李博 石敏娟 付君鳴 甘雪峰 任嘯 周春梅 李婷 袁秋貞 *

(陜西省中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710003)

洋金花為茄科植物白花曼陀羅DaturametelL.的干燥花[1]，別名鬧洋花、鳳茄花、山茄花等，原產(chǎn)于熱帶地區(qū)，后從印度傳入我國，其藥用歷史悠久，最早詳細(xì)記載于《本草綱目》[2]。《中國藥典》2020年版記載洋金花的主要功效為平喘止咳、解痙定痛，用于哮喘咳嗽、脘腹冷痛、風(fēng)濕痹痛等。洋金花的主要化學(xué)成分為生物堿類、黃酮類、倍半萜類、木脂素類等[3-6]，其中生物堿類既是有效成分又是有毒成分，以東莨菪堿為主。

目前，洋金花在臨床上常用于治療銀屑病、慢性支氣管炎、哮喘、帕金森病、風(fēng)濕等疾病[7-12]。洋金花的藥理作用廣泛，臨床使用較多，但其安全性也不容忽視，近年來，時(shí)有洋金花中毒的報(bào)道[13-15]，臨床上內(nèi)服洋金花中毒的報(bào)道多由誤服或用量過度所導(dǎo)致，醫(yī)療機(jī)構(gòu)中錯(cuò)配情況也是導(dǎo)致洋金花中毒的原因之一。洋金花中毒癥狀較輕時(shí)一般表現(xiàn)為顏面及皮膚潮紅、躁動(dòng)不安等，中毒嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)言語不清、瞳孔放大、對光反射消失等癥狀,中毒成分主要是多種莨菪堿類化合物，以東莨菪堿為主。其主要治療方式為催吐、洗胃等，中毒嚴(yán)重者可采取注射新斯的明或毛果蕓香堿的辦法[16]。近年來關(guān)于洋金花的研究主要集中在成分測定及其藥理作用上，但實(shí)際應(yīng)用中，煎煮時(shí)間及不同配伍對洋金花有毒成分的影響尚不明確，本研究旨在建立不同煎煮時(shí)間與生甘草配伍對洋金花煎煮液生物堿成分的影響，探索洋金花煎煮的合理時(shí)間，為臨床安全使用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器 高效液相儀色譜儀(SHIMADZU公司，日本)、分析天平(SHIMADZU公司，日本)，電熱恒溫?zé)崴″?上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)、集熱式恒溫磁力攪拌器(鄭州長城科工有限公司)、純水機(jī)(重慶摩爾水處理有限公司)。

1.2藥品與試劑 對照品氫溴酸東莨菪堿購于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司(批號：批號CDAA-281197～20 mg，純度≥99.5%)，硫酸阿托品購于成都克瑪生物科技有限公司(批號CHB190125，純度≥98%)。乙酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、三乙胺(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)、乙腈(TEDIA公司，日本)均為色譜純。洋金花購于西安萬壽路藥材市場，經(jīng)陜西省藥劑科付君鳴副主任中藥師鑒定為茄科植物白花曼陀羅的干燥花；生甘草購于陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 VP-ODS色譜柱(150×2.0 mm，4.6 μm)，以去離子水溶液(0.2%冰醋酸和0.1%三乙胺)為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，流動(dòng)相A∶B=86∶14，柱溫室溫，波長215 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.2對照品溶液制備 精密稱取東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)液、阿托品標(biāo)準(zhǔn)液適量，依次將東莨菪堿及阿托品標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至0.005、0.010、0.025、0.050、0.075、0.100 mg·mL-1。

2.3供試品制備 供試品樣品的制備，分別稱取10g洋金花5份，碾碎，加入20倍質(zhì)量的自來水即200 mL水，加熱回流，時(shí)間分別為0.25 h、0.5 h、1.0 h、1.5 h、2 h、2.5 h。然后三層紗布過濾，濾液待用，濾渣加入20倍質(zhì)量的水再次以相同時(shí)間加熱回流，紗布過濾，合并兩次濾液，60 ℃揮干溶劑，即得不同煎煮時(shí)間供試品浸膏。稱取洋金花5 g與生甘草適量，按照1∶0、1∶0.5、1∶1、1∶1.5、1∶2質(zhì)量比加入，碾碎，加入20倍質(zhì)量的自來水，加熱回流2 h，然后三層紗布過濾，濾液待用，濾渣加入20倍質(zhì)量的水再次以相同時(shí)間加熱回流，紗布過濾，合并兩次濾液，60 ℃揮干溶劑，即得到不同比例生甘草配伍的供試品浸膏。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取東莨菪堿對照品適量，依次用去離子水配制東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.005、0.010、0.025、0.050、0.075、0.100 mg·mL-1。用去離子水配制阿托品標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.001、0.005、0.010、0.025、0.050、0.075、0.100 mg·mL-1。精密吸取混合對照品溶液適量，注入高效液相色譜儀中，測定東莨菪堿及阿托品的峰面積，結(jié)果以峰面積(Y)對對照品含量濃度(X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)(R2)見圖1及圖2。

圖1 東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 阿托品標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5樣本含量測定 取2.3項(xiàng)制備不同煎煮時(shí)間的供試品浸膏，配制為2 mg·mL-1濃度的水溶液，過濾后進(jìn)樣HPLC，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定不同煎煮時(shí)間下東莨菪堿及阿托品的濃度，見表1。取2.3項(xiàng)制備不同比例生甘草配伍的供試品浸膏，確定不同比例生甘草配伍后東莨菪堿及阿托品的濃度見表2。

表1 不同回餾時(shí)間下洋金花煎煮液生物堿成分變化

2.6方法學(xué)考察

2.6.1精密度試驗(yàn) 精密吸取取2.2項(xiàng)東莨菪堿及阿托品對照溶液10 μL，按照2.2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，分別重復(fù)7日。結(jié)果顯示東莨菪堿及阿托品峰面積的RSD分別為1.46%、0.45%，日間精密度良好。

2.6.2加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批樣片飲片，精密稱定，按上述煎煮液供試品制備的方法進(jìn)行提取2 h，提取液中加入東莨菪堿、阿托品對照品適量，采用上述高效液相測定方法進(jìn)行測定。根據(jù)測得量和加入量計(jì)算回收率，計(jì)算東莨菪堿及阿托品的加樣回收率分別為96.97%、96.59%，RSD分別為0.55%、3.71%。

表2 不同生甘草配伍洋金花煎煮液生物

3 討論

為了促使臨床用藥洋金花發(fā)揮充分的藥效活性，同時(shí)防止洋金花過量引起急性中毒，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用高效液相色譜法測定洋金花單獨(dú)煎煮不同時(shí)間以及與生甘草配伍后東莨菪堿及阿托品的含量變化，為臨床用藥提供參考。結(jié)果顯示，東莨菪堿及阿托品的含量隨煎煮時(shí)間的延長而呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。其中東莨菪堿在前1 h溶出快速增加，1 h之后緩慢增加，2 h以后溶出增加不明顯；阿托品前2 h溶出增加較快，2 h后增加較慢。由于洋金花中主要生物堿成分為東莨菪堿，因此其煎煮過程中生物堿溶出變化可視為東莨菪堿溶出變化，即前1 h溶出迅速，1 h后溶出緩慢。東莨菪堿注射液最大日劑量為肌肉注射1.5 mg，有研究表明，達(dá)到相同作用的口服劑量是肌肉注射的6～8倍[17]，故煎煮液中東莨菪堿的安全劑量大于9 mg，對應(yīng)洋金花2.47 g。中國藥典記載洋金花用法用量為0.3～0.6 g，宜入丸散，作卷煙分次燃吸每日用量不超過1.5 g。在洋金花中毒統(tǒng)計(jì)中，洋金花中毒劑量從0.8～100 g不等(包括兒童)，大多數(shù)中毒劑量大于6 g[18]。因此，洋金花中毒劑量顯著高于0.6 g，洋金花兩煎時(shí)間合計(jì)為30～40 min，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，此時(shí)生物堿成分溶出不充分，繼續(xù)延長煎煮時(shí)間可顯著增加生物堿溶出，因此建議在煎煮藥典規(guī)定劑量的洋金花時(shí)，可以延長煎煮時(shí)間1 h以提高療效。

當(dāng)洋金花與生甘草配伍后，東莨菪堿及阿托品的溶出量明顯增加，但東莨菪堿的溶出變化與生甘草劑量無明顯線性關(guān)系，阿托品的溶出隨著生甘草劑量的增加而增大，其可能機(jī)制是阿托品堿性較強(qiáng)與生甘草中的甘草酸結(jié)合導(dǎo)致溶出增加。當(dāng)生甘草劑量增大到洋金花2倍時(shí)，阿托品的溶出反而減少，這可能是因?yàn)殡S著配伍藥材的增加，溶劑水的相對量減少影響了阿托品的溶出。洋金花中毒除洗胃、導(dǎo)瀉、注射莨菪堿拮抗劑、對癥治療外，民間有用生甘草4兩煎服；生甘草及生綠豆各1～2兩搗爛開水泡服或煎服等方法解毒[19]。研究文獻(xiàn)表明，甘草解毒的主要成分是甘草甜素，其水解后生成的甘草次酸具有皮質(zhì)激素樣作用，增加肝臟的解毒作用[20]，因此我們推斷，甘草解毒作用與洋金花生物堿的溶出沒有關(guān)聯(lián)性。

生甘草具有清熱解毒，祛痰止咳的功效，其含有的甘草黃酮具有抗炎、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)、保護(hù)心臟等多種作用[21-24]。本研究結(jié)論表明生甘草可增加洋金花中主要生物堿成分的溶出，同時(shí)基于生甘草可能的減毒作用，臨床上在使用生甘草與洋金花配伍時(shí)，可以增加生物堿溶出從而增強(qiáng)治療效果，還可能減少中毒風(fēng)險(xiǎn)，相關(guān)作用機(jī)制有待更深入的研究。