賈真真，何 雙，李揚(yáng)揚(yáng)，溫菲菲，許曉陽(yáng)，郭寧杰，吳淑華

濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，山東 濱州 256600

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，在中國(guó)惡性腫瘤的發(fā)病率中居第3位［1］。以5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）為基礎(chǔ)的化療方案仍然是治療結(jié)直腸癌的一線方案［2］。但應(yīng)用5-FU作為一線抗癌藥物治療結(jié)直腸癌時(shí)，常因耐藥或不良反應(yīng)導(dǎo)致療效不佳。

DPYD基因編碼的二氫嘧啶脫氫酶（dihydropyrimidine dehydrogenase，DPD）是5-FU代謝的關(guān)鍵酶［3］，可將進(jìn)入體內(nèi)約85%的5-FU分解為無(wú)活性的二氫氟尿嘧啶。DPD蛋白與5-FU的療效密切相關(guān)，其異常表達(dá)可使結(jié)腸癌細(xì)胞獲得耐藥性［4］。因此，降低DPD的表達(dá)量或提高DPD的降解率均有可能成為解決5-FU耐藥問(wèn)題的重要思路。本文通過(guò)應(yīng)用免疫組織化學(xué)法、蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR），檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解重要途徑之一的自噬-溶酶體途徑中關(guān)鍵因子微管相關(guān)蛋白輕鏈3（light chain 3，LC3）和P62的表達(dá)，分析DPD的表達(dá)與LC3、P62的相關(guān)性，探討其臨床意義，為逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌對(duì)5-FU的耐藥性提供新思路。

1 材料和方法

1.1 材料

收集2013—2014年濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科存檔的具有完整隨訪資料的結(jié)直腸癌標(biāo)本157例。納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)2019版世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）消化系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，由兩名資深病理科醫(yī)師采用雙盲法重新閱片診斷為原發(fā)性結(jié)直腸癌。所有病例均為首次手術(shù)治療，術(shù)前均未行任何放化療，術(shù)后均應(yīng)用以5-FU為基礎(chǔ)的FOLFOX方案為一線化療方案。157例結(jié)直腸癌患者中，男性81例，女性76例。年齡36～88歲，平均60.3歲。腫瘤直徑＜5 cm者67例，≥5 cm者90例。分化程度：高分化27例，中分化102例，低分化28例。組織學(xué)類型：管狀腺癌104例，管狀黏液腺癌21例，黏液腺癌32例。浸潤(rùn)深度：黏膜及黏膜下層10例，侵犯肌層24例，侵及或侵透外膜者123例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者121例。每年進(jìn)行電話或門診隨訪，隨訪截至2020年12月或患者死亡，失訪者不予入組。

1.1.2 新鮮標(biāo)本

收集2020年濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科接收的新鮮結(jié)直腸癌標(biāo)本44例，以癌旁正常腸黏膜組織作為對(duì)照，所有組織一部分即時(shí)液氮凍存，一部分置入4%甲醛溶液中固定。

1.1.3 試劑

LC3、P62及DPD抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，羊抗兔/鼠二抗及免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。Western blot所需試劑購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。RTFQ-PCR實(shí)驗(yàn)所需的RNAiso Plus、RT試劑盒及PCR試劑盒均購(gòu)自日本Takara公司，所需特異性引物序列由日本Takara公司合成。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)EnVision法

2.2 傷口評(píng)估 此次手術(shù)為乳腺癌改良根治術(shù)，位于右側(cè)胸部可見(jiàn)一約2.5 cm×9.8 cm的傷口，為中度皮瓣壞死。25%的黃色腐肉;75%的黑色壞死組織，可見(jiàn)黑色縫線外露?；颊咧髟V局部疼痛伴壓痛，有中等量黃色、淡紅色滲液，無(wú)異味。傷口周圍皮膚不整齊、紅腫，皮膚溫度稍高于正常。

將4 μm切片脫蠟至水，用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）（pH＝8.0）修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)，3%H2O2去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，加入一抗4 ℃過(guò)夜，二抗37 ℃溫育30 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明，中性樹(shù)膠封片。用已知LC3＋的胃癌組織、P62＋的宮頸癌組織、DPD＋的肝癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate-buffered saline，PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2 Western blot

將冷凍于-80 ℃冰箱的新鮮組織經(jīng)液氮冷凍研磨破碎后經(jīng)RIPA裂解，應(yīng)用二辛可寧酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。樣品煮沸后進(jìn)行電泳。含有吐溫-20三乙醇胺緩沖鹽溶液（tris-buffered saline Tween，TBST）洗滌10 min×3次，5%的牛奶室溫?fù)u床封閉2 h；一抗4 ℃溫育過(guò)夜；TBST洗滌10 min×3次；二抗室溫溫育2 h；TBST洗滌10 min×3次，電化學(xué)發(fā)光（electrochemical luminescence，ECL）曝光，用Quantity One軟件分析目的蛋白和GAPDH的吸光度（D）值，以目的蛋白與GAPDHD值的比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 RTFQ-PCR檢測(cè)

按照TRIzol試劑盒說(shuō)明書提取組織RNA并檢測(cè)其濃度，在37 ℃ 15 min、85 ℃ 5 s條件下將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR采用SYBR Green相對(duì)定量PCR法，按照試劑盒說(shuō)明書配制25 μL體系反應(yīng)液，在CFX96T RTFQ-PCR Detection System C1000上進(jìn)行擴(kuò)增（表1）。反應(yīng)條件：95 ℃30 s（合計(jì)40個(gè)循環(huán)），95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s。采用ΔΔCt法檢測(cè)，樣品相對(duì)表達(dá)量用2－ΔΔCt表示，ΔΔCt＝結(jié)直腸癌ΔCt-正常結(jié)直腸黏膜組織ΔCt，ΔCt＝目的基因Ct值-GAPDHCt值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。

表1 RTFQ-PCR引物序列Tab.1 RTFQ-PCR primer sequence

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

LC3主要表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中，P62主要表達(dá)于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中，以出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性標(biāo)志。在低倍鏡下觀察10個(gè)獨(dú)立視野，選取5個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多的視野，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果：細(xì)胞無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。將兩項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相乘，≥4分判為陽(yáng)性。所有染色結(jié)果均由兩名高年資病理科醫(yī)師雙盲閱片得出結(jié)論。

DPD主要表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中，在低倍鏡下觀察10個(gè)獨(dú)立視野，選取5個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多的視野，采用Image Pro 6.0軟件進(jìn)行半定量分析，檢測(cè)視野陽(yáng)性區(qū)域的積分光密度（integral optical density，IOD）值，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。運(yùn)用Graph Pad 7.0、ImageJ軟件進(jìn)行圖像和數(shù)據(jù)處理，組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及矯正χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；生存分析采用Kaplan-Meier法，并以log-rank法檢驗(yàn)；采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素生存分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 結(jié)直腸癌與正常黏膜組織中LC3、P62及DPD的表達(dá)

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，LC3及DPD主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，P62表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。157例結(jié)直腸癌患者中，LC3、P62及DPD的陽(yáng)性率分別為50.3%、68.8%及56.7%，其表達(dá)均高于正常黏膜組（P＜0.05，圖1，表2）。

表2 結(jié)直腸癌和正常黏膜中DPD、LC3及P62的表達(dá)Tab.2 The expression of LC3,P62 and DPD in colorectal cancer and normal tissues［n (%)］

圖1 結(jié)直腸癌及正常組織中LC3、P62及DPD的表達(dá)Fig.1 The expression of LC3,P62 and DPD in colorectal cancer and normal tissues

Western blot結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中LC3、P62及DPD的表達(dá)量均高于正常黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2）。

RTFQ-PCR結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中LC3、P62及DPD mRNA的相對(duì)表達(dá)量均高于正常黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2）。

圖2 Western blot及RTFQ-PCR檢測(cè)LC3、P62及DPD在正常黏膜及結(jié)直癌組織中的表達(dá)Fig.2 The expression of LC3,P62 and DPD in colorectal cancer and normal tissues by Western blot and RTFQ-PCR

2.2 結(jié)直腸癌中LC3、P62及DPD表達(dá)的相關(guān)性

根據(jù)DPD的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，將157例結(jié)直腸癌患者分為DPD＋組和DPD-組，分析LC3、P62及DPD蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示，DPD＋組中，P62的表達(dá)高于DPD-組，而LC3的表達(dá)則低于DPD-組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05，表3）。Spearman相關(guān)分析顯示，P62與DPD的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.160），而LC3與DPD的表達(dá)則呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.200），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05)。

表3 結(jié)直腸癌中不同表達(dá)的DPD與LC3、P62的相關(guān)性Tab.3 Correlation of different expressions of DPD with LC3 with P62 and in colorectal cancer(n)

根據(jù)LC3的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，將其分為L(zhǎng)C3+組和LC3-組，分析三者之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，LC3+組中，P62、DPD蛋白的陽(yáng)性率均低于LC3-組。Spearman相關(guān)分析顯示，LC3與P62、DPD的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.202、r＝-0.200），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表4）。

表4 結(jié)直腸癌中不同表達(dá)的LC3與P62、DPD的相關(guān)性Tab.4 Correlation of different expressions of LC3 with P62 and DPD in colorectal cancer(n)

2.3 結(jié)直腸癌中P62與LC3不同表達(dá)分組中DPD的表達(dá)情況

根據(jù)P 6 2 與L C 3 的免疫組織化學(xué)表達(dá)，將157例病例分為4組，即P62+/LC3+、P62+/LC3-、P62-/LC3+和P62-/LC3-組。結(jié)果顯示，P62-/LC3-組的DPD蛋白表達(dá)量明顯高于其他3組，而P62-/LC3+組的DPD蛋白表達(dá)則低于其他3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P62+/LC3-組與P62+/LC3+組的DPD蛋白表達(dá)量雖有不同，但其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但兩組DPD的蛋白表達(dá)量均低于P62-/LC3-組，且高于P62-/LC3+組（P＜0.05，表5，圖3）。

圖3 Western blot檢測(cè)LC3、P62不同分組中DPD的表達(dá)Fig.3 Expression of DPD in different groups of p62 and LC3 by Western blot

表5 結(jié)直腸癌中P62與LC3不同分組中DPD的表達(dá)情況Tab.5 Expression of DPD in different groups of P62 and LC3 in colorectal cancer［n (%)］

2.4 結(jié)直腸癌中LC3、P62、DPD的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性

結(jié)直腸癌中P62蛋白表達(dá)與T分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，LC3蛋白表達(dá)與腫瘤直徑及T分期呈正相關(guān)，DPD在黏液腺癌及伴有黏液腺癌成分的管狀腺癌中的表達(dá)明顯高于管狀腺癌，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05，表6）。

表6 LC3、P62及DPD的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性Tab.6 Correlation between the expression of LC3,P62 and DPD and clinicopathological features in colorectal cancer(n)

2.5 生存分析

157例結(jié)直腸癌患者的中位生存期為62.4個(gè)月，平均5年生存率為59.3%。Kaplan-Meier法分析顯示，P62、DPD、LC3及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后密切相關(guān)（P＜0.05，圖4）。COX回歸模型顯示，DPD、LC3、P62及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05，表7）。

表7 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后多因素生存分析Tab.7 Multivariate analysis of prognosis in patients with colorectal cancer

圖4 結(jié)直腸癌預(yù)后生存曲線Fig.4 Survival curve of colorectal cancer

3 討 論

結(jié)直腸癌的治療以手術(shù)切除為主，對(duì)于中晚期患者，以5-FU為基礎(chǔ)的化療方案仍是術(shù)后及失去手術(shù)機(jī)會(huì)的結(jié)直腸癌患者最常用的治療方案，而腫瘤對(duì)化療藥物的耐受性常導(dǎo)致療效欠佳。有研究［5］表明，5-FU代謝酶DPD異常與患者對(duì)5-FU的化療耐受有關(guān)。

DPD是5-FU代謝的關(guān)鍵限速酶，其可將近85%的5-FU分解為二氫氟尿嘧啶，進(jìn)而生成無(wú)藥物活性的F-β-丙氨酸由尿液排出。只有少量的5-FU進(jìn)入合成代謝，參與DNA及RNA合成，發(fā)揮藥理作用［6-7］。研究［8-9］表明，DPD作為5-FU代謝的關(guān)鍵酶，其高表達(dá)可加速5-FU的分解代謝，降低藥物濃度，從而影響藥物療效。在有關(guān)結(jié)直腸癌、頭頸部鱗癌的體外研究［10-12］中發(fā)現(xiàn)，DPD的表達(dá)異常增高可降低5-FU的化療敏感性。本研究結(jié)果表明，結(jié)直腸癌臨床樣本中DPD蛋白及mRNA的表達(dá)均高于正常黏膜組，且與組織學(xué)類型及患者生存密切相關(guān)。為進(jìn)一步研究DPD表達(dá)與5-FU療效的關(guān)系，本研究選取了術(shù)后應(yīng)用以5-FU為基礎(chǔ)的FOLFOX治療方案的病例，結(jié)果顯示，患者的預(yù)后與DPD的表達(dá)存在相關(guān)性。結(jié)直腸癌中DPD的異常表達(dá)在一程度上影響患者術(shù)后應(yīng)用5-FU的療效。結(jié)合本課題組前期研究［13］結(jié)果，我們認(rèn)為，結(jié)直腸癌中存在DPD調(diào)控異常，致使蛋白水平異常升高，導(dǎo)致腫瘤對(duì)5-FU不敏感，從而影響患者的生存預(yù)期。因此，降低DPD表達(dá)，進(jìn)而提高5-FU療效，有可能成為逆轉(zhuǎn)耐藥的新思路。

蛋白質(zhì)代謝降解是蛋白表達(dá)水平調(diào)控的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝主要通過(guò)3個(gè)途徑，即自噬-溶酶體途徑、泛素-蛋白酶體途徑和細(xì)胞凋亡途徑，其中自噬-溶酶體途徑是細(xì)胞降解內(nèi)源性底物的重要途徑，可降解自身受損的細(xì)胞器和大分子蛋白質(zhì)［14］。有研究［15］證實(shí)，自噬-溶酶體降解蛋白質(zhì)途徑的異常與多種疾病密切相關(guān)。Moors等［16］研究表明，抑制自噬可使α-突觸核蛋白異常堆積，進(jìn)而引起帕金森病的發(fā)生。Li等［17］研究發(fā)現(xiàn)，在阿爾茲海默病中磷酸化和異常的Tau蛋白可通過(guò)自噬-溶酶體途徑降解。近年來(lái)，自噬與腫瘤耐藥的相關(guān)性受到關(guān)注。Li等［18］對(duì)人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，抑制自噬可以促使腫瘤細(xì)胞獲得對(duì)阿糖胞苷的耐藥性，而誘導(dǎo)自噬則可激活耐藥細(xì)胞中的凋亡信號(hào)通路，從而逆轉(zhuǎn)耐藥。有研究［19-20］表明，5-FU耐藥細(xì)胞中存在自噬水平的異常降低，激活自噬可以提高5-FU對(duì)HCT-116細(xì)胞的殺傷作用。LC3是自噬體膜上的標(biāo)志蛋白，是自噬體形成的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，LC3在結(jié)直腸癌中表達(dá)升高，并且LC3+組中DPD的陽(yáng)性率明顯低于LC3-組，兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。我們推測(cè)自噬-溶酶體途徑可能參與DPD蛋白的降解過(guò)程，從而影響其蛋白表達(dá)水平，進(jìn)而影響腫瘤耐藥性。自噬水平的降低可能導(dǎo)致DPD降解的減少，使其蛋白水平升高，導(dǎo)致耐藥的發(fā)生。

自噬-溶酶體途徑的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是自噬體與溶酶體結(jié)合，形成自噬-溶酶體，進(jìn)而降解蛋白質(zhì)，完成自噬-溶酶體降解蛋白質(zhì)的全過(guò)程［21］。近年來(lái)研究［22］發(fā)現(xiàn)，P62/SQSTM1與自噬-溶酶體途徑密切相關(guān)，是自噬體與溶酶體結(jié)合過(guò)程中的關(guān)鍵分子。P62是一種應(yīng)激誘導(dǎo)的多功能蛋白質(zhì)，具有N端Phox-BEM1結(jié)構(gòu)域、ZZ型鋅指結(jié)構(gòu)域、核定位信號(hào)、輸出基序、LC3相互作用區(qū)、Keap1相互作用區(qū)和C端泛素相關(guān)結(jié)構(gòu)域等多個(gè)結(jié)構(gòu)域［23］。其中P62通過(guò)LC3相互作用區(qū)結(jié)構(gòu)域參與自噬-溶酶體形成，將多泛素化的底物傳遞給自噬體，完成自噬-溶酶體途徑降解蛋白質(zhì)的全過(guò)程。因此，P62被認(rèn)為是自噬降解途徑中的一個(gè)重要因子。當(dāng)選擇性自噬的底物堆積時(shí)，自噬水平增高，自噬-溶酶體途徑激活，P62作為載體蛋白則會(huì)與底物一同被自噬-溶酶體降解而導(dǎo)致其蛋白水平降低［21］。

最近研究［24］表明，P62與腫瘤耐藥密切相關(guān)，抑制P62可以使對(duì)順鉑耐藥的頭頸部鱗癌細(xì)胞重新獲得對(duì)藥物的敏感性。在結(jié)直腸癌細(xì)胞的研究［25］中發(fā)現(xiàn)，P62升高可以減弱5-FU藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，P62+組中DPD表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于P62-組，并且與患者預(yù)后有關(guān)，提示P62可能影響結(jié)直腸癌中DPD的表達(dá)，進(jìn)而影響化療效果及預(yù)后。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，盡管LC3與P62呈負(fù)相關(guān)，但兩者與DPD的關(guān)系卻具有特殊性。當(dāng)P62-/LC3-時(shí)，DPD表達(dá)顯著高于其他3組，而當(dāng)P62-/LC3+時(shí)，DPD表達(dá)則顯著低于其他3組。由此可見(jiàn)，盡管LC3與P62共同參與影響DPD的表達(dá)水平，但只有腫瘤中LC3激活且同時(shí)伴有P62降低時(shí)，才可導(dǎo)致DPD的表達(dá)顯著降低。我們推測(cè)LC3升高伴P62降低時(shí)，提示腫瘤中有自噬-溶酶體途徑的激活，參與DPD蛋白降解，使DPD表達(dá)水平降低。若僅有LC3升高，只在一定程度上表明細(xì)胞內(nèi)自噬體的增加，并不表示自噬-溶酶體途徑的激活，因而不能完成對(duì)DPD的降解。只有當(dāng)作為自噬轉(zhuǎn)運(yùn)底物蛋白的P62被消耗時(shí)，才可表明自噬-溶酶體降解蛋白質(zhì)的途徑被激活，進(jìn)而降解目的蛋白。然而，本研究中另兩組P62+/LC3-組與P62+/LC3+組中DPD蛋白表達(dá)量均低于P62-/LC3-組，而高于P62-/LC3+組，但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示P62是影響DPD表達(dá)的重要分子，其不僅可通過(guò)參與自噬影響DPD表達(dá)，同時(shí)可能通過(guò)非自噬途徑影響DPD表達(dá)，但前者的調(diào)控優(yōu)勢(shì)要明顯強(qiáng)于后者。因此，自噬-溶酶體途徑的激活有可能成為影響DPD表達(dá)的重要途徑，但其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，自噬是細(xì)胞降解內(nèi)源性底物的重要途徑，P62作為應(yīng)激誘導(dǎo)的多功能蛋白，因其具有復(fù)雜的多功能結(jié)構(gòu)域，可參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的多個(gè)途徑。本研究?jī)H對(duì)LC3與P62組成的自噬-溶酶體途徑與DPD表達(dá)進(jìn)行了初步探討。鑒于P62復(fù)雜的多功能結(jié)構(gòu)域，其是否能通過(guò)其他結(jié)構(gòu)域（如C端泛素相關(guān)結(jié)構(gòu)域）參與影響5-FU耐藥相關(guān)因子DPD表達(dá)尚需進(jìn)一步探究?？傊?，自噬-溶酶體途徑可能作為DPD的有效降解途徑，參與DPD代謝，糾正DPD的異常表達(dá)有可能成為逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌耐藥的新途徑。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。