韋 琴，史衛(wèi)衛(wèi)，楊語嫣，路笑穎，曹亞景，崔 澤*

(1.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院2020級(jí)學(xué)碩4班，河北 石家莊 050017；2.河北省疾病預(yù)防控制中心慢性非傳染性疾病防治所， 河北 石家莊 050024；3.華北理工大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，河北 唐山 063210)

代謝綜合征(metabolic syndrome，MetS)是指肥胖合并出現(xiàn)高血壓、高血糖、高脂血癥、高膽固醇的一組代謝紊亂癥候群[1]。近年來，工作生活方式如久坐不動(dòng)、高熱量食品攝入增加等致使MetS發(fā)病率逐年上升，已成為現(xiàn)代社會(huì)的健康危害之一。據(jù)報(bào)道，目前大約三分之一的美國成年人患有MetS[1]，而中國成年人MetS患病率也從2000年的13.7%上升到了2010年的33.9%[2]。維生素D受體(vitamin D receptor，VDR)是一種核激素受體和轉(zhuǎn)錄因子，位于12q12-14號(hào)染色體上，在不同組織中廣泛表達(dá)，并參與人體多種代謝途徑，對(duì)代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展起重要作用[3-4]。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)即DNA序列發(fā)生變異，是人類最常見的遺傳變異，可決定個(gè)體對(duì)疾病的遺傳易感性。VDR SNP序列變異可能影響VDR基因的生物效應(yīng)，從而參與MetS發(fā)生發(fā)展。目前，VDR FokI 及BsmI基因多態(tài)性與MetS遺傳易感性關(guān)系的研究較多，但各研究間結(jié)論并不一致。本研究納入現(xiàn)有研究，對(duì)VDR基因多態(tài)性與MetS易感性的相關(guān)研究結(jié)果進(jìn)行定量綜合分析，為MetS的病因?qū)W研究提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

1 資 料 與 方 法

1.1文獻(xiàn)檢索 計(jì)算機(jī)聯(lián)合檢索PubMed、中國知網(wǎng)、萬方和中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫中公開發(fā)表的關(guān)于VDR基因多態(tài)性與MetS發(fā)病關(guān)系的中英文報(bào)道，檢索時(shí)限截止2021年3月。中文檢索詞：“代謝綜合征”、“維生素D受體或VDR或FokI或rs2228570或BsmI或rs1544410”、“單核苷酸多態(tài)性或基因多態(tài)性”；英文檢索詞：“metabolic syndrome”、“vitamin D receptor or VDR or FokI or rs2228570 or BsmI or rs1544410”、“polymorphism or genetic variation”。采取主題詞和自由詞結(jié)合的方式檢索，并手工追溯納入文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)，以提高查全率。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①已公開發(fā)表的、關(guān)于FokI rs2228570、BsmI rs1544410位點(diǎn)多態(tài)性與MetS發(fā)病關(guān)系的研究，且能獲取全文，語種限定中文和英文；②研究對(duì)象MetS組為臨床上確診的MetS患者，對(duì)照組為具有可比性的未患MetS者；③MetS組與對(duì)照組均進(jìn)行基因分型，且能獲取完整的基因型數(shù)據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①與FokI、BsmI基因多態(tài)性無關(guān)；②綜述、文摘、會(huì)議報(bào)告、動(dòng)物研究、學(xué)位論文及重復(fù)性文獻(xiàn)；③基因型數(shù)據(jù)不完整，無法計(jì)算OR及其95%CI的研究；④不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的研究。

1.3文獻(xiàn)篩選與資料提取 根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，篩選出合格文獻(xiàn)，并獲取全文，建立數(shù)據(jù)資料提取表格，由2名研究者獨(dú)立篩選并按照統(tǒng)一設(shè)計(jì)的數(shù)據(jù)提取表錄入所需信息，并交叉核對(duì)。若出現(xiàn)分歧，討論決定或由第三人決定。提取第一作者姓名、文獻(xiàn)出版年份、國家、種族、基因分型方法、樣本量、各基因型頻數(shù)、哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)等。

1.4文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià) 文獻(xiàn)質(zhì)量的評(píng)價(jià)根據(jù)紐卡斯?fàn)?渥太華量表(Newcastle Ottawa Scale，NOS)項(xiàng)目進(jìn)行，包括研究人群的選擇、病例與對(duì)照的可比性、暴露因素3個(gè)類別8個(gè)評(píng)價(jià)條目，滿分為9分，總分≥6分為高質(zhì)量文獻(xiàn)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用Stata 12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。以合并的OR及其95%CI，估計(jì)FokI rs2228570、BsmI rs1544410位點(diǎn)多態(tài)性與MetS遺傳易感性的關(guān)聯(lián)。采用I2檢驗(yàn)進(jìn)行異質(zhì)性分析，當(dāng)P<0.1且I2>50%認(rèn)為納入研究間異質(zhì)性較大，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析；當(dāng)P≥0.1且I2≤50%認(rèn)為納入究間異質(zhì)性較小，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析。采用Begg′s檢驗(yàn)和Egger′s檢驗(yàn)評(píng)估發(fā)表偏倚，并采用敏感性分析評(píng)價(jià)結(jié)果的穩(wěn)定性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1納入文獻(xiàn)一般特征 依據(jù)檢索策略，檢索到潛在的相關(guān)文獻(xiàn)共266篇，通過閱讀標(biāo)題及摘要初步篩選，去除重復(fù)、綜述類及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)118篇，非VDR基因多態(tài)性與MetS易感性研究97篇，進(jìn)一步閱讀全文，去除非病例對(duì)照研究31篇、非FokI及BsmI位點(diǎn)研究11篇，最終納入合格文獻(xiàn)9篇[5-13]，均為英文研究，共包括4 239例研究對(duì)象。納入文獻(xiàn)經(jīng)NOS評(píng)價(jià)，評(píng)分均≥6分，均為高質(zhì)量文獻(xiàn)。文獻(xiàn)篩選過程如圖1，納入文獻(xiàn)的基本信息見表1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程

表1 納入文獻(xiàn)一般特征Table 1 The basic features of the literature included

PCR-RFLP：限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)；PCR-HRM：聚合酶鏈反應(yīng)和高分辨率熔融分析；ASPCR：等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)；RT-PCR：實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；SNPscanTM：高通量SNP分型技術(shù)

2.2Meta分析結(jié)果

2.2.1FokI多態(tài)性與MetS的遺傳易感性 本研究共納入9項(xiàng)研究[5-13]，均報(bào)道了FokI 與MetS遺傳易感性的關(guān)系，其中MetS組2 016例，對(duì)照組2 165例。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，等位基因模型(I2=61.8%，P=0.007)、隱性模型(I2=51.3%，P=0.037)、純合子模型(I2=53.2%，P=0.029)異質(zhì)性較高，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析；顯性模型和雜合子模型無明顯異質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型。Meta分析結(jié)果顯示，F(xiàn)okI rs2228570位點(diǎn)多態(tài)性在多種模型下可顯著提高M(jìn)etS遺傳易感性。等位基因模型(fvs.F)(OR=1.25，95%CI：1.07～1.46，P=0.005)；顯性基因模型(ff+Ffvs.FF)(OR=1.25，95%CI：1.09～1.44，P=0.002)；隱性基因模型(ffvs.Ff+FF)(OR=1.40，95%CI：1.10～1.77，P=0.005)；純合子模型(ffvs.FF)(OR=1.51，95%CI：1.13～2.03，P=0.005)。以上4種模型提示FokI rs2228570位點(diǎn)f等位基因、ff基因型及ff+Ff基因型可能是MetS發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。雜合子模型(Ffvs.FF)未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)(P>0.05)。見表2，圖2。

2.2.2BsmI多態(tài)性與MetS的遺傳易感性 本研究納入的9項(xiàng)研究中有8項(xiàng)[5-11，13]研究了BsmI與MetS遺傳易感性的關(guān)系，其中MetS組1 633例，對(duì)照組1 725例。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，隱性模型(I2=61.2%，P=0.012)、純合子模型(I2=66.5%，P=0.004)異質(zhì)性較高，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析；其余3種模型未見明顯異質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型。Meta分析結(jié)果顯示，BsmI rs1544410位點(diǎn)可顯著降低MetS遺傳易感性。等位基因模型(bvs.B)(OR=0.86，95%CI:0.76～0.98，P=0.026)；雜合子模型(Bbvs.BB)(OR=0.77，95%CI:0.62～0.95，P=0.016)。以上結(jié)果提示BsmI rs1544410位點(diǎn)b等位基因與Bb基因型可能是MetS發(fā)病的保護(hù)因素。其余3種模型均未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)(P>0.05)。見表2，圖3。

2.3發(fā)表偏倚檢驗(yàn) Begg′s檢驗(yàn)顯示，F(xiàn)okI rs2228570與BsmI rs1544410位點(diǎn)在5種模型下的漏斗圖基本呈對(duì)稱分布，Egger′s檢驗(yàn)也未發(fā)現(xiàn)明顯發(fā)表偏移(P>0.05)。提示納入文獻(xiàn)可能不存在明顯發(fā)表偏移，納入文獻(xiàn)整體代表性較好。見表2，圖4～5。

表2 VDR基因多態(tài)性與MetS關(guān)系的Meta分析結(jié)果Table 2 Meta-analysis results of the relationship between VDR gene polymorphism and MetS

圖2 FokI rs2228570與MetS相關(guān)性的Meta分析森林圖(f vs. F)

圖4 FokI rs2228570 Begg′s漏斗圖和Egger′s的線性回歸發(fā)表偏倚檢驗(yàn)(f vs. F)

圖5 BsmI rs1544410 Begg′s漏斗圖和Egger′s的線性回歸發(fā)表偏倚檢驗(yàn)(b vs. B)

2.4敏感性分析 采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析，將本研究納入的文獻(xiàn)逐一剔除后，結(jié)果顯示，2個(gè)位點(diǎn)在5種模型下合并的OR 、95%CI以及異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果均未發(fā)生明顯波動(dòng)，提示本Meta分析結(jié)果穩(wěn)健性較好，結(jié)論可靠。

3 討 論

MetS是一種復(fù)雜的病理生理狀態(tài)，是心血管疾病和2型糖尿病流行的重要因素，現(xiàn)已成為臨床與公共衛(wèi)生的一大挑戰(zhàn)。MetS病因復(fù)雜，主要由于能量攝入與消耗不平衡引起，與環(huán)境因素、遺傳易感性的相互作用也存一定在相關(guān)性[14]。研究顯示，不良的生活方式、飲食習(xí)慣及亞健康狀態(tài)等危險(xiǎn)因素不能完全解釋MetS的發(fā)病，仍有部分發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與遺傳背景相關(guān)。因此，深入研究與MetS發(fā)病相關(guān)的基因多態(tài)性位點(diǎn)，對(duì)MetS的預(yù)防、篩查及治療有重要意義。

維生素D是人體必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，缺乏易引起肥胖、糖耐量異常及胰島素抵抗，其機(jī)制可能與VDR激活有關(guān)[15]。VDR是一種由VDR基因編碼的蛋白質(zhì)，可與1,25(OH)2D特異性結(jié)合影響維生素D的生物活性，還可與核苷酸序列結(jié)合使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能發(fā)生改變，從而引起特定疾病的易感性[16]。目前已知的VDR單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)有20多個(gè)，但其遺傳性變異的研究多數(shù)集中在FokI、BsmI位點(diǎn)。FokI位于VDR啟動(dòng)子區(qū)附近，其多態(tài)性是由于內(nèi)含子1與外顯子2交界處的堿基C向堿基T突變引起，并可產(chǎn)生一個(gè)額外的起始密碼子，使轉(zhuǎn)錄活性增加、VDR蛋白氨基酸序列改變，最終阻礙維生素D的結(jié)合及信號(hào)傳導(dǎo)[17]。BsmI位于VDR基因3′端非翻譯區(qū)，其多態(tài)性可能會(huì)影響各種轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，并影響VDR表達(dá)及其mRNA穩(wěn)定性[18]。多項(xiàng)Meta分析表明，F(xiàn)okI及BsmI位點(diǎn)基因多態(tài)性與高血壓、2型糖尿病、多囊卵巢綜合征、多種癌癥、糖尿病血管并發(fā)癥、哮喘等遺傳易感性顯著相關(guān)[19-23]。目前已有的研究中，有報(bào)道FokI及BsmI位點(diǎn)與MetS遺傳易感性顯著相關(guān)[7]，但也有研究認(rèn)為FokI及BsmI位點(diǎn)與MetS遺傳易感性無關(guān)[8-9]。本研究為進(jìn)一步明確VDR FokI和BsmI位點(diǎn)基因多態(tài)性與MetS遺傳易感性的關(guān)系，進(jìn)行了Meta分析以綜合評(píng)價(jià)。

本研究應(yīng)用循證醫(yī)學(xué)方法，分別對(duì)VDR FokI rs2228570、BsmI rs1544410位點(diǎn)的5種模型進(jìn)行了Meta分析。結(jié)果顯示，VDR FokI位點(diǎn)突變可顯著提高M(jìn)etS患病風(fēng)險(xiǎn)，BsmI位點(diǎn)突變可顯著降低MetS患病風(fēng)險(xiǎn)。FokI位點(diǎn)多態(tài)性在等位基因模型、顯性模型、隱性模型及純合子模型下均發(fā)現(xiàn)與MetS遺傳易感性顯著相關(guān)(P<0.05)；BsmI位點(diǎn)多態(tài)性在等位基因模型、雜合子模型下與MetS遺傳易感性顯著相關(guān)(P<0.05)。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)okI rs2228570位點(diǎn)f等位基因、ff基因型及ff+Ff基因型可能是MetS發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；BsmI rs1544410位點(diǎn)b等位基因與Bb基因型可能是MetS發(fā)病的保護(hù)性遺傳因素。這與最近一篇 Meta[24]分析的結(jié)果不完全一致，該研究認(rèn)為FokI與MetS發(fā)病無相關(guān)，但認(rèn)為BsmI是MetS發(fā)病的保護(hù)性因素，推測(cè)可能與文獻(xiàn)納入排除標(biāo)準(zhǔn)及信息提取方式不同，影響合并分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)效能，從而導(dǎo)致分析結(jié)果的不一致性。

本研究納入的9篇文獻(xiàn)質(zhì)量均較高，Begg′s漏斗圖和Egger′s檢驗(yàn)均未檢測(cè)到發(fā)表偏倚，漏斗圖基本呈對(duì)稱分布，提示納入的文獻(xiàn)整體不存在明顯發(fā)表偏倚。敏感性分析也未發(fā)現(xiàn)OR、95%CI及異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果在5種基因模型下發(fā)生明顯波動(dòng)，表明本Meta分析結(jié)果穩(wěn)健性較好。但本研究仍存在一定的局限，首先，納入的文獻(xiàn)僅為公開發(fā)表的中英文文獻(xiàn)，不包括灰色研究，可能存在一定的發(fā)表偏移；其次，納入的多是以醫(yī)院為基礎(chǔ)的研究，存在一定的信息偏移，且多為小樣本研究，最終提取到的數(shù)量有限，可能會(huì)影響最終的統(tǒng)計(jì)效應(yīng)；此外，MetS的發(fā)生發(fā)展可能與性別、年齡、遺傳背景、環(huán)境暴露、維生素D攝入情況等有關(guān)，但本研究未提取到這部分的信息進(jìn)行混雜因素調(diào)整，可能會(huì)對(duì)整體分析結(jié)果產(chǎn)生影響。

總之，VDR FokI rs2228570及BsmI rs1544410多態(tài)性與MetS遺傳易感性顯著相關(guān)，該結(jié)果對(duì)今后MetS的相關(guān)研究及臨床實(shí)踐有重要指導(dǎo)意義。但尚需通過更多大樣本、多種族以及設(shè)計(jì)合理的研究驗(yàn)證。