張建忠，馮慧琴，孫 偉

(江蘇省如東縣人民醫(yī)院檢驗科，如東 226400)

研究[1]發(fā)現(xiàn)，血壓與心腦血管疾病風(fēng)險之間呈直接和獨立的正相關(guān)關(guān)系。H 型高血壓是指伴有同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)水平升高的原發(fā)性高血壓。HCY 是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中的一個重要中間產(chǎn)物?！吨袊哐獕悍乐沃改?2018 修訂版)》[2]將高HCY 血癥定義為血漿HCY≥15 μmol/L。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)是葉酸和HCY 代謝的關(guān)鍵酶之一。MTHFR 基因突變，特別是C677T 位點的基因突變，可影響MTHFR 的生物學(xué)活性。另外，葉酸缺乏可導(dǎo)致HCY 代謝障礙和高HCY 血癥。本研究通過檢測H 型高血壓患者MTHFR 基因型和血清HCY 水平，探討兩者之間的相關(guān)性。同時，觀察MTHFR 不同基因型對H 型高血壓患者血壓的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021 年7 月—2022 年4 月在如東縣人民醫(yī)院心內(nèi)科門診就診及住院的H 型高血壓患者162 例為觀察組，非H 型高血壓(HCY<15 μmol/L)患者154 例為對照組。觀察組中男104 例，女58 例；年齡35～89 歲，平均(64.8±11.3)歲；體質(zhì)量52～80 kg，平均(65.1±9.9) kg；病程1～18 年，平均(8.1±3.7)年。對照組中男102 例，女52 例；年齡36～87 歲，平均(65.7±10.9)歲；體質(zhì)量54～82 kg，平均(65.9±10.2) kg；病程2～20 年，平均(7.7±4.1)年。兩組患者性別、年齡、體質(zhì)量和病程比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，具有可比性。本研究獲如東縣人民醫(yī)院倫理委員會批準(2019021)，所有患者對本研究目的、內(nèi)容等知情同意并本人簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準 納入標準：H 型高血壓診斷符合2018 版《中國高血壓防治指南》診斷標準。排除標準：(1)嚴重心腦血管疾病；(2)精神障礙及重度殘疾；(3)肝腎功能嚴重不全者；(4)并發(fā)惡性腫瘤、結(jié)締組織?。?5)患者依從性不足。

1.3 儀器與試劑 ABI7500 實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)儀(美國賽默飛世爾科技公司)；Eppendorf 5424R 型高速離心機(德國艾本德股份公司)；日立7600-110 型全自動生化儀(日本日立公司)；MTHFR 基因677C/T 分型試劑盒(蘇州曠遠生物分子技術(shù)有限公司)；HCY 檢測試劑盒(中元匯吉生物技術(shù)股份有限公司)。

1.4 基因分型 采集所有受試者全血2 mL 予乙二胺四乙酸抗凝，采用離心柱法提取基因組DNA，按照MTHFR 基因677C/T、1298C/T、66C/T 分型操作程序進行基因分型。反應(yīng)體系為25 μL：PCR 反應(yīng)液22 μL，反應(yīng)酶1 μL，待檢樣本DNA、陰性對照或陽性對照2 μL。反應(yīng)條件：37 ℃2 min 去污染；95 ℃3 min 預(yù)變性；95 ℃30 s，56 ℃30 s，65 ℃45 s 10個循環(huán)；95 ℃30 s，56 ℃30 s，65 ℃45 s，28 個循環(huán)。目的基因檢測信號為FAM、ROX、CY5，內(nèi)參基因檢測信號為VIC，按照人MTHFR&MTRR 基因多態(tài)性檢測試劑盒(熒光PCR 法)說明書(蘇州曠遠生物分子技術(shù)有限公司)規(guī)定的CT 值及標準進行結(jié)果判斷。

1.5 血清HCY 水平檢測 所有受試者禁食12 h后，促凝真空負壓血樣采集管采集靜脈血3 mL，靜置30 min，3 000 r/min 離心15 min，酶法測定血清HCY 水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以表示，采用t 檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血壓和HCY 水平比較 兩組患者收縮壓、舒張壓和HCY 水平見表1。兩組舒張壓水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但觀察組收縮壓和HCY 水平明顯高于對照組(P＜0.05)。

表1 兩組患者血壓和HCY 水平比較()

表1 兩組患者血壓和HCY 水平比較()

2.2 兩組患者MTHFR 基因型分布 兩組患者MTHFR 基因C677T 位點檢測結(jié)果見表2。觀察組TT 基因型和T 等位基因頻率均明顯高于對照組(均P＜0.01)，提示TT 基因型和T 等位基因可能與高HCY血癥相關(guān)。

表2 兩組患者MTHFR 基因型分布

2.3 MTHFR 基因型與血壓、HCY 水平的關(guān)系 兩組不同MTHFR 基因型患者血壓和HCY 水平見表3。兩組不同基因型患者舒張壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義；但無論在觀察組還是對照組，TT 型患者收縮壓都高于CC 型患者(P＜0.05)，而CT 和TT 型收縮壓差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，提示MTHFR C677T 基因多態(tài)性可能對收縮壓產(chǎn)生影響。此外，兩組TT 型患者血清HCY 水平也高于CC 型患者(P＜0.05)，結(jié)合H型高血壓患者中TT 基因型和T 等位基因頻率高于非H 型高血壓患者，提示MTHFR C677T 基因多態(tài)性可能對血清HCY 水平產(chǎn)生影響。

表3 MTHFR C677T 不同基因型患者血壓、HCY 水平比較()

表3 MTHFR C677T 不同基因型患者血壓、HCY 水平比較()

注：與同組CC 型比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

3 討論

高血壓影響全球約13.9 億成年人。高血壓與顱內(nèi)動脈粥樣硬化的發(fā)展和嚴重程度相關(guān)，是中國腦卒中人群的首位危險因素，其與腦卒中發(fā)病率呈正相關(guān)[3]。因此，作為最常見的可改變心血管危險因素，預(yù)防和控制高血壓可能是降低急性缺血性腦卒中風(fēng)險的有效治療策略。

高血壓也是全球心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)和全因死亡率的主要可改變風(fēng)險因素之一。據(jù)估計，患有高血壓的30～79 歲的人數(shù)從1990年的3.31 億女性和3.17 億男性增加到2019 年的6.26 億女性和6.52 億男性[4]。遺傳學(xué)和前瞻性隊列研究[5]都提供了強有力的證據(jù)表明HCY 與CVD 之間存在因果關(guān)系，其中將血清HCY 濃度降低5 μmol/L可將缺血性心臟病的風(fēng)險降低16%，將卒中的風(fēng)險降低24%。更重要的是，血壓和HCY 水平升高可能會相互增強引發(fā)CVD 風(fēng)險和死亡率的能力。在我國，H 型高血壓占高血壓病的70.00%以上[5]。HCY 異常升高會引起腎臟損害和腎功能下降[6]，加重H 型高血壓患者的病情，形成惡性循環(huán)，嚴重威脅患者的生命健康。MTHFR 參與HCY 的分解代謝并發(fā)揮重要作用。MTHFR 基因位點的突變可能與HCY 代謝和水平的變化有關(guān)[7]。因此，闡明MTHFR C677T 基因型在H 型高血壓患者中的分布及其與患者病情的關(guān)系，對疾病的早期篩查和診斷具有一定的指導(dǎo)價值。本文旨在研究H 型高血壓患者MTHFR C677T基因型分布及其與HCY 和血壓的相關(guān)性，為提高H型高血壓患者早期篩查的準確性提供數(shù)據(jù)支持，并為H 型高血壓患者提供個體化的干預(yù)措施。

MTHFR 是HCY 和葉酸代謝中的主要調(diào)節(jié)酶，催化5,10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸。人類MTHFR 基因由11 個外顯子和10 個內(nèi)含子構(gòu)成，共有20 多個突變位點，其中以C677T 與A1298C 兩個突變位點最為常見。C677T 基因位于MTHFR 基因的第4 個外顯子，由于胞嘧啶(C)突變成了胸腺嘧啶(T)，導(dǎo)致丙氨酸轉(zhuǎn)化為纈氨酸，降低其酶活性并導(dǎo)致血液中高HCY 和低葉酸水平；此外，1 298 位點的腺嘌呤(A)突變?yōu)榘奏?C)，導(dǎo)致編碼的谷氨酰胺錯譯為丙氨酸，也可能導(dǎo)致酶活性顯著降低[8-9]。研究[10]證實，MTHFR 基因TT 型與H 型高血壓相關(guān)，年齡、性別和MTHFR C677T 多態(tài)性與H型高血壓獨立相關(guān)。C.ZHANG 等[11]報道，H 型高血壓患者攜帶TT 基因型和T 等位基因的頻率明顯高于健康志愿者。本研究發(fā)現(xiàn)，TT 基因型和T 等位基因頻率在H 型高血壓患者中高于非H 型高血壓患者，且與收縮壓相關(guān)。李樹剛等[12]報道，H 型高血壓組患者的TT 型基因分布比例最高，而CC 型基因分布比例最低，同時H 型高血壓組患者的T 等位基因頻率最高，本研究得到類似結(jié)果。另外，兩組中TT 基因型患者的HCY 水平均明顯高于CC 基因型患者。高血壓是多因素共同作用的結(jié)果，在高血壓患者MTHFR基因多態(tài)性造成的影響也存在差異性。在H 型高血壓患者中，TT 型的收縮壓要高于非H 型TT 型高血壓患者，說明MTHFR 基因多態(tài)性在H 型高血壓中可能發(fā)揮更大作用，其具體機制尚待進一步研究。

本研究表明，MTHFR C677T 基因多態(tài)性，特別是TT 基因型和T 等位基因?qū) 型高血壓患者血壓和HCY 水平產(chǎn)生一定影響。當(dāng)然，本研究尚待大規(guī)模多中心臨床研究進一步證實。