李娜，薛惠英，裴慧慧

安陽市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 安陽 455000

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，早期 臨床癥狀不明顯，大多數(shù)患者確診時已處于晚期，5年生存率低于30%[1]。因此，早期診斷和早期治療對改善卵巢癌患者預后和延長患者的生存期具有積極意義。尋找有效的血清標志物對卵巢癌進行早期診斷是目前臨床研究的重點。糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）是診斷卵巢癌最常用的指標，但僅將CA125作為初始篩選指標可能會引起漏診和誤診[2]。人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是近年來新發(fā)現(xiàn)的卵巢癌標志物，其靈敏度和特異度均優(yōu)于CA125[3]。人激肽釋放酶10（human kallikrein 10，HK10）屬于絲氨酸蛋白酶家族，基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)HK10在卵巢癌中異常表達[4]。DJ-1是在上皮性卵巢癌中特異表達的蛋白質(zhì)，被認為是診斷卵巢癌的潛在標志物[5]。但目前關(guān)于HK10、DJ-1與卵巢癌的關(guān)系仍缺乏足夠的證據(jù)。本研究探討了HK10、DJ-1、CA125、HE4在卵巢癌患者血清中的表達及其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年4月于安陽市人民醫(yī)院接受治療的卵巢癌患者。納入標準：①經(jīng)病理學檢查確診為卵巢癌；②初治患者；③未進行過放化療等治療。排除標準：①合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②合并肝腎功能障礙、自身免疫性疾病、凝血功能障礙等疾?。虎廴焉锲诨虿溉槠谂?。依據(jù)納入和排除標準，本研究共納入86例卵巢癌患者，年齡31～71歲，平均（55.40±7.20）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期55例，Ⅲ～Ⅳ期31例；腫瘤直徑2～8 cm，平均（5.01±1.00）cm；病理類型：漿液性腺癌38例，黏液性腺癌32例，內(nèi)膜樣腺癌16例；分化程度：中高分化50例，低分化36例。另選取同期收治的卵巢良性病變患者50例，年齡30～68歲，平均（53.21±8.04）歲；病理類型：卵巢肌瘤31例，卵巢囊腫19例。卵巢癌和卵巢良性病變患者的年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

抽取患者的空腹肘靜脈血5 ml，3000 r/min離心5 min，離心半徑為9 cm，-80℃冰箱保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清 HK10、DJ-1、HE4水平。HK10試劑盒購自北京方程嘉鴻科技有限公司，DJ-1試劑盒購自武漢博士康生物工程有限公司，HE4試劑盒購自瑞典康乃格診斷公司。采用化學發(fā)光法檢測血清CA125水平，試劑盒由北京生物制品研究所提供。嚴格按照試劑盒說明書進行整個操作過程。用于檢測的酶標儀購自美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析血清HK10、DJ-1、CA125、HE4單獨及聯(lián)合檢測對卵巢癌的診斷價值，采用Pearson相關(guān)分析法進行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌和卵巢良性病變患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比較

卵巢癌患者的血清 HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明顯高于卵巢良性病變患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 卵巢癌和卵巢良性病變患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比較

2.2 不同臨床特征卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比較

不同年齡、腫瘤直徑、病理類型卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同分化程度卵巢癌患者的血清CA125、HE4水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期的卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義（t=5.155、6.165、3.879、2.827，P＜0.01）；低分化卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1水平均明顯高于中高分化卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.077、5.710，P＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比較（n=86）

2.3 卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的相關(guān)性分析

對卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，HK10和DJ-1水平呈正相關(guān)（r=0.648，P＜0.05），余未見相關(guān)性。

2.4 血清HK10、DJ-1、CA125、HE4單獨及聯(lián)合檢測對卵巢癌的診斷價值

血清HK10、DJ-1、CA125、HE4單獨檢測診斷卵巢癌的ROC曲線下面積分別為0.857、0.873、0.852、0.794，P＜0.05，截斷值分別為 1.00 mg/L、10.50 μg/L、195.60 IU/L、130.50 pmol/L，靈敏度分別為74.00%、76.00%、74.50%、71.20%，特異度分別為70.00%、74.00%、69.50%、65.50%。聯(lián)合檢測診斷卵巢癌的ROC曲線下面積為0.930，靈敏度和特異度分別為79.50%和76.00%。（圖1）

圖1 血清HK10、DJ-1、CA125、HE4單獨及聯(lián)合檢測診斷卵巢癌的ROC曲線

3 討論

卵巢癌發(fā)病初期無明顯臨床癥狀，卵巢的胚胎發(fā)育和內(nèi)分泌功能較為復雜，大多數(shù)卵巢癌確診時已處于晚期，患者的病死率很高，因此提高卵巢癌的早期診斷率并采取及時有效的臨床干預和治療對提高患者的生存率具有重要意義[6]。目前卵巢癌的診斷方法主要包括婦科檢查、腫瘤標志物檢測、影像學檢查、細胞學和組織學檢查等，但這些檢查或檢測具有局限性[7]。臨床中常通過檢測卵巢癌標志物提高診斷和治療效果，改善患者預后。CA125是胚胎上皮細胞分泌的一種高分子糖蛋白，在正常情況下其血清含量較低，當卵巢中發(fā)生惡性病變時，CA125水平會顯著增加，可用于上皮性卵巢癌的診斷[8]。CA125與卵巢癌細胞的產(chǎn)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，對晚期卵巢癌更加敏感，但卵巢良性病變（如子宮內(nèi)膜異位癥）、乳腺癌、肺癌和其他病理變化也可能使CA125水平異常升高[9]，在單獨使用其診斷卵巢癌時特異度差且準確度低，需要聯(lián)合其他較為靈敏和特異的標志物進行卵巢癌的早期診斷。

HE4是一種新的潛在腫瘤標志物，其在正常女性的生殖道、乳腺、呼吸道、腎遠曲小管、結(jié)腸和唾液腺中均表達，在正常卵巢組織中不表達，當卵巢組織發(fā)生癌變時，血清HE4水平異常升高[9]。研究發(fā)現(xiàn)，與CA125相比，HE4診斷卵巢癌的特異度較高，但靈敏度較低[10]。HK10是由KLK10基因編碼的相對分子量為30 kD的分泌型絲氨酸蛋白酶，包含276個氨基酸。HK10可調(diào)節(jié)細胞表面受體介導的細胞生長和凋亡。在正常細胞的生長過程中，HK10主要在母乳和腦脊液等生物液體中表達，但在心臟、胸腺、骨骼肌、肝臟和腎臟等部位低表達或不表達[11-12]。研究表明，HK10的異常表達與乳腺癌和其他內(nèi)分泌惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，并且與惡性腫瘤細胞的脫落、遷移和侵襲密切相關(guān)，其主要機制可能與雌激素受體和孕激素受體有關(guān)[13]。DJ-1基因位于1p36染色體上，長度為24 kb。DJ-1蛋白單體在人的腎臟、胰腺、肝臟、肌肉組織和其他組織中廣泛表達，其二聚體形式在細胞轉(zhuǎn)錄、相互轉(zhuǎn)化和氧化應(yīng)激等生理活動中具有重要作用[14-15]。

本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明顯高于卵巢良性病變患者（P＜0.01）。提示卵巢癌和卵巢良性病變患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平存在差異，上述指標可能參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程，與有關(guān)研究結(jié)果一致[16-18]。目前有關(guān)血清標志物與卵巢癌患者臨床特征關(guān)系的研究較少。本研究分析了血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平與卵巢癌患者臨床特征的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125和HE4水平均明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期的卵巢癌患者，低分化卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1水平均明顯高于中高分化卵巢癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。提示HK10、DJ-1、CA125、HE4均參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。HK10、DJ-1、CA125、HE4水平越高，患者的預后越差。因此及早對患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平進行監(jiān)測有助于臨床評估卵巢癌的嚴重程度。本研究對卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，HK10和DJ-1水平呈正相關(guān)。表明這兩種標志物可能通過表達上調(diào)發(fā)揮協(xié)同作用，并參與卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。推測可能通過信號通路的交叉點，HK10和DJ-1共同促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。目前臨床對早期卵巢癌診斷的研究主要集中于尋找靈敏度和準確度較高的血清標志物，常用的血清標志物CA125、HE4不能令人滿意[19-20]。因此本研究通過聯(lián)合檢測多種血清標志物以提高陽性檢出率和靈敏度。本研究進一步評估血清 HK10、DJ-1、CA125、HE4單獨及聯(lián)合檢測對卵巢癌的診斷價值，結(jié)果顯示，4種指標聯(lián)合診斷時靈敏度和準確度均明顯提高，提示早期的聯(lián)合檢測可以最大程度地降低漏診率和誤診率，提高卵巢癌早期診斷的準確性。然而本研究病例數(shù)較少，以后將加大樣本量，并分析上述血清標志物與卵巢癌患者預后的關(guān)系。

綜上所述，卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均較高，并與患者的臨床特征有關(guān)。