6 h以上，患者處于仰臥位，使用美國GE64層螺旋CT進(jìn)行常規(guī)平掃。掃描參數(shù)為：間距1.5 mm，切片厚度10 mm，電壓120 kV，電流160 mA。普通掃描后，從肘正中靜脈以3.5～4 mL·s-1的流速靜脈注射80 mL碘海醇。增強(qiáng)掃描參數(shù)設(shè)置如下：切片厚度5 mm，管電壓130 kV，120 ma·s-1。圖像由放射科主治醫(yī)師(至少2名)共同分析。

1.3 qRT-PCR檢測miR-552表達(dá)水平使用TRIzol試劑(Invitrogen，美國)分離總RNA。采用PrimeScript miRNA cDNA試劑盒(TaKaRa，日本)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。使用SYBR Premix Ex Taq I進(jìn)行RT-PCR，U6用作miRNA的內(nèi)參基因。實驗中使用的引物由上海鉑尚生物科技有限公司提供，miR-552上游序列：5’-GTAGAGTGTGTGGTCCCAGT-3’，下游：5’-CAGGGAGACCTGTATGGTCC-3’，產(chǎn)物大小93bp；內(nèi)參U6上游序列：5’-CGAGCGCCACTTCAGAATA-3’，下游序列：5’-CTCACGGCGCTTCATCAGAT-3’，長度139 bp。采用2-ΔΔCt方法計算miR-552相對表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計分析采用SPSS 21.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，應(yīng)用t檢驗對計量資料、χ2檢驗對計數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，ROC用于評估m(xù)iR-552的診斷價值，采用Spearman 進(jìn)行秩相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-552水平比較qRT-PCR顯示，癌組織miR-552表達(dá)水平(9.12±2.27)明顯高于癌旁組織(3.12±1.24)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=18.117，P<0.01)。

2.2 miR-552水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系表1顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中低分化、T3-4期的患者的miR-552水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分化、T1～2期患者的表達(dá)水平(P<0.05)。

表1 miR-552水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 不同CT征象患者miR-552表達(dá)水平表2、圖1-2顯示，miR-552水平在不同腫塊大小、腫塊邊緣有無毛刺方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，在有無微小鈣化點、不同腫塊形態(tài)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 CT平掃

圖2 CT增強(qiáng)

表2 不同CT征象患者miR-552表達(dá)水平

2.4 CT征象與miR-552水平相關(guān)性Spearman秩相關(guān)分析顯示，miR-552與微小鈣化點、腫塊形態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 CT征象聯(lián)合miR-552對食管癌診斷結(jié)果

2.5 miR-552和CT征像評估食管癌嚴(yán)重程度的價值CT的ROC曲線下面積AUC為0.781，miR-552為0.701，聯(lián)合檢測為0.890。見圖3、表4。

圖3 ROC曲線

表4 CT、miR-552診斷食管癌的價值 %

3 討論

miRNA在各種癌癥中表現(xiàn)出特定的變化，并且在血清或組織中穩(wěn)定，可作為有效的生物標(biāo)志物用于疾病的診斷和監(jiān)測。miR-552是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA，其在生物過程和疾病中的功能和作用機(jī)制尚不完全清楚[7]。先前的研究發(fā)現(xiàn)，miR-552通過Wnt/β-catenin信號通路直接靶向DACH1來促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞進(jìn)展[8]。此外，miR-552還通過靶向解聚素、金屬蛋白酶增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力[9]。另外，miR-552通過抑制AJAP1表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchy-maltransition, EMT)[10]。然而，miR-552在食管癌中的作用尚不清楚。本研究通過PCR檢測表明，miR-552在食管癌組織中高表達(dá)，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期相關(guān)。通過繪制ROC曲線，發(fā)現(xiàn)miR-552診斷曲線下面積為0.701，靈敏度和特異度分別為65.5%、76.8%。由此推測miR-552可作為食管癌的生物標(biāo)志物，可能具有評估腫瘤進(jìn)展的能力。

CT光譜成像用于區(qū)分食管癌患者的病理變化、食管癌的診斷具有一定的價值[11]。本研究對患者進(jìn)行CT檢查，結(jié)果顯示CT診斷敏感性為70.8%，特異性為57.8%，表明CT可用于鑒別食管癌，但診斷效率不高。對于非典型病變，常規(guī)CT有一定的局限性，而且CT檢查過程中存在間歇性偽影，容易漏掉一些具有診斷意義的快速、短暫的特征變化，造成漏診、誤診。然而，許多研究顯示了血清或組織標(biāo)志物結(jié)合CT診斷的價值，而且不同細(xì)胞因子的異常表達(dá)會導(dǎo)致腫瘤組織圖像表現(xiàn)出不同的差異。本研究中，miR-552水平在微小鈣化點有無、不同腫塊形態(tài)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，這與腫瘤組織增殖、遷移、分化程度密切相關(guān)，也反映了腫瘤指標(biāo)與影像學(xué)相結(jié)合的價值。而且通過miR-552聯(lián)合CT檢測，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合診斷的敏感性、特異性分別為71.9%和92.6%，聯(lián)合診斷的效果明顯。這也提示可以通過聯(lián)合檢測來彌補(bǔ)兩者之間的缺陷，從而獲得更好的診斷價值和更高的特異性，更有利于食管癌的診斷。

總之，食管癌miR-552表達(dá)與CT征像存在一定的相關(guān)性，將miR-552表達(dá)與CT征像相結(jié)合，可準(zhǔn)確判斷食管癌的惡性程度。本研究結(jié)果也顯示，miR-552表達(dá)水平與邊緣有無毛刺差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這可能與樣本過少有關(guān)，還有待進(jìn)一步研究探討。