符必述，劉 應，王迎香，周 波，彭 騰△

1.達州市中西醫(yī)結合醫(yī)院(達州 635002)；2.成都中醫(yī)藥大學 藥學院(成都 611137)

糖尿病發(fā)病率呈逐年增高趨勢，2型糖尿病占糖尿病患者90%以上。2型糖尿病控制欠佳易導致多種并發(fā)癥，甚至危及患者生命；控制好血糖，減少并發(fā)癥的發(fā)生是治療糖尿病的首要任務。目前，臨床上用于治療2型糖尿病的藥物種類較多，主要集中在化學藥物、天然藥物、中藥提取物和中成藥等。盡管藥物的臨床療效與不良反應交互出現(xiàn)，但天然藥物和中成藥因具有溫和的降糖作用或胰島素增敏作用，因而在臨床上的應用也日益廣泛[1-4]。中藥多糖因具有良好的降血糖作用[5]，在糖尿病的臨床治療中受到一定關注。

津力達顆粒是一種治療2型糖尿病的中成藥，是石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司研究開發(fā)的中藥8類新藥[6]，由人參、黃精、麩炒蒼術、苦參和麥冬等17味中藥組成，諸藥協(xié)同發(fā)揮脈絡通、脾津運、津自生、力自達的作用，以實現(xiàn)益氣養(yǎng)陰、健脾運津的功效。津力達顆粒治療2型糖尿病的主要機制為抗氧化應激、調節(jié)脂肪和蛋白質代謝紊亂、保護胰島β細胞和改善胰島β細胞功能缺陷，從而改善胰島素抵抗以控制血糖。該制劑在調節(jié)血糖的同時，以中醫(yī)整體觀念為理論指導進行治療，以延緩2型糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，對糖尿病所致心血管病變、周圍神經病變、腎臟病變等均有較好的臨床療效。津力達顆粒中含有人參多糖[7]、黃精多糖[8]、麥冬多糖[9]、地黃多糖[10]、茯苓多糖[11]等中藥多糖，該制劑臨床療效的發(fā)揮有賴于上述多糖的協(xié)同作用。本研究通過測定津力達顆粒多糖含量，旨在對其質量控制提供一定參考價值。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

UV-3100PC型可見光-紫外分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)；BAS124S-CW型電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)。津力達顆粒(國藥準字Z20050845，生產批號B2002001，規(guī)格每袋9 g)，購自石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司；無水葡萄糖(批號wkq20021305，純度≥98%)，購自四川省維克奇生物科技有限公司；乙醇均為分析純；水為蒸餾水。

1.2 實驗方法

1.2.1 多糖含量測定 1)對照品溶液制備：取無水葡萄糖對照品17.5 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，制得1 mL含無水葡萄糖0.175 mg的溶液。2)供試品溶液制備：精密稱定津力達顆粒0.25 g，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘渣用80%熱乙醇10 mL洗滌3次，將殘渣及濾紙置于燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘渣及燒瓶用熱水10 mL洗滌4次，合并濾液與洗液，放冷，轉移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。3)最大吸收波長確定：精密吸取對照品溶液1 mL于10 mL具塞試管中，加蒸餾水至2 mL，搖勻，分別加5%苯酚溶液1 mL，混勻，在冰水浴中迅速加入硫酸7 mL，搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min，取出，放入冰水浴中5 min，取出后恢復至室溫備用。取供試品溶液1 mL，按以上方法顯色。用紫外-可見分光光度儀掃描最大吸收波長。4)標準曲線制備：精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分別置于編號為1～7的10 mL具塞試管中，加蒸餾水至2 mL，同“3)”項操作方法。以相應試劑為空白，在最大波長吸收處測定吸光度。5)樣品測定：精密量取供試品溶液1 mL，置于編號為8的具塞試管中，加蒸餾水至2 mL，同“3)”項操作方法。以相應試劑為空白，在最大波長吸收處測定吸光度。

1.2.2 方法學考察 1)精密度考察：精密吸取對照品溶液0.2 mL按照相應方法顯色，連續(xù)測定6次，計算RSD值。2)穩(wěn)定性實驗：精密吸取供試品溶液0.2 mL按照相應方法顯色，在第0、30、60、90、100、120 min測定吸光度，計算RSD值。3)重復性考察：精密稱取0.25 g津力達顆粒6份，按照相應方法顯色，測定吸光度，計算RSD值。4)加樣回收率考察：精密吸取已知多糖含量的供試品溶液6份，分別加入葡萄糖標準品溶液，按照相應方法顯色，測定吸光度，計算回收率和RSD值。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件對津力達顆粒的多糖含量測定數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。標準曲線線性回歸方程及其他描述性分析(均值及相對標準偏差RSD)采用Excel 2010軟件處理，RSD值應符合《中國藥典》2020版第四部藥品質量標準分析方法驗證指導原則相關要求。檢驗水準α除特別說明外均設定為0.05。

2 結果

2.1 最大吸收波長

以相應試劑為空白，于分光光度計上進行波長掃描。在400～800 nm 的可見光范圍內最大吸收波長為495 nm。

2.2 線性關系

以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程為Y=0.059 4X+0.144 5，R2=0.999 4，表明無水葡萄糖對照品在濃度4.6～32.2 mg/L范圍內與吸光度線性關系良好(圖1)。

圖1 葡萄糖對照品標準曲線

2.3 方法學驗證

2.3.1 精密度實驗 精密吸取對照品溶液0.2 mL,按照相應方法顯色，連續(xù)測定6次吸光度;其中RSD值為0.02%，表明儀器精密度良好(表1)。

表1 津力達顆粒多糖含量測定精密度實驗結果

2.3.2 穩(wěn)定性實驗 精密吸取供試品溶液0.2 mL,按照相應方法顯色，在第0、30、60、90、100、120 min測定吸光度;其中RSD值為0.37%，表明顯色120 min內較穩(wěn)定(表2)。

表2 津力達顆粒多糖含量測定穩(wěn)定性實驗結果

2.3.3 重復性考察 精密稱取0.25 g津力達顆粒6份，按照相應方法顯色，測定吸光度。其中RSD值為1.63%，表明該方法重復性好(表3)。

表3 津力達顆粒多糖含量測定重復性實驗結果

2.3.4 加標回收率考察 精密吸取已知多糖含量的供試品溶液6份，分別加入葡萄糖標準品溶液，按照相應方法顯色，測定吸光度。計算出平均加樣回收率為98.42%，RSD值為1.46%(表4)。

表4 津力達顆粒多糖含量測定加樣回收率實驗結果

2.4 樣品含量測定

分別精密量取3份供試品溶液1 mL置于10 mL具塞試管中，按照1.2.1 4)方法項下的顯色方法顯色，測定吸光度，測定結果采用方差分析，平均吸光度值為0.145 1(P<0.05)。將3次測得樣品的吸光度平均值帶入線性方程Y=0.059 4X+0.144 5計算，即測得津力達顆粒多糖含量為9.26%(表5)。

表5 供試品吸光度測定結果

3 討論

植物多糖是一種廣泛存在于植物組織中的生物大分子，其是由多個單糖分子通過糖苷鍵聚合、脫水所形成的含酮基或醛基的多羥基聚合物，多以纖維素、淀粉、果膠等形式存在于植物體內[12]。目前，報道來源于藥用植物的中藥多糖種類已多達200種[13]。隨著多糖與糖尿病關系研究[14]逐漸深入，發(fā)現(xiàn)一些中藥多糖類成分在治療糖尿病方面具有安全性好、療效確切和不良反應少的優(yōu)勢，并對糖尿病并發(fā)癥具有改善作用；其降糖機制可能為植物多糖能促進胰島素分泌、改善胰島素抵抗，調節(jié)糖代謝酶的活性，促使外周組織對葡萄糖的作用從而抑制糖異生、促進肝糖元合成，增進免疫系統(tǒng)功能和抗氧化作用，上述多種途徑的協(xié)同作用提高了津力達顆粒的降血糖功效[15]。

2型糖尿病在祖國醫(yī)學中被稱為消渴病，認為主要病機為陰津耗傷、燥熱耗氣傷津，臨床治療則應以益氣養(yǎng)陰為主。津力達顆粒由人參、黃精、麩炒蒼術、苦參、麥冬、地黃、制何首烏、山茱萸、茯苓、佩蘭、黃連、知母、炙淫羊藿、丹參、粉葛、荔枝核和地骨皮17味中藥組成，方中人參健脾益氣，為全方君藥；黃精補脾益氣，黃連、苦參、蒼術滋陰清熱共為臣藥；丹參養(yǎng)陰暢脈，佩蘭、茯苓、麥冬、知母芳香化濕、養(yǎng)陰化瘀共為佐藥；使藥荔枝核可暢達脾氣，引藥上行；同時配伍淫羊藿、何首烏、山茱萸補肝腎之陰，固護下焦[16]。全方具有益脾氣、養(yǎng)脾陰、暢脾氣、溫脾陽、泄脾熱，通脈絡的配伍特點，諸藥協(xié)同作用共同發(fā)揮脈絡通、脾津運、津自生、力自達的作用[17]，從而實現(xiàn)益氣養(yǎng)陰，健脾運津的功效[18-21]。

目前津力達顆粒廣泛應用于2型糖尿病的臨床治療，對于輕型2型糖尿病，有單用津力達顆粒治療的成功案例[22]，也有聯(lián)合二甲雙胍、西格列汀、達格列凈及各類型胰島素治療的研究報道[23-26]，主要通過抗氧化應激、調節(jié)脂肪和蛋白質代謝紊亂、保護胰島β細胞和改善胰島β細胞功能缺陷，從而改善胰島素抵抗等機制控制血糖；同時對于高血脂、口干口渴等癥狀均有較好的臨床療效。有研究[27-30]報道，津力達顆粒發(fā)揮血糖調節(jié)作用的同時，聯(lián)合通心絡膠囊、貝那普利、羥苯磺酸鈣、硫辛酸等治療，可改善和延緩2型糖尿病的并發(fā)癥，對糖尿病所致的心血管病變、周圍神經病變、腎臟病變等均有較好的臨床療效。

本研究采用紫外-可見分光光度法測定了津力達顆粒多糖含量為9.26%。該方法在葡萄糖濃度4.6～32.2 mg/L范圍內，葡萄糖質量與峰面積線性關系良好，平均回收率為98.42%。本研究所建立的津力達顆粒多糖含量測定法簡單可行，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好。

綜上所述，津力達顆粒多糖含量較高，說明該制劑中的多糖類成分在用于臨床治療2型糖尿病中發(fā)揮了較大的作用。17味中藥組成的津力達顆粒除含有多糖類成分外，還含有較豐富黃酮類、皂苷類等成分。但本研究僅測定了津力達顆粒的多糖含量，因此，對制劑中黃酮類、皂苷類等成分的研究有待進一步深入。