呂曉芳，方立峰，陳佩

鄭州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，鄭州 450000

結(jié)直腸癌作為好發(fā)于中老年的惡性腫瘤之一，發(fā)病率、病死率均較高且呈逐年遞增趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[1-2]。相關(guān)研究表明，結(jié)直腸癌患者出現(xiàn)遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致結(jié)直腸癌患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[3]。因此，目前臨床治療中在給予結(jié)直腸癌根治術(shù)后，檢測(cè)是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是為患者制訂臨床治療方案及評(píng)估預(yù)后的重要因素。但目前臨床中尚無(wú)相關(guān)血液學(xué)指標(biāo)可精確預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，部分患者確診淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)已至發(fā)展期，導(dǎo)致患者生存期明顯縮短，預(yù)后不佳[4-5]。因此，尋求相關(guān)血液學(xué)指標(biāo)以提高對(duì)結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)效能成為近些年臨床實(shí)踐研究的熱點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA（microRNA，miRNA）可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞及基因功能，影響腫瘤細(xì)胞的分化過(guò)程[6]。miRNA-182可通過(guò)調(diào)控蛋白因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控因子17等干預(yù)腫瘤進(jìn)展[7]。miRNA-375對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1等靶基因的抑制作用有助于抑制腫瘤的進(jìn)展[8]。因此，本研究通過(guò)對(duì)82例結(jié)直腸癌患者進(jìn)行研究，分析miRNA-182、miRNA-375在結(jié)直腸癌患者外周血中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)效能，為臨床實(shí)踐提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年3月至2021年5月鄭州市第一人民醫(yī)院收治的82例結(jié)直腸癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》[9]中結(jié)直腸癌的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理診斷確診；②年齡＞18歲；③卡氏功能狀態(tài)（Karnofsky performance status，KPS）評(píng)分≥60分；④TNM分期為Ⅰa～Ⅱb期；⑤符合手術(shù)指征且均行結(jié)直腸癌根治術(shù)；⑥術(shù)前無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②心腦血管疾病；③自身免疫性疾病；④?chē)?yán)重外傷；⑤肝腎功能衰竭或合并其他重要器官功能障礙；⑥妊娠期或哺乳期女性；⑦已接受化療及其他一線(xiàn)抗腫瘤治療；⑧預(yù)期生存期＜3個(gè)月。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

①基礎(chǔ)資料：收集并整理患者的一般資料，包括年齡、性別、體重指數(shù)（body mass index，BMI）、基礎(chǔ)疾病（糖尿病、高血壓等）、吸煙史、飲酒史、腫瘤大小、分化程度、腫瘤生長(zhǎng)方式等。②血液學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：所有患者于治療前采集空腹靜脈血4 ml，離心后，棄上清，抽取血漿中總RNA，分離miRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）。以CT值為基礎(chǔ)，2-△△CT法計(jì)算miRNA-182及miRNA-375水平。miRNA-182、miRNA-375 均以 U6（正向引物：5'-CGATTTCGCGCCCTGGCTGG-3'，反 向 引 物 ：5'-ACCCGTAGAGTTCGACCTGGG-3'）作 為 內(nèi) 參 對(duì)照；miRNA-182正向引物：5'-CGTAGGCACGTCATTTCGCACGG-3'，反 向 引 物 ：5'-CTCGGTCAGCTGGCCTTGGCAC-3'；miRNA-375 正 向 引物：5'-CGTGCGCATGTCAGGTCTCTCTT-3'，反向引物：5'-CTCGATGGCCGGGCATGTCTGG-3'。另采集患者空腹靜脈血4 ml，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)患者的血肌酐（serum creatinine，Scr）、白細(xì)胞（white blood cell，WBC）水平。③治療方案：根據(jù)《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》[9]對(duì)結(jié)直腸癌患者行結(jié)直腸癌根治術(shù)后，進(jìn)行化療（靜脈滴注奧沙利鉑+口服卡培他濱）。④預(yù)后評(píng)估：術(shù)后隨訪1年，根據(jù)患者預(yù)后結(jié)果將其分為預(yù)后良好組（生存且未出現(xiàn)淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移）和預(yù)后不佳組（存在淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或死亡）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)評(píng)估，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Logistic回歸分析對(duì)影響因素進(jìn)行分析；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線(xiàn)評(píng)估外周血miRNA-182、miRNA-375水平對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后分析

82例結(jié)直腸癌患者中，預(yù)后不佳37例（預(yù)后不佳組），占45.13%，其中28例術(shù)后1年內(nèi)治療無(wú)效死亡，9例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；剩余45例患者預(yù)后良好（預(yù)后良好組），占54.87%。

2.2 臨床特征的比較

預(yù)后不佳組與預(yù)后良好組患者的年齡、性別、BMI、基礎(chǔ)疾病、吸煙史、飲酒史、腫瘤大小、Scr及WBC水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；預(yù)后不佳組患者分化程度為低分化、腫瘤生長(zhǎng)方式為浸潤(rùn)型所占比例及外周血miRNA-182、miRNA-375水平均高于預(yù)后良好組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 預(yù)后不佳組與預(yù)后良好組患者臨床特征的比較

2.3 結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良影響因素的Logistic回歸分析

以結(jié)直腸癌患者預(yù)后不佳為因變量（否=0，是=1），將分化程度、腫瘤生長(zhǎng)方式、miRNA-182水平、miRNA-375水平作為自變量，進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，腫瘤分化程度為低分化、腫瘤生長(zhǎng)方式為浸潤(rùn)型、外周血miRNA-182及miRNA-375水平偏高均為結(jié)直腸癌患者預(yù)后不佳的危險(xiǎn)因素（P＜0.01）。（表2）

表2 結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良影響因素的Logistic回歸分析

2.4 外周血miRNA-182、miRNA-375單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

ROC分析顯示，外周血miRNA-182、miRNA-375單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的靈敏度分別為62.16%、64.86%、72.97%，特異度分別為62.22%、64.44%、71.11%，曲線(xiàn)下面積（area under the curve，AUC）分別為0.80、0.82、0.88，外周血miRNA-182、miRNA-375單獨(dú)檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)效能低于二者聯(lián)合。（表3、圖1）

圖1 外周血miRNA-182、miRNA-375單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的ROC曲線(xiàn)

表3 外周血miRNA-182、miRNA-375單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

結(jié)直腸癌作為胃腸外科常見(jiàn)的惡性腫瘤，誘發(fā)因素較多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，且目前針對(duì)轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌尚無(wú)特效治療方案，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[10-12]。目前，臨床治療中通過(guò)給予結(jié)直腸癌根治術(shù)患者常規(guī)化療，可有效抑制腫瘤細(xì)胞的分化，延緩患者病情進(jìn)展，但對(duì)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者臨床療效較差，患者預(yù)后不佳[13-14]。因此，尋找腫瘤相關(guān)因子以提高結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)效能，有助于疾病進(jìn)展早期制訂預(yù)防淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療方案，從而改善預(yù)后，延長(zhǎng)患者的生存期[15]。相關(guān)研究顯示，miRNA作為一種進(jìn)化保守的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，通過(guò)對(duì)細(xì)胞及基因的調(diào)控作用能夠作用于腫瘤細(xì)胞的分化及進(jìn)展過(guò)程，進(jìn)而對(duì)病情的進(jìn)展產(chǎn)生影響[16]。

miRNA-182作為一種抑癌基因，后經(jīng)研究證實(shí)，在腫瘤組織中表達(dá)水平異常。此外可通過(guò)干預(yù)調(diào)節(jié)機(jī)體T輔助細(xì)胞17、白細(xì)胞介素-17等免疫細(xì)胞因子，導(dǎo)致機(jī)體免疫失衡[18]。因此，血漿miRNA-182水平對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌的不良預(yù)后具有一定的臨床意義。miRNA-375作為一種多功能miRNA，不僅參與肺功能表面活性劑、黏膜免疫、葡萄糖體內(nèi)平衡等過(guò)程，同時(shí)可通過(guò)抑制3-磷酸肌醇依賴(lài)性蛋白激酶、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體及星形細(xì)胞上調(diào)基因-1等抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與分化，發(fā)揮抗腫瘤作用[19-20]。此外，張斌忠等[21]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-375可通過(guò)阻礙細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)。因此，miRNA-375對(duì)結(jié)直腸癌的不良預(yù)后具有一定的臨床預(yù)測(cè)效能。本研究結(jié)果顯示，82例結(jié)直腸癌患者中，預(yù)后不佳37例（45.13%），提示結(jié)直腸癌患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率較高，且病死率較高，臨床實(shí)踐中仍需進(jìn)一步提高結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期預(yù)測(cè)效能，以制訂早期臨床干預(yù)方案，改善預(yù)后。本研究Logistic回歸分析結(jié)果顯示，分化程度低分化、腫瘤生長(zhǎng)方式為浸潤(rùn)型、外周血miRNA-182及miRNA-375水平偏高均為結(jié)直腸癌患者預(yù)后不佳的危險(xiǎn)因素，提示分化程度低、浸潤(rùn)型腫瘤生長(zhǎng)方式及外周血miRNA-182、miRNA-375水平偏高的結(jié)直腸癌患者更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等預(yù)后不佳情況。相關(guān)研究顯示，低分化的細(xì)胞癌變程度更深，加之浸潤(rùn)型生長(zhǎng)方式導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞更易侵入周?chē)M織間隙及淋巴管等，從而導(dǎo)致淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后不佳[22-23]。本研究外周血miRNA-182、miRNA-375單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的AUC分別為0.80、0.82、0.88，且外周血miRNA-182、miRNA-375水平單獨(dú)檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)效能低于二者聯(lián)合，提示外周血miRNA-182、miRNA-375水平均對(duì)結(jié)直腸癌患者的預(yù)后具有一定的預(yù)測(cè)效能，且聯(lián)合檢測(cè)效能更高。

綜上所述，外周血miRNA-182、miRNA-375水平偏高的結(jié)直腸癌患者更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等預(yù)后不佳情況，且miRNA-182、miRNA-375水平均對(duì)結(jié)直腸癌患者的預(yù)后具有一定的預(yù)測(cè)效能。