劉 毅，王瑞敏，李 菲，蘆 玥，賈躍進

失眠障礙是以入睡困難、睡眠維持困難或早醒，并伴有疲勞、注意力不足或情緒不穩(wěn)定等日間功能障礙為特征的一種睡眠障礙[1]，人群中患病率為10%～20%[2]，是高血壓、癌癥、抑郁癥等疾病的危險因素[3-5]。現代醫(yī)學對失眠障礙機制的研究取得一定進展，但仍缺乏公認的疾病模型[6]；盡管有多種治療藥物，并無理想藥物[7]。中醫(yī)學在《黃帝內經》時，已在“天人相應”思維基礎上構建了“營衛(wèi)”“陰陽”節(jié)律運轉為核心的睡眠模型，并提出了“營衛(wèi)失和、陰陽不交”[8]的失眠總病機，且中藥治療該病安全、有效。因此，挖掘名老中醫(yī)治療失眠障礙有利于傳承中醫(yī)思維，指導臨床應用，研究開發(fā)新藥。

賈躍進是第6批全國老中醫(yī)藥專家工作室指導老師，從醫(yī)40余年，對中醫(yī)經典有深入研究，臨床尤擅治療失眠障礙、抑郁癥、焦慮癥等多種精神科疾病，并結合“胃不和則臥不安”理論，現代醫(yī)學“腦腸軸”理論，失眠障礙的發(fā)病原因和規(guī)律及多年臨床經驗，提出“從肝脾論治失眠”，取得較好的療效。本研究通過挖掘賈躍進的臨床用藥規(guī)律，反映其對“胃不和則臥不安”理論的理解與應用，結合現代網絡藥理學方法探討核心藥物，以期對臨床應用和深入研究提供參考。

1 研究的理論基礎

1.1 開宗明義 “胃不和則臥不安”出自《素問·逆調論》，常見的理解認為其是失眠的一個重要病機，但原旨實非如此。欲明此句，賈躍進認為從“則”處斷為兩段，即“胃不和”與“臥不安”?！拔覆缓汀敝小拔浮睘橹嗅t(yī)藏象之胃，代表整個消化系統(tǒng)的功能。《靈樞·本輸》記載：“大腸、小腸皆屬于胃[9]”，即為此意；“和”是中國傳統(tǒng)文化中的一個重要概念，具有和順、調和之意，中醫(yī)學代表陰平陽秘的健康狀態(tài)，《丹溪心法》記載：“氣血沖和，萬病不生[10]”，此處“胃不和”即指人的胃腸等消化系統(tǒng)陰陽平衡被打破，處于一種功能受損的非健康狀態(tài)，“胃”而言多為胃失和降。“臥不安”中的“臥”表示躺著的體位或睡覺的狀態(tài)?！端貑枴庋ㄕ摗酚涊d：“胸脅痛而不得息，不得臥[9]”，屬前者；《靈樞·口問》記載：“日暮在外之陽氣將盡而陰氣漸盛，則目暝而臥[9]”，屬后者。若結合《逆調論》原文前后句方知此處所指為陽明經氣上逆而呼吸有聲不能平臥之證。

1.2 承前啟后 繼《內經》后，歷代醫(yī)家結合自身實踐經驗，擴充并豐富了“胃不和則臥不安”的內涵和臨床意義。賈躍進歸為兩類，即從“喘”及“不寐”論。

“喘”?！督饏T要略》中“咳逆倚息，不得臥，小青龍湯主之”“支飲不得息，葶藶大棗瀉肺湯主之”等[11]；明代王肯堂引用《素問·逆調論》原文論喘，并以張仲景小青龍湯治療；清代張錫純曾論述：“胃氣宜息息下行，有時不下行而轉上逆，并迫肺氣亦上逆即可作喘?！?/p>

“不寐”。程鐘齡認為：“有胃不和則臥不安者，胃中脹悶疼痛，此食積也，保和湯主之?！贝藶轱嬍撤e滯之胃不和；《證治準繩》記載：“仲景云‘小便不利，大便乍難乍易，時有微熱，怫郁不臥者，有燥屎也，承氣湯主之’，素問云：‘胃不和則臥不安’，此夜所以不得眠也[12]”，此為燥屎內結之胃不和；丹波元堅在《雜病廣要》中言：“脈數實滑有力而不眠者，中有宿滯痰火，此為胃不和則臥不安也[13]”，此為痰火阻滯之胃不和；近代張聿青醫(yī)案中談及：“肝木升多，膽木降少，肝升太過矣……經云：‘胃不和則臥不安’。古圣于不寐之病，不曰心腎，獨曰胃不和[14]”，此為肝氣犯胃之胃不和；《傷寒論》中亦記載：“太陽病，發(fā)汗后，大汗出，胃中干，煩躁不得眠[11]”，此為胃陰不足之胃不和。

1.3 博采眾長 賈躍進發(fā)掘前人余緒同時結合臨床實踐認為，“胃不和則臥不安”，其初衷非特指失眠，而后世發(fā)揮之下將該句理解為失眠的重要病機，如今廣為應用，足見脾胃與失眠密切相關。營衛(wèi)生成及運行有賴脾胃，脾升胃降，樞機通利，氣血生化有源，營衛(wèi)循其常道，陰陽交泰而寐。胃不和則營衛(wèi)失和，樞機不利，陰陽不交而失眠?！拔覆缓蛣t臥不安”對失眠的論治有深刻的指導意義。

首先體現在對失眠病因的認識：飲食積滯、或濕邪阻滯、或胃熱熾盛、或肝氣犯胃，可阻礙氣機，造成氣機失常，濁氣上犯；抑或脾胃氣虛，胃失和降、或胃陰不足，虛火上灼；從而營衛(wèi)失和，陰陽不交則臥不安寐。其次對失眠病機的認識：若飲食不節(jié)，超出胃受納腐熟水谷的能力，胃勞受損，飲食積滯，胃失通降，濁邪上犯，阻滯氣機，氣機紊亂，陰陽失交，發(fā)為失眠，即狹義的胃不和引起失眠；若嗜食辛辣炙煿或肥甘厚味，胃腸積熱、釀生痰濕或痰熱，導致腑氣不通，清氣不升，氣機阻滯，以致樞機不利，陽不入陰而致失眠，此條對應當今生活嗜食高熱量飲食致失眠；若思慮或勞累過度，皆傷及脾胃，脾胃氣虛或胃陽不足，失于健運或水飲內停，從而導致氣機不暢，營衛(wèi)失和而失眠；若素有陰虛或積熱內蘊、耗傷胃陰，從而虛火內擾，氣機運行失常，營衛(wèi)循行節(jié)律紊亂不寐；臨床中肝脾失調常相互影響，交織為病，肝主疏泄，與脾胃共同參與調控氣、血，肝脾(胃)不和，氣血運行失常，影響營衛(wèi)循行即發(fā)為失眠。

關于方藥的使用?！鹅`樞·邪客篇》記載：“飲以半夏湯一劑，陰陽已通，其臥立至[9]”。其方僅有半夏、秫米，其中半夏逐痰飲而和胃，秫米秉燥金之氣而成，二者相配，祛痰消痞，和胃降逆，正對“胃不和則臥不安”之證，雖非直接寧心安神以治失眠，可奏安眠之效，臨床應用賈躍進常崇鞠通之說易秫米為健脾利濕之薏苡仁，亦獲良效；針對上述病機，教材皆有提示，如食積以保和丸、痰熱以黃連溫膽湯等。

賈躍進著重強調臨床常見的胃不和臥不安兼具肝郁的類型：因現代人應對復雜的人際關系與精神壓力，常存在情志不遂，情志不舒，則易肝氣郁滯，且現代人飲食多存在飲食不節(jié)、嗜食辛辣肥甘的特點，長此則脾胃易傷，加之肝脾胃皆為全身之樞機，生理上常相互影響，故常并發(fā)病。相關研究表明，肝郁癥狀、脾胃病癥狀與失眠癥狀呈正相關[15]；現代醫(yī)學認為，腦腸軸是中樞神經系統(tǒng)、自主神經系統(tǒng)及腸神經系統(tǒng)之間的雙向通信系統(tǒng)，有研究顯示腸道微生物組通過此軸影響睡眠質量[16]，因此，從肝脾論治失眠符合中醫(yī)理論及現代醫(yī)學的相關研究。賈躍進臨床根據肝脾不和類型的偏性將其辨證為脾虛為甚的肝郁脾虛，痰熱為甚的肝郁痰熱，脾虛較輕，可見熱象的肝郁化熱、肝脾胃樞機運行不利的樞機不利等證型，與之對應常投以香砂六君子、柴芩溫膽湯、丹梔逍遙散、柴胡加龍骨牡蠣湯加減，其中注意的是香砂六君子中的木香，賈躍進常以香附替代，加強疏肝理氣之功，取治病求本之意；柴胡加龍骨牡蠣湯中為防龍牡恐礙胃氣，常大量用“秉受春生之氣”麥芽以達到疏肝健脾之效；同時注重腑氣通暢，方中常佐枳實、炒萊菔子。

2 資料與方法

2.1 數據挖掘分析

2.1.1 數據收集 收集2018年9月1日—2020年9月1日賈躍進在山西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院門診診斷為失眠障礙且臨床資料完善的病案。

2.1.2 納入和排除標準 納入標準：根據《中國精神障礙分類及診斷標準》(CCMD-3)[17]明確診斷并單純使用中藥顆粒劑治療的安全、有效的病案。排除標準：診斷、效果或安全性不明的病案；合并其他影響判斷的軀體及精神?。桓深A方式為非單純中藥或使用中藥其他劑型。

2.1.3 數據標準化、錄入與挖掘 通過納入和排除標準進行篩選，以雙人錄入法將數據錄入至古今醫(yī)案云平臺V 2.2.3提供的模板中，確保正確后使用數據標準化模塊并結合2015版中國藥典[18]與第7版中藥學教材[19]對中藥名稱進行規(guī)范。獲得標準化數據庫后，使用數據挖掘模塊分別對其進行藥物頻次、性味歸經統(tǒng)計及關聯分析、聚類分析和復雜網絡分析，并綜合獲得核心組方。

2.2 核心組方網絡藥理學分析

2.2.1 核心組方中藥物有效成分及其對應靶點篩選 利用TCMSP數據庫(http://tcmspw.com/tcmsp.php)，分別檢索核心組方中各藥物成分，并限定口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，血腦屏障(blood brain barrier，BBB)≥-0.3，類藥性(drug likeness，DL)≥0.18，篩選獲取其有效成分，并匹配各成分靶點，對無靶點記錄的有效成分利用SwissTargetPrediction平臺(http://www.swisstargetprediction.ch/)預測靶點，最終將靶點在UniProt數據庫(https://www.uniprot.org/)中匹配基因名。

2.2.2 疾病靶點獲取 在GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)、GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(https://omim.org/#)、TTD(http://db.idrblab.net/ttd/)數據庫中分別檢索“insomnia disorder”，得到失眠障礙相關靶點，并將數據庫得到的失眠障礙相關靶點合并、去重，再利用UniProt數據庫篩選。

2.2.3 藥物-疾病交集靶點獲得 將獲得的中藥各有效成分相關靶點與疾病相關靶點利用微生信(http://www.bioinformatics.com.cn/)平臺取交集，獲得核心藥物組合有效成分中直接與疾病相關的靶點。

2.2.4 疾病-藥物-成分-靶點及蛋白-蛋白互作(PPI)網絡構建 以疾病、核心組方、各藥物、有效成分和相關靶點為節(jié)點，相互關系為邊，在Cytoscape 3.8.0中構建網絡，并利用插件對獲得的藥物-疾病交集靶點進行PPI網絡構建、拓撲分析和聚類分析。

2.2.5 基因本體(GO)富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析 將藥物-疾病交集靶點導入BiNGO、ClueGO插件分別進行GO和KEGG通路富集分析，之后將其進行可視化分析。

2.3 關鍵有效成分與關鍵靶點分子對接分析 選取2.2.4兩個網絡中節(jié)點度較大的關鍵成分及關鍵靶點分別在Zinc(https://zinc.docking.org/)、PDB(http://www.rcsb.org/)數據庫中獲取3D結構，并使用Vina分子對接，將其中對接較好的組合使用PyMol可視化。

3 結 果

3.1 數據挖掘結果

3.1.1 藥物頻次及屬性統(tǒng)計 共收集病案442例，根據納入與排除標準，獲得驗案228例，包括方劑228首，涉及中藥119味，其中藥物應用百分比>25%的有18味，詳見表1。將228首方劑中119味藥物進行性、味、歸經分析，以雷達圖表示，詳見圖1。其中，中藥藥性主要為平、溫、寒、微寒；藥味主要為甘、辛、苦；藥物歸經主要為脾、肺、胃、肝。

圖1 四氣、五味、歸經頻次分布雷達圖(A為四氣頻次分布；B為五味頻次分布；C為歸經頻次分布)

表1 藥物使用頻次分布(應用百分比≥25%)

3.1.2 藥物關聯分析、聚類分析、復雜網絡分析及核心組方確定 將228首處方利用云平臺數據分析，首先設置置信度≥0.70，支持度≥0.55，得到19組藥物關聯分析結果，詳見表2。將3.1.1中應用百分比≥25%的18味中藥進行聚類分析，同時設置距離類型為歐氏距離，聚類方法為最長距離法，將其分類。C1：川楝子、枳實、萊菔子；C2：柴胡、黃芩、龍骨、薏苡仁、石菖蒲；C3：麥芽、合歡皮、遠志；C4：香附、白術、黨參、砂仁、陳皮、半夏、茯苓4個聚類處方，詳見圖2；設置節(jié)點度≤150，進行中藥-中藥復雜網絡分析，得到由6味中藥組成的核心組合，詳見圖3。綜合以上并結合藥物頻次得到核心組方為茯苓、黨參、半夏、白術、陳皮、香附。

表2 藥物關聯分析(支持度≥0.55，置信度≥0.70)

圖2 藥物聚類分析

圖3 藥物復雜網絡分析

3.2 網絡藥理學分析結果

3.2.1 核心組方有效成分和對應靶點 通過檢索TCMSP數據庫，結合SwissTargetPrediction預測靶點，篩選出核心組方各藥物有效成分及相關靶點。經過去重、排除后，總獲得有效成分45種，重復成分3種，相關靶點243個。詳見表3。

表3 核心藥物組成部分成分相關信息

3.2.2 疾病靶點獲取結果 將GEO數據庫得到的數據集中的22個睡眠正常的基因表達樣本與22個睡眠剝奪的基因表達樣本應用R語言進行差異分析，共得到100個差異基因靶點，結果以聚類熱圖及火山圖表示，詳見圖4。將GeneCards數據庫中得到的2 037個失眠障礙相關基因按照相關度大于中位數進行篩選，獲得1 021個疾病靶點； OMIM和TTD分別得到235個、28個靶點。將以上所得靶點處理后，共獲得失眠障礙疾病靶點1 181個。

圖4 失眠障礙差異基因分析結果

3.2.3 藥物-疾病靶點交集結果 利用微生信平臺將獲得的藥物靶點與疾病靶點取交集，共獲得72個藥物與疾病直接相關的交集靶點，詳見圖5。

圖5 藥物-疾病交集基因Venn圖

3.2.4 疾病-藥物-成分-靶點網絡和PPI網絡構建結果 將數據導入Cytoscape軟件，構建疾病-核心組方-成分-交集靶點網絡，詳見圖6。從該網絡篩選出節(jié)點度較大(Degree>18)的12個關鍵有效成分：栓菌酸、去氫齒孔酸、豆甾醇、蒲公英賽醇、1，4-環(huán)氧樹脂-16-羥基苯甲酸-1，3，12，14。在BisoGenet中導入72個交集靶點構建PPI網絡，通過CytoNCA插件分析網絡并限定度值(DC)、介度中心性(BC)、接近中心性(CC)、網絡中心性(NC)、局部性連接(LAC)，得到PPI核心網絡，詳見圖7。在此基礎上使用MCODE插件對核心網絡進行聚類，得到7個聚類網絡，選擇其中每個聚類網絡中節(jié)點度較大的10個靶點作為關鍵靶點，包括RAC-α絲氨酸/蘇氨酸-蛋白激酶(Akt1)、鈉依賴性5-羥色胺轉運蛋白(SLC6A4)、環(huán)狀磷酸腺苷響應性元素結合蛋白(CREB1)、β2腎上腺素能受體(ADRB2)、高親和力神經生長因子受體(NTRK1)、腫瘤壞死因子(TNF)、雌激素受體1(ESR1)、雄激素受體(AR)、一氧化氮合酶2(NOS2)、低氧誘導因子-1α(HIF1A)。

圖6 疾病-核心組方-成分-交集靶點網絡

圖7 PPI網絡篩選圖

3.2.5 GO富集分析和KEGG富集分析結果 將獲得的藥物-疾病交集靶點導入BiNGO，并設置信水平為0.01，進行GO富集分析，詳見圖8。GO生物過程主要包括生物調節(jié)、信號通路、對刺激的反應、免疫過程、代謝過程、細胞過程等；GO分子功能包括結合、分子轉導活性、催化活性等；GO細胞成分包括突觸、胞外區(qū)等。將交集靶點導入ClueGO，設定P≤0.05，最小聚類為4，K-score為0.4，進行KEGG通路富集分析，詳見圖9，主要包括神經活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸、酪氨酸代謝、催乳素信號通路、鈣信號通路、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)信號通路、環(huán)磷酸鳥苷-蛋白激酶G(cGMP-PKG)信號通路等。

圖8 GO功能富集分析

圖9 KEGG關鍵通路富集分析

3.3 分子對接結果 關鍵靶點和關鍵成分分子對接結果≤-20.9 kJ/mol，提示關鍵成分均與關鍵靶點多可能形成穩(wěn)定結構，詳見表4。取對接最好的前5個關鍵成分與關鍵靶點組合可視化，詳見圖10。

表4 分子對接結果 單位：kJ/mol

圖10 分子對接構象圖 (A為AKT1與BZ1；B為SLC6A4與DS8；C為NOS2與DS5；D為NTRK1與C；E為ESR1與FL6)

4 討 論

數據挖掘結果可知，治療藥物中使用頻率較高的為茯苓、黨參、半夏、白術、陳皮、香附?，F代藥理學研究認為，上述藥物多具有神經保護、鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁焦慮等作用，其中一些藥物兼具保肝及治療消化系統(tǒng)疾病的作用[20-25]。根據藥性、藥味、歸經分布規(guī)律分析結果可知，賈躍進治療失眠障礙用藥較平和，結合頻率可見用藥略偏溫，因肝脾不和證常存在脾土虧虛，賈躍進崇東垣之法而善用甘溫，甘味藥可補益氣血，顧護脾胃，調和諸藥，肝郁表現為全身氣機失常，“氣有余便是火，氣不足便是寒”故寒熱均見，辛、苦味藥，辛開苦降，燮理樞機，令氣機自和；脾升胃降、肝升肺降，皆為周身氣機運行的樞機，可見賈躍進調氣為先、重視脾胃、整體論治的思路。 藥物關聯分析中篩選出的19對核心關聯組合均是香附、白術、黨參、茯苓、半夏、陳皮6味藥物的關聯，其中香附為“氣中之血藥”，行氣解郁同時兼顧血分；黨參補中益氣、健脾益肺，賈躍進常以之代人參；陳皮、半夏、茯苓為二陳湯、溫膽湯、保和丸成分，可健脾行氣、燥濕化痰；茯苓、白術是常用的治療脾胃氣虛藥對，四君子湯、逍遙散、參苓白術散、香砂六君子湯等類方均含此藥對，可見賈躍進對脾胃的重視?？傊?，賈躍進治療失眠障礙以健脾疏肝為主線，兼顧治療痰、濕等脾胃相關病理產物。

聚類分析中的四類聚類處方中，C2、C4屬賈躍進臨床“方證對應”常用的，從肝脾治療失眠障礙的方劑：C2為和解樞機的柴胡加龍骨牡蠣湯及疏肝行氣、清化痰熱的柴芩溫膽湯；C4為益氣健脾、行氣疏肝的香砂六君子湯；C1中枳實、萊菔子為賈躍進常用的通腑降氣藥對；C3中合歡皮、遠志為賈躍進常用的安眠藥對，麥芽是方中常用的顧護脾胃的佐使藥。復雜網絡分析獲得的核心藥組是關聯分析中的6味藥物。從數據挖掘可知賈躍進治療失眠障礙的核心組方為茯苓、黨參、半夏、白術、陳皮、香附6味，此6味中藥涵蓋賈躍進從肝脾論治失眠障礙的兩個方面，即脾虛及肝郁。

根據藥物網絡構建，得到核心組方發(fā)揮作用的12個主要有效成分，其中FL4、FL6為茯苓中的三萜類化合物，有研究顯示此類物質可發(fā)揮鎮(zhèn)靜作用[26]；C被證實可通過調節(jié)細胞分類周期42鳥甘酸結合蛋白-肌動蛋白相關蛋白2/3復合體(Cdc42-Arp2)和絲裂原活化蛋白激酶1/2-環(huán)狀磷酸腺苷響應性元素結合蛋白(Erk1/2-Creb)信號傳導改善記憶障礙，促進神經和突觸形成[27]。動物實驗證實，可上調谷胱甘肽、γ-氨基丁酸(GABA)水平，下調多巴胺(DA)、丙二醛、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、乙酰膽堿酯酶(AChE)水平從而調節(jié)精神癥狀，改善腦功能[28]；DS8被認為存在AChE抑制作用[29]，而AChE抑制劑可改善睡眠狀況[30]；XF1屬香附中的揮發(fā)油類，動物實驗得到該類物質可能通過調節(jié)膽堿能系統(tǒng)及5-羥色胺(5-HT)水平發(fā)揮抗焦慮作用[31]；以BZ1為主要成分的混合物，證實有治療抑郁的潛力[32]；A成分通過抑制TNF-α炎癥反應發(fā)揮神經保護作用[33]，實驗證實其可增加小鼠中樞神經系統(tǒng)(CNS)中的去甲腎上腺素(NE)、5-HT等神經遞質，從而表現出抗抑郁活性[34]；DS5是黨參中的異黃酮，在婦女圍絕經期失眠障礙治療中可發(fā)揮作用[35]；動物實驗證實BX4在小鼠CNS中具有抗焦慮和鎮(zhèn)靜作用[36]；CP3在嚙齒類動物的研究中發(fā)現可改變其晝夜節(jié)律[37]；XF5是已知的鎮(zhèn)定鎮(zhèn)痛助眠藥物；BX3通過增強突觸可塑性，減少氧化損傷和限制神經炎癥，改善d-半乳糖誘導的學習和記憶障礙[38]。

根據PPI網絡得到的核心靶點中：Akt1編碼的Akt1激酶在神經元細胞之間通訊、神經元存活和記憶形成中發(fā)揮作用[39]；CREB1編碼磷酸化依賴性轉錄因子，參與晝夜節(jié)律同步等多種細胞過程，且與快速動眼(REM)睡眠在抑郁癥中的作用有關[40-41]；ADRB2編碼β腎上腺素能受體，該基因在清醒及睡眠剝奪時表達上調[42]；SLC6A4編碼調控5-HT膜蛋白，而5-HT是已知的促覺醒和抑制REM睡眠的神經遞質[43]；NTRK1編碼神經營養(yǎng)性酪氨酸激酶受體，可與神經營養(yǎng)因子結合[44]，有研究表明其與抑郁、焦慮、睡眠障礙等癥狀存在相關性[45]；動物實驗證實，TNF增強或抑制可分別促進和抑制睡眠，且在相關研究[46]得到相似結論；ESR1、AR分別編碼雌激素、雄激素受體，而性激素對睡眠過程產生重要影響，雌激素和黃體酮調控女性一生荷爾蒙周期相關的睡眠方式變化，雄激素可影響晝夜節(jié)律時相[47-48]；一氧化氮合酶2(NOS2)編碼一氧化氮合酶，有研究顯示，一氧化氮(NO)參與調節(jié)REM睡眠[49]；HIF1A編碼低氧誘導因子-1(HIF-1)α亞基，HIF-1可充當缺氧適應性反應的主要轉錄調節(jié)因子，認為與睡眠障礙中的阻塞性睡眠呼吸暫停引起的缺氧有關[50]。

關于失眠障礙的病理機制尚不明確，但公認的機制為神經遞質調節(jié)障礙(GABA、5-HT、DA、NE等)、信號傳導障礙(下丘腦-垂體-腎上腺軸)、代謝障礙(能量、脂質、氨基酸及腸道微環(huán)境等)、內分泌失調(生長激素、食欲素、性激素等)、免疫功能異常(炎癥)、遺傳(基因)及心理因素刺激等引起睡眠-喚醒節(jié)律紊亂[51-53]，由GO功能富集分析得到主要生物結果對上述機制幾乎均涉及，可見核心組方參與多種機制，從多途徑對失眠障礙發(fā)揮治療作用。KEGG通路富集分析主要包括神經活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸(已在病理機制中概括)；酪氨酸參與合成DA、NE等神經遞質，并可增加催乳素釋放，催乳素被認為是睡眠的誘導因子之一[54-55]；鈣是神經元中重要的第二信使，動物研究發(fā)現其可參與膽堿能神經元對睡眠-覺醒的調節(jié)[55]；cAMP、cGMP等核苷酸代謝產物腺苷被認為是睡眠的平衡調節(jié)劑[56]。

分子對接結果顯示，關鍵有效成分和關鍵靶點多數可結合為穩(wěn)定結構，其中與各關鍵成分對接較好的靶點為Akt1、NTRK1、SLC6A4和NOS2，而α-香樹脂醇(BZ1)、豆甾醇(C)、蒲公英賽醇(DS8)和二氫齒孔酸(FL6)是與關鍵靶點對接較好的成分，提示核心組方可能由這4種成分作用于上述的靶點，即通過Akt1激酶、神經營養(yǎng)因子、血清素能突觸等方面發(fā)揮治療失眠障礙的作用。

通過對“胃不和則臥不安”討論并結合數據挖掘方法，得到賈躍進從肝脾論治失眠障礙的核心組方為茯苓、黨參、半夏、白術、陳皮、香附，并初步預測其多成分、多靶點、多通路作用機制涉及的關鍵成分為α-香樹脂醇、豆甾醇、蒲公英賽醇和二氫齒孔酸；關鍵靶點為Akt1、NTRK1、SLC6A4和NOS2；關鍵通路為神經活性配體-受體相互作用、血清素能突觸，該結論可為臨床應用和進一步研究提供參考。