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血清長(zhǎng)鏈非編碼RNA Rpph1表達(dá)對(duì)2型糖尿病患者蛋白尿進(jìn)展的預(yù)測(cè)價(jià)值研究

2022-03-31 01:12吳翔毛盛程陳浪
關(guān)鍵詞:蛋白尿尿蛋白進(jìn)展

吳翔,毛盛程,陳浪

(浙江省立同德醫(yī)院 內(nèi)分泌科,浙江 杭州310012)

2 型糖尿病近年在我國的發(fā)病率逐步升高,隨病情加重產(chǎn)生各種急慢性并發(fā)癥,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,甚至威脅生命。糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy,DN)是最為常見的糖尿病微小血管并發(fā)癥,是終末期腎病的主要病因之一。該病存在復(fù)雜的代謝紊亂,且一旦進(jìn)展至終末期腎病,其治療比其他腎臟疾病更棘手[1-3]。早期預(yù)防DN 的發(fā)生及延緩其進(jìn)展具有重要的臨床意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)缺乏編碼蛋白質(zhì)的能力,被發(fā)現(xiàn)影響多種疾病的發(fā)生、發(fā)展。其中,lncRNA Rpph1 被發(fā)現(xiàn)可影響高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞炎癥因子表達(dá)[4],推測(cè)其參與慢性腎病的炎癥過程。目前關(guān)于lncRNA Rpph1 與DN 內(nèi)在聯(lián)系的研究較少,本研究以此為切入點(diǎn)探討lncRNA Rpph1 對(duì)DN 病情進(jìn)展的影響,旨在進(jìn)一步研究DN的發(fā)病機(jī)制,為后續(xù)治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

本研究為前瞻性研究。選取2016年1月—2018年1月浙江省立同德醫(yī)院內(nèi)分泌科因控制血糖重復(fù)住院治療的2 型糖尿病患者268 例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①明確的2 型糖尿病史;②首次及第2 次住院治療的時(shí)間間隔2~4年;③首次住院時(shí)留取血清樣本;④首次住院時(shí)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并1 型糖尿病或其他類型糖尿病;②合并糖尿病酮癥酸中毒或其他嚴(yán)重糖尿病合并癥;③合并甲狀腺功能異常、垂體瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤等其他內(nèi)分泌疾??;④合并急慢性基礎(chǔ)腎臟疾病;⑤合并惡性腫瘤;⑥入院前2 個(gè)月內(nèi)有激素、利尿劑應(yīng)用史。

1.2 方法

1.2.1 收集所有患者首次入院的臨床資料 性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、糖尿病家族史、糖尿病病程、吸煙、飲酒、合并癥、用藥情況、空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、 血肌酐(Scr)、 尿素氮(BUN)、血尿酸。

1.2.2 24 h 尿蛋白檢測(cè)及分組 微量蛋白尿是診斷DN 的標(biāo)志,指尿蛋白定量為30~300 mg/24 h。本研究通過24 h 尿蛋白檢測(cè),定義24 h 尿蛋白定量<30 mg 為無蛋白尿,24 h 尿蛋白定量≥30 mg 但<300 mg 為微量蛋白尿,24 h 尿蛋白定量≥300 mg 為大量蛋白尿。檢測(cè)所有患者首次、再次入院的尿蛋白定量。同一患者再次入院后,由之前的無蛋白尿進(jìn)展至微量蛋白尿,或者由微量蛋白尿進(jìn)展至大量蛋白尿,或者大量蛋白尿患者Scr 水平翻倍為蛋白尿進(jìn)展。以此為分組依據(jù)將患者分為蛋白尿進(jìn)展組(n=62)和蛋白尿非進(jìn)展組(n=206)。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量 留取初次入院患者的空腹外周靜脈血標(biāo)本5 mL,4℃下靜置30 min,室溫下3 000 r/min 離心15 min,取上清液冷凍保存于-80℃冰箱。Trizol(購自上海百蕊生物科技有限公司)提取血清樣本中的總RNA,參照AMV 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(購自上海索寶生物科技有限公司)說明書將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA 為模板,采用2×SYBR Green PCR Master Mix 進(jìn)行qRT-PCR,qRT-PCR 試劑盒購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司。以P53為內(nèi)參。引物序列檢測(cè)及合成由生工生物工程(上海)有限公司完成。lncRNA Rpph1 引物:正向5'-TTCGAACGATGATCGATGA-3',反向5'-CTGAAGCTAAGCTGAGTCG-3';P53 引 物:正 向5'-AGCTTGTCAGAACGTAGCT-3',反向5'-CTTGAA CGTTAGCGATAG-3'。反應(yīng)體系:cDNA 2 μL、2×SYBR Green PCR Master Mix 10 μL、正反向引物各0.6 μL、去離子水補(bǔ)足至20 μL。反應(yīng)條件:95℃變性15 s,60℃退火30 s,72℃延伸30 s,共40 個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3 次,取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比或率(%)表示,比較用χ2檢驗(yàn);繪制ROC 曲線;影響因素的分析采用多因素Logistic 回歸模型。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者首次入院的臨床資料比較

兩組患者首次入院的糖尿病病程、合并高血壓、使用二甲雙胍、Scr、血尿酸、lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組患者首次入院的性別、年齡、BMI、糖尿病家族史、吸煙、飲酒、合并冠心病、使用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)/血管緊張素受體拮抗劑(ARB)、使用胰島素、使用他汀類藥物、FBG、HbA1c、TC、TG、LDL-C、HDL-C、BUN 比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者首次入院的臨床資料的比較

2.2 蛋白尿進(jìn)展的影響因素分析

以再次入院后蛋白尿進(jìn)展為因變量(0=非蛋白尿進(jìn)展,1=蛋白尿進(jìn)展),將首次入院的臨床資料單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)(糖尿病病程、合并高血壓、使用二甲雙胍、Scr、血尿酸、lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量)為自變量,納入Logistic 回歸模型,結(jié)果:合并高血壓[=3.271(95% CI:1.864,3.872)]、使用二甲雙胍[=2.192(95% CI:1.253,2.413)]、Scr 水 平[=1.873(95% CI:1.211,2.063)]、血 酸水平[=2.321(95% CI:1.432,2.784)]、lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量[=2.621(95% CI:1.732,3.064)]是2 型糖尿病患者蛋白尿進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

表2 白蛋白尿進(jìn)展影響因素的多因素Logistic回歸分析參數(shù)

2.3 血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量對(duì)蛋白尿進(jìn)展的預(yù)測(cè)價(jià)值

首次入院血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)蛋白尿進(jìn)展的最佳截?cái)嘀禐?.564,曲線下面積(AUC)為0.800(95% CI:0.742,0.858),敏感性為67.48%(95% CI:0.517,0.784),特異性為82.26%(95%CI:0.684,0.935)。見圖1。

圖1 血清lncRNA Rpph1 mRNA相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)蛋白尿進(jìn)展的ROC曲線

3 討論

DN 的病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確,可能涉及遺傳、腎臟血流動(dòng)力學(xué)異常、高血糖致代謝異常、血管活性物質(zhì)代謝異常等多因素[5-7],但部分初始病情相似患者的疾病進(jìn)展速度存在較大差異,推測(cè)存在其他影響疾病進(jìn)展的因素。DN 患者開始出現(xiàn)蛋白尿并隨病情進(jìn)展尿蛋白定量逐步增加,是病情惡化的重要標(biāo)志[8-10]。本研究使用Logistic 回歸模型分析蛋白尿進(jìn)展的影響因素發(fā)現(xiàn):合并高血壓、使用二甲雙胍、Scr 水平、血尿酸水平、lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量高均是2 型糖尿病患者蛋白尿進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

高血壓是腎病發(fā)生的重要促發(fā)因素[11-12];二甲雙胍可能增加腎功能不全者乳酸酸中毒的風(fēng)險(xiǎn)[13-14];Scr 是最為重要的腎功能指標(biāo)之一,2 型糖尿病患者早期Scr 水平較高提示其腎功能存在潛在損傷,腎臟組織對(duì)高血糖帶來的一系列代謝紊亂的耐受度較弱[15-17];血尿酸也在不同研究中被證實(shí)是DN 進(jìn)展的重要因素之一,可能與高尿酸血癥加速腎血管內(nèi)皮功能紊亂、促進(jìn)腎臟炎癥反應(yīng)等機(jī)制相關(guān)[18-20]。

既往研發(fā)現(xiàn)lncRNA Rpph1 可誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷[21];且可促進(jìn)外泌體介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M2 極化,促進(jìn)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移[22],但關(guān)于lncRNA Rpph1 與糖尿病及DN 的研究較少。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量較高與DN 患者蛋白尿進(jìn)展密切相關(guān),這是繼張攀揚(yáng)等[4]的研究后,再次明確了lncRNA Rpph1 高表達(dá)對(duì)DN 病情進(jìn)展的意義。ZHANG 等[23]研究指出,在7 個(gè)與DN 相關(guān)的lncRNAs 中發(fā)現(xiàn)lncRNA Rpph1 表達(dá)顯著升高,且在高糖狀態(tài)下可通過Gal-3/Mek/Erk 信號(hào)通路促進(jìn)系膜細(xì)胞的增殖和炎癥反應(yīng)下調(diào)lncRNA Rpph1 表達(dá),提示lncRNA Rpph1 通過Gal-3/Mek/Erk 信號(hào)通路影響DN 的腎臟炎癥反應(yīng)。DN 的病情進(jìn)展與炎癥密切相關(guān),肖瑛等[24]也證實(shí)抑制炎癥反應(yīng)可減輕DN 大鼠的腎組織纖維化。有研究[25]報(bào)道,lncRNA Rpph1激活腎臟炎癥反應(yīng)的作用可能是其成為DN 病情近期進(jìn)展的重要原因,但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

lncRNA Rpph1 的表達(dá)變化在DN 蛋白尿進(jìn)展中起重要作用,本研究進(jìn)一步探討其對(duì)蛋白尿進(jìn)展的預(yù)測(cè)價(jià)值。ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn):首次入院血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)蛋白尿進(jìn)展的最佳截?cái)嘀禐?.564,AUC 為0.800,敏感性為67.48%,特異性為82.26%。以上結(jié)果提示,早期血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)對(duì)后續(xù)DN 患者蛋白尿進(jìn)展具有預(yù)測(cè)價(jià)值,可能成為后續(xù)DN 患者病情進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)篩查、針對(duì)性干預(yù)措施制訂的參考指標(biāo)。

綜上所述,血清lncRNA Rpph1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量是2 型糖尿病患者蛋白尿進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一,其對(duì)蛋白尿進(jìn)展具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

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