曹男

（遼寧省人民醫(yī)院消化內(nèi)二科，遼寧 沈陽 110016）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一類累及結(jié)直腸的非特異性炎癥性疾病，具有反復(fù)發(fā)作、遷延不愈等特點(diǎn)，炎癥反應(yīng)激活、免疫應(yīng)答紊亂與UC 的發(fā)病密切相關(guān)，但具體的發(fā)病機(jī)制尚不明確[1]。維生素D是在體內(nèi)廣泛存在的一類水溶性維生素，不僅參與鈣磷代謝的調(diào)控，還在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。自身免疫性疾病的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，維生素D 水平降低與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病有關(guān)[2]。UC 相關(guān)的研究發(fā)現(xiàn)，UC 腸黏膜內(nèi)維生素D 受體的表達(dá)減少[3]，UC患者血清中維生素D 水平減少與疾病活動(dòng)有關(guān)[4]。但維生素D 在UC 發(fā)病及病情發(fā)展中是否與腸道炎癥反應(yīng)、治療預(yù)后有關(guān)尚不明確。基于此，本研究旨在探究潰瘍性結(jié)腸炎患者血清維生素D 水平與炎癥反應(yīng)及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2016 年 5 月至 2020 年 5 月本院收治的132 例UC 患者作為UC 組。其中，男78例，女54例；年齡38～61歲，平均（49.39±10.12）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見（2012年·廣州）》[5]中活動(dòng)期UC的診斷標(biāo)準(zhǔn)；首次診斷為UC且病情處于活動(dòng)期；臨床資料完整；簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并阿米巴性結(jié)腸炎、細(xì)菌性痢疾等消化系統(tǒng)疾病；合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病、骨代謝性疾??；正在使用激素或免疫抑制劑。另選取同期于本院體檢的100名健康志愿者作為對(duì)照組，其中男58名，女42名；年齡35～55歲，平均（46.37±9.29）歲。兩組臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 血清維生素D水平檢測(cè) 取兩組空腹外周靜脈血，靜置0.5 h凝血后，3 000 r/min離心10 min，分離血清后采用試劑盒檢測(cè)維生素D 水平，評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：維生素 D 含量≥30 ng/ml 為正常，20～29 ng/ml為不足，＜20 ng/ml為缺乏。

1.2.2 腸黏膜細(xì)胞基因表達(dá)水平檢測(cè) 取UC組內(nèi)鏡活檢獲取的腸黏膜組織，采用RIPA裂解液提取組織中的蛋白，采用BCA 試劑盒測(cè)定蛋白含量，將含有 30 μg 的蛋白樣本用于 Western Blot 檢測(cè)，電泳、電轉(zhuǎn)PVDF 膜、5%脫脂牛奶室溫封閉1 h 后4 ℃孵育 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 β-actin 的一抗過夜。次日，室溫孵育二抗1 h，最后在凝膠成像儀中顯影得到蛋白條帶，根據(jù)條帶的灰度值、以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算NF-κB、TNF-α、ICAM-1的表達(dá)水平。

1.3 病情及預(yù)后評(píng)估 根據(jù)Mayo 評(píng)分評(píng)估病情，Mayo評(píng)分包括大便頻率、直腸出血、腸黏膜內(nèi)鏡活檢、疾病活動(dòng)性4 個(gè)項(xiàng)目，每項(xiàng)評(píng)分0～3 分，Mayo評(píng)分 3～5 分為輕度，6～10 分為中度，11～12 分為重度。根據(jù)治療1 個(gè)月后內(nèi)鏡檢查結(jié)果評(píng)估預(yù)后，包括腸黏膜愈合和未愈合。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，行t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，維生素D預(yù)測(cè)預(yù)后采用ROC曲線分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清維生素D水平比較 UC組血清中維生素D 水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組血清維生素D水平比較（，ng/ml）Table 1 Comparison of serum vitamin D levels between the two groups(,ng/ml)

表1 兩組血清維生素D水平比較（，ng/ml）Table 1 Comparison of serum vitamin D levels between the two groups(,ng/ml)

組別UC組對(duì)照組t值P值例數(shù)132 100維生素D 26.17±7.03 33.94±8.38 7.671 0.000

2.2 UC組不同病情患者血清維生素D水平及腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)比較 UC組中不同病情程度患者血清維生素D 水平及腸黏膜內(nèi)NF-κB、TNF-α、ICAM-1 表達(dá)水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且隨著UC病情加重，血清維生素D水平呈降低趨勢(shì)，腸黏膜內(nèi)NF-κB、TNF-α、ICAM-1的表達(dá)水平均呈上升趨勢(shì)（P＜0.05），見表2。

表2 UC組不同病情程度患者的血清維生素D水平及腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)比較（，ng/ml）Table 2 Comparison of serum vitamin D level and inflammatory gene expression in intestinal mucosa among patients with different disease degrees in UC group(x±s,ng/ml)

表2 UC組不同病情程度患者的血清維生素D水平及腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)比較（，ng/ml）Table 2 Comparison of serum vitamin D level and inflammatory gene expression in intestinal mucosa among patients with different disease degrees in UC group(x±s,ng/ml)

注：NF-κB，核轉(zhuǎn)錄因子κB；TNF-α，腫瘤壞死因子-α；ICAM-1，細(xì)胞間黏附分子-1。與輕度UC患者比較，aP＜0.05；與中度UC患者比較，bP＜0.05

ICAM-1 0.47±0.09 0.83±0.18a 1.51±0.32ab病情程度輕度中度重度例數(shù)52 57 23維生素D 31.73±8.41 27.04±7.67a 23.18±6.9ab NF-κB 0.63±0.14 0.93±0.19a 1.75±0.30ab TNF-α 0.54±0.08 0.79±0.16a 1.45±0.25ab

2.3 UC組中不同維生素D水平患者腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)比較 UC組中不同維生素D水平患者腸黏膜內(nèi) NF-κB、TNF-α、ICAM-1 表達(dá)水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且隨著維生素D水平降低，腸黏膜內(nèi)NF-κB、TNF-α、ICAM-1的表達(dá)水平均呈上升趨勢(shì)（P＜0.05），見表3。

表3 UC組中不同維生素D水平患者腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)比較（）Table 3 Comparison of inflammatory gene expression in intestinal mucosa among patients with different vitamin D levels in UC group()

表3 UC組中不同維生素D水平患者腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)比較（）Table 3 Comparison of inflammatory gene expression in intestinal mucosa among patients with different vitamin D levels in UC group()

注：NF-κB，核轉(zhuǎn)錄因子κB；TNF-α，腫瘤壞死因子-α；ICAM-1，細(xì)胞間黏附分子-1。與維生素D正?；颊弑容^，aP＜0.05；與維生素D缺乏患者比較，bP＜0.05

ICAM-1 0.42±0.08 0.81±0.19a 1.60±0.35ab維生素D水平維生素D正常維生素D不足維生素D缺乏例數(shù)49 56 27 NF-κB 0.59±0.12 0.97±0.20a 1.80±0.32ab TNF-α 0.57±0.09 0.84±0.19a 1.40±0.24ab

2.4 UC 組中不同維生素D 水平患者預(yù)后比較UC 組中不同維生素D 水平患者治療1 個(gè)月后腸黏膜愈合率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且隨著維生素D 水平降低，治療1 個(gè)月后腸黏膜愈合率呈降低趨勢(shì)（P＜0.05），見表4。

表4 UC組中不同維生素D水平患者預(yù)后比較[n（%）]Table 4 Comparison of prognosis among patients with different vitamin D levels in UC group[n(%)]

2.5 血清維生素D 預(yù)測(cè)UC 患者預(yù)后的ROC 曲線分析 血清維生素D預(yù)測(cè)UC患者預(yù)后的ROC曲線下 面 積 為 0.8538（95%CI：0.7894～0.9183，P=0.000），見圖1。

圖1 血清維生素D預(yù)測(cè)UC患者預(yù)后的ROC曲線Figure 1 ROC curve of serum vitamin D in predicting prognosis of patients with UC

3 討論

UC 發(fā)病與腸黏膜內(nèi)免疫應(yīng)答紊亂、炎癥反應(yīng)激活等密切相關(guān)，相關(guān)研究報(bào)道，UC腸黏膜內(nèi)炎癥細(xì)胞異常浸潤并伴有多種炎癥基因異常表達(dá)[6]。近年來，維生素D在炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答中的調(diào)控作用受到人們廣泛地關(guān)注，一項(xiàng)UC 相關(guān)的動(dòng)物試驗(yàn)表明，增加維生素D 的攝入能降低UC 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[7]；另一項(xiàng)UC 相關(guān)的動(dòng)物試驗(yàn)表明，維生素D 能改善UC 病理改變并減輕腸黏膜損傷[8]。本研究結(jié)果表明，UC 患者血清中維生素D 的水平明顯低于對(duì)照組，且隨著UC病情加重，血清中維生素D的水平進(jìn)一步降低，表明維生素D 減少與UC 發(fā)病及病情加重有關(guān)，分子機(jī)制可能是維生素D的減少削弱了其在UC發(fā)病中的保護(hù)作用，進(jìn)而造成UC的發(fā)生及病情的加重。

維生素D具有抑炎作用，在腎缺血再灌注[9]、肺炎、酒精性肝損傷等模型[10]中，維生素D能抑制炎癥反應(yīng)并減輕組織損傷，與之相關(guān)的機(jī)制是維生素D抑制NF-κB的表達(dá)，進(jìn)而減少TNF-α、ICAM-1的炎癥介質(zhì)的生成。在UC 的發(fā)病過程中，有研究[11]發(fā)現(xiàn)UC腸黏膜內(nèi)NF-κB、TNF-α、ICAM-1的表達(dá)水平明顯升高。本研究結(jié)果表明，隨著UC病情加重，腸黏膜內(nèi)NF-κB、TNF-α、ICAM-1表達(dá)進(jìn)一步升高，表明炎癥反應(yīng)的激活與UC 的病情加重有關(guān)。陳丹等[12]研究發(fā)現(xiàn)，維生素D 水平與多種炎癥細(xì)胞因子存在相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，隨著維生素D水平降低，腸黏膜中NF-κB、TNF-α、ICAM-1表達(dá)水平明顯升高，表明維生素D可能在UC的發(fā)病中抑制NF-κB及下游TNF-α、ICAM-1表達(dá)并發(fā)揮抗炎作用，維生素D的減少會(huì)使其抗炎作用減弱并造成UC病情加重。

UC病情易反復(fù)，治療后，腸黏膜是否愈合是影響遠(yuǎn)期預(yù)后的重要因素，達(dá)到腸黏膜愈合的UC 患者遠(yuǎn)期緩解率更高，復(fù)發(fā)率更低。李霄等[13]研究證實(shí)，UC 內(nèi)鏡下表現(xiàn)是治療后腸黏膜緩解的影響因素。本研究結(jié)果表明，維生素D 水平減少與UC 的發(fā)病及病情加重、炎癥反應(yīng)激活有關(guān)，隨著UC患者維生素D 水平降低，黏膜愈合率明顯降低，表明維生素D 是UC 治療預(yù)后的影響因素。進(jìn)一步通過ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn)，維生素D 對(duì)UC 治療預(yù)后具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

綜上所述，UC 患者血清維生素D 水平降低與腸黏膜內(nèi)炎癥基因表達(dá)增加、治療預(yù)后不佳有關(guān)，未來補(bǔ)充維生素D有望成為治療UC的新思路。