王曉寧，程 野，鐘 靖，李凌波

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 輸血科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.青島市市立醫(yī)院 輸血科；3.邵陽(yáng)市中心醫(yī)院 輸血科；4.長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司)

血型抗原是位于紅細(xì)胞膜上的多態(tài)性抗原，在妊娠期間[胎兒和新生兒溶血性疾病(HDFN)]或輸血后[溶血性輸血反應(yīng)(HTRs)]，個(gè)體極有可能誘發(fā)免疫反應(yīng)。個(gè)體發(fā)生同種異體免疫反應(yīng)的概率取決于人群中抗原的發(fā)生率(已知不同人群和種族群體之間存在差異)[1]，也取決于其免疫原性和患者的免疫狀態(tài)[2]。輸血前檢測(cè)，最重要的血型系統(tǒng)是ABO和RhD。輸入具有除D抗原外未知Rh表型的ABO同型血可能會(huì)導(dǎo)致同種免疫，特別是對(duì)于多次輸血的病人[3]。因此，了解臨床待輸血患者中紅細(xì)胞Rh抗原表型分布有助于我們?cè)u(píng)估這些表型的頻率，從而建立一個(gè)紅細(xì)胞抗原的供體數(shù)據(jù)庫(kù)。此外，立即為免疫病人提供抗原陰性血液，以及預(yù)防多次輸血病人出現(xiàn)同種免疫也是有益的。本研究分析了431839例臨床樣本Rh(D，C，E，c，e)血型分型檢測(cè)結(jié)果，并探討輸血前進(jìn)行Rh(D，C，E，c，e)血型分型的重要性及微柱凝膠免疫分析技術(shù)在Rh血型抗原檢測(cè)中的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源臨床醫(yī)院需要輸血的手術(shù)患者、非手術(shù)患者、孕婦、部分新生兒血液標(biāo)本共431839例，其中男231652例，女200187例，年齡0天-91歲。

1.2 試劑與儀器Rh血型抗原檢測(cè)卡(單克隆抗體)，長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，每卡6孔。TD-3A型血型血清學(xué)用離心機(jī)，由長(zhǎng)春博研醫(yī)學(xué)生物儀器公司生產(chǎn)。

1.3 方法采集被檢對(duì)象靜脈血，加入含EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的試管中。將采集的標(biāo)本配制成0.8%紅細(xì)胞生理鹽水懸液。將Rh血型抗原檢測(cè)卡(單克隆抗體)做標(biāo)記，將待檢者0.8%紅細(xì)胞懸液分別加入第1- 6支微管中(第1-5支微管分別含有IgM單克隆抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗體，第6支微管為中性膠做陰性對(duì)照)，每管50 μl。使用專用離心機(jī)離心5 min，900 rpm 2 min，1 500 rpm 3 min，取出，根據(jù)試劑說明書，判定結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法Rh血型表現(xiàn)型依照AABB 19版表達(dá)方式；抗原頻率計(jì)算為該抗原陽(yáng)性例數(shù)與統(tǒng)計(jì)總例數(shù)之比。

2 結(jié)果

2.1 樣本Rh血型系統(tǒng)5種主要抗原檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用微柱凝膠Rh血型抗原檢測(cè)卡對(duì)431839例臨床樣本進(jìn)行Rh血型系統(tǒng)5種主要抗原的檢測(cè)，測(cè)得Rh(D)陽(yáng)性428298例(99.18%)，陰性3541例(0.82%)。在Rh(D)陽(yáng)性中，測(cè)得Rh血型抗原表現(xiàn)型共10種，結(jié)果見表1。

表1 428298例Rh(D)陽(yáng)性患者血型表型分布

2.2 Rh(D)陽(yáng)性樣本C、c、E、e抗原分布及百分率428298例Rh(D)陽(yáng)性患者C、c、E、e抗原分布見表2?；颊?種抗原(C、c、E、e)陽(yáng)性所占百分率由高到低依次為e>C>c>E。

表2 428298例Rh(D)陽(yáng)性患者C、c、E、e抗原分布及與國(guó)內(nèi)報(bào)道[4]數(shù)據(jù)比較

3 討論

Rh血型系統(tǒng)的ISBT的命名是RH，系統(tǒng)編號(hào)004，目前確認(rèn)系統(tǒng)抗原55個(gè)(http://www.isbtweb.org/fileadmin/user_upload/Table_of_blood_group_antigens_within_systems_v9.0_03-FEB-2021.pdf)。RH抗原的基因位點(diǎn)在1號(hào)染色體短臂3區(qū)6帶(1p36.11)，由兩個(gè)獨(dú)立的基因構(gòu)成：RHD/RHCE[5]。RHD基因與RHCE基因高度同源，高度相似，二者都是從RHAG(030血型系統(tǒng))基因突變進(jìn)化而來，在漫長(zhǎng)時(shí)間的生物進(jìn)化過程中，RHAG基因先形成RHCE基因，然后再形成RHD基因，RHD基因與RHCE基因的核苷酸有約98.6%相同[6]。不同的RHD/CE基因在不同人群中的分布不一致，而且基因突變的情況也不一樣。所以，RH系統(tǒng)的各個(gè)抗原在各人群中表達(dá)也不一樣，一般情況是：D基因的頻率依次為：黃種人>黑種人>白種人；C基因的頻率依次為：黃種人>白種人>黑種人；E基因的頻率依次為：黃種人>白種人>黑種人，CDe單倍型頻率依次為：黃種人>白種人>黑種人；cDE單倍型頻率依次為：黃種人>白種人>黑種人；CDE單倍型頻率依次為：黃種人>白種人>黑種人；cde單倍型頻率依次為：白種人>黑種人>黃種人[7]。在中國(guó)人中，以CDe單倍型頻率最高，單基因頻率為C>c，e>E[8]。在人類學(xué)上，中國(guó)人屬于蒙古人種，在蒙古人種中的調(diào)查，無論南方蒙古人種，還是北方蒙古人種，RHD/CE基因分布沒有太大差異。

常見的Rh抗原為:D、C、c、E、e最初是按字母順序?qū)懙?如CDE)，后來，當(dāng)發(fā)現(xiàn)C抗原和E抗原是整體遺傳時(shí)，已更改為DCE[6]。5 種抗原的抗原性強(qiáng)弱依次為D>E>C>c>e，因此，臨床上一次隨機(jī)輸血產(chǎn)生抗-E 的機(jī)會(huì)要比抗D大，多次輸血的患者易產(chǎn)生抗-E，而導(dǎo)致溶血。因?yàn)镽h血型系統(tǒng)的抗原抗體復(fù)雜性，及引起的溶血性輸血反應(yīng)和HDN，輸血時(shí)要做好Rh血型分型，做到同型相輸，避免免疫性抗體產(chǎn)生而造成不良輸血反應(yīng)。本研究檢測(cè)了431839例臨床樣本Rh(D，C，E，c，e)血型抗原檢測(cè)結(jié)果，431839例患者共檢出Rh(D)陽(yáng)性428298例(99.18%)，陰性3541例(0.82%)。在Rh(D)陽(yáng)性中，Rh血型抗原表現(xiàn)型分布由高到低DCe(178541例)>DCcEe(154113例)>DCce(38816例)>DcE(35478例)>DcEe(16067例)>DCEe(2820例)>Dce(1525例)>DCcE(914例)>DCE(22例)>D----(2例)，C、c、E、e抗原頻率分別為87.61%、57.65%、48.89%、91.50%，Rh(D)陽(yáng)性患者C、c、E、e抗原分布及與國(guó)內(nèi)報(bào)道數(shù)據(jù)接近[4]。鑒于Rh系統(tǒng)的5種主要抗原均具有很強(qiáng)的免疫原性，在臨床上均可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)等疾病，因此，同預(yù)防抗-D一樣，可考慮輸血前對(duì)患者和獻(xiàn)血者常規(guī)檢測(cè)Rh系統(tǒng)其他主要抗原，對(duì)二者Rh血型抗原準(zhǔn)確分型，甚至建立一個(gè)紅細(xì)胞抗原的供者數(shù)據(jù)庫(kù)，以實(shí)現(xiàn)ABO、Rh系統(tǒng)的相容性輸血，由此也可以避免臨床實(shí)踐中因?yàn)镽h系統(tǒng)抗原不明引起的反復(fù)交叉配血不合造成的貽誤輸血時(shí)機(jī)，及時(shí)挽救患者生命。

微柱凝膠試驗(yàn)作為一種新型免疫學(xué)檢測(cè)方法，近年來隨著該技術(shù)的發(fā)展其在輸血領(lǐng)域應(yīng)用的范圍不斷擴(kuò)大。此技術(shù)的本質(zhì)是血凝試驗(yàn)，即將分子排阻層析原理應(yīng)用于血型血清學(xué)檢測(cè)，利用凝膠分子篩的濾過作用使紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的免疫凝集反應(yīng)。該方法結(jié)果清楚、易于判斷且保存時(shí)間長(zhǎng)，目前在檢測(cè)致敏紅細(xì)胞、交叉配血、血型鑒定和檢測(cè)不規(guī)則抗體等方面已相繼得到臨床廣泛應(yīng)用[9]，其操作規(guī)范、簡(jiǎn)單快捷，檢測(cè)不完全抗體省去了洗滌步驟，有效避免了人為誤差。隨著微柱凝膠試驗(yàn)檢測(cè)Rh血型抗原技術(shù)的日臻成熟，國(guó)內(nèi)亦有將利用此技術(shù)的國(guó)產(chǎn)檢測(cè)卡應(yīng)用于臨床試驗(yàn)并取得了滿意度較高的檢測(cè)結(jié)果[10]。本研究應(yīng)用微柱凝膠免疫分析技術(shù)對(duì)431839例待輸血患者進(jìn)行Rh血型系統(tǒng)5種主要抗原的檢測(cè)，將所得數(shù)據(jù)與國(guó)內(nèi)報(bào)道相比較得出了較一致的結(jié)論，說明該技術(shù)反應(yīng)穩(wěn)定、特異性較好，為臨床常規(guī)檢測(cè)Rh血型抗原以保證輸血安全提供了簡(jiǎn)單易行的方法。