趙丹鵬，楊碩，劉喜燦，卜淑芳

(鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院 神經內科，河南 鄭州 450000)

急性腦梗死(acute cerebral infarction，ACI)是急性發(fā)生的大腦動脈系統(tǒng)梗塞，栓塞或血栓造成缺血性表現(xiàn)，大腦血液供應受阻使腦細胞功能發(fā)生損傷[1-2]。ACI會激活顱內免疫應答，大量釋放炎癥因子，增加血腦屏障的通透性，炎癥因子進入腦實質后加重腦細胞功能損傷[3]。脾臟受到病理刺激后釋放大量炎癥因子和免疫細胞，導致自身體積縮小，且其釋放的血小板活性更高，嚴重影響患者預后[4]。切除脾臟可降低炎癥因子及體循環(huán)中淋巴細胞數(shù)量，阻斷T淋巴因子向腦內傳遞，保護大腦[4]。動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，腦內缺血后脾臟會釋放炎癥因子和免疫細胞進入外周循環(huán)系統(tǒng)，同時脾臟體積縮小[5]。本研究通過觀察ACI患者脾臟體積變化及與炎癥因子和淋巴細胞水平的相關性，以期為ACI的臨床治療提供免疫學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年1月至2020年3月于鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院神經內科接受治療的194例ACI患者作為研究組。(1)納入標準：①經MRI或CT檢查后，符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》[6]中關于ACI的相關診斷標準；②年齡18～80歲；③美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institutes of Health stroke scale，NIHSS)評分>5分；④發(fā)病24 h內入院；⑤發(fā)生ACI前服用阿司匹林1周以上。(2)排除標準[7]：①自身免疫性疾病；②長期服用免疫抑制劑；③伴急性心肌梗死或癲癇；④伴心、肺、腹部嚴重疾病；⑤惡性腫瘤或血液疾??；⑥低氧血癥；⑦精神疾病或認知障礙；⑧處于妊娠期或哺乳期；⑨中途退出研究。另選取同期于鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院體檢、基本資料匹配的120例非ACI患者作為對照組，年齡18～80歲，存在2項以上腦血管風險因素，入院前服用阿司匹林。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批。入組人員均簽署研究知情同意書。對照組：男69例，女51例；年齡62～85(77.63±3.24)歲；既往存在高血壓88例，糖尿病51例，高脂血癥63例，腦卒中66例；穿支動脈型腦梗死36例，大動脈粥樣硬化性腦梗死59例，心源性腦梗死25例。研究組：男103例，女91例；年齡63～84(77.42±3.13)歲；既往存在高血壓144例，糖尿病76例，高脂血癥95例，腦卒中102例；穿支動脈型腦梗死54例，大動脈粥樣硬化性腦梗死101例，心源性腦梗死39例。兩組性別、年齡、既往疾病類型、腦梗死類型比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 檢測方法

1.2.1脾臟體積 參照Yang等[8]研究中的方法測量脾臟體積。采用Philips彩超診斷儀進行測量，探頭條件為Abdomen，頻率2～5 MHz。檢測對象需空腹，取右側臥體位。探頭與肋間隙平行，調整圖像至厚度最大切面，測量脾臟厚度及長度，轉動探頭與肋間隙垂直測量寬度，脾臟體積計算公式為：

V=a×b×c×π/6。

式中V代表脾臟體積，a代表脾臟長度，b代表脾臟厚度，c代表脾臟寬度。

采用同樣的方法檢測對照組脾臟體積，確定脾臟體積的基線值。分別于ACI患者發(fā)病24 h內以及發(fā)病2、3、5 d測量脾臟體積。由2名超聲科資深醫(yī)生共同完成圖像檢測。

1.2.2炎癥因子 采集研究對象的空腹靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測對照組和研究組發(fā)病后24 h內和發(fā)病2、3、5 d的血清干擾素-γ水平。試劑盒由上海晶抗生物工程有限公司提供，檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.3淋巴細胞 采用流式細胞儀檢測對照組和研究組發(fā)病后24 h內和發(fā)病2、3、5 d的淋巴細胞。取入組人員清晨空腹肘靜脈血3 mL，置樣管中搖勻，取100 μL抗凝血加入樣管混勻，分別加入抗體(熒光素標記)20 μL，同時做陰性對照，在避光室培養(yǎng)20 min后加入稀釋10倍的破紅細胞低滲液，離心后棄去上清液，經PBS清洗后懸浮其中，檢測淋巴細胞(CD3+、CD4+、CD8+)水平。抗CD3+單克隆抗體標志物為異硫氰酸熒光素，抗CD4+單克隆抗體標志物為藻紅蛋白，抗CD8+單克隆抗體標志物為葉綠素蛋白。

2 結果

2.1 脾臟體積對照組脾臟體積為(119.76±8.15)cm3；研究組發(fā)病后24 h內和發(fā)病2、3、5 d的脾臟體積分別為(116.82±7.83)、(114.64±7.23)、(125.38±8.61)、(127.91±9.86)cm3。研究組不同時間點脾臟體積比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。研究組脾臟體積先縮小后增大，發(fā)病24 h內和2 d脾臟體積縮小，發(fā)病3 d和5 d脾臟體積增大。研究組發(fā)病24 h、2 d的脾臟體積小于對照組，發(fā)病3 d和5 d的脾臟體積大于對照組(P<0.05)。

2.2 炎癥因子及淋巴細胞水平研究組不同時間點干擾素-γ、CD3+淋巴細胞、CD4+淋巴細胞、CD8+淋巴細胞水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；研究組不同時間點干擾素-γ、CD3+淋巴細胞、CD4+淋巴細胞、CD8+淋巴細胞水平均高于對照組，發(fā)病2 d時干擾素-γ、CD3+淋巴細胞、CD4+淋巴細胞、CD8+淋巴細胞水平最高(P<0.05)。見表1。

2.3 研究組患者炎癥因子和淋巴細胞水平與脾臟體積的相關性研究組患者在發(fā)病24 h內和發(fā)病2、3、5 d時CD8+淋巴細胞水平與脾臟體積無關(P>0.05)；研究組患者在發(fā)病24 h內和發(fā)病2、3、5 d時CD3+淋巴細胞、CD4+淋巴細胞及干擾素-γ水平與脾臟體積呈負相關(P<0.05)。見表2。

表1 兩組各時間點炎癥因子水平及淋巴細胞水平比較

表2 研究組不同時間點炎癥因子和淋巴細胞水平與 脾臟體積的相關系數(shù)(r)

3 討論

王月娟[9]研究表明，腦缺血損傷的加重與自身免疫反應和炎癥反應相關，這在動物實驗中已得到證實，但臨床數(shù)據(jù)比較匱乏，病理學機制尚未被完全闡明。脾臟是重要的免疫器官，含大量淋巴細胞，未成熟的淋巴細胞被抗原激活后離開脾臟進入體循環(huán)中，T細胞在人體的免疫過程中占主要部分[10]。本研究結果顯示，ACI患者脾臟體積先縮小后增大，發(fā)病后不同時間點外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴細胞水平及干擾素-γ水平明顯升高，與劉潔等[11]報道一致。這表明ACI患者發(fā)病后脾臟體積增大，會釋放大量淋巴細胞及炎癥因子，加重病情。既往研究采用大腦動脈閉塞構建卒中模型，發(fā)現(xiàn)循環(huán)中被標記的脾臟細胞增多，脾臟體積增大，經過分析認為是激活了脾臟的α1腎上腺素受體后平滑肌受刺激所致[12-13]。

在本研究中，干擾素-γ水平先升高再降低，但總體水平高于對照組，干擾素-γ水平與脾臟體積呈負相關。脾臟可能通過產生干擾素-γ等炎癥因子參與腦損傷過程，加重患者病情，但具體機制仍需進行深入研究[14]。腦缺血后適應性免疫和機體固有免疫吸引淋巴細胞進入顱內，這些淋巴細胞透過血腦屏障進入腦實質后會促進炎癥反應，改變細胞興奮性，對神經細胞造成直接損傷，加重ACI患者的病情[13,15]。本研究僅選取4個時間點進行檢測，數(shù)據(jù)缺乏連續(xù)性。因無法測量患者發(fā)病前脾臟體積，選取對照組測量值作為參考，會存在一定偏差。本研究優(yōu)點是具有前瞻性，樣本量較大，數(shù)據(jù)可信度較高，有一定參考意義。ACI患者在溶栓時間窗可應用免疫抑制劑緩解ACI后的出血狀況，改善預后，機制為免疫抑制劑抑制了淋巴結釋放淋巴細胞，減輕免疫損傷[16]。

通過ACI患者發(fā)病后的脾臟體積、炎癥因子及淋巴細胞水平變化初步闡述脾臟在免疫反應中的作用機制，這可能成為臨床治療ACI新的免疫學目標靶點。