■袁汝喜 沈水寶 吳克寧 韋曉芳 雷麗莉 張淑芳 章岳軍

（廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530000）

育雛是三黃雞養(yǎng)殖中最為重要的環(huán)節(jié)之一，三黃雞育雛期免疫器官、腸道及腸道菌群發(fā)育尚不夠成熟、穩(wěn)定[1]；消化腺不發(fā)達(dá)，消化能力弱[2]；極易受到外界病原體的侵害，造成生病或死亡，直接影響著經(jīng)濟(jì)效益。為防止雛雞發(fā)病，通常在雛雞開口階段就飼喂治療型抗生素[3]。但抗生素的濫用除了引起耐藥性問(wèn)題，更嚴(yán)重影響了腸道微生物的平衡，從而影響免疫器官的發(fā)育，造成雞自身抗病力下降[4]，對(duì)后期生產(chǎn)造成不可逆影響[5]，形成惡性循環(huán)。

日糧發(fā)酵后降低了抗?fàn)I養(yǎng)因子和毒素，將大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)降解為小分子物質(zhì)利于消化吸收[6-9]，可提高動(dòng)物免疫力、預(yù)防疾病。濕態(tài)發(fā)酵飼料保留了日糧中活性有益菌、消化酶、維生素等，并富含活性小肽、氨基酸、免疫增強(qiáng)因子、促生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì)，可使腸道有益菌群生長(zhǎng)并定植為優(yōu)勢(shì)菌，對(duì)提高抵抗病原體感染的能力有著重要的作用[10]，一定程度地減少了抗生素的使用[11]。

一些研究表明發(fā)酵飼料熱烘干大大降低了有益菌的活性，損失了有益發(fā)酵代謝產(chǎn)物，增加了生產(chǎn)費(fèi)用，最終使用成本提高。

本試驗(yàn)旨在研究添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)育雛期三黃雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血清抗氧化等指標(biāo)的影響，為育雛期三黃雞添加濕態(tài)發(fā)酵飼料提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì)

選取健康、體重?zé)o顯著差異的1日齡三黃雞雛雞400 只，隨機(jī)分為5 組，每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20 只雞。對(duì)照組飼喂無(wú)發(fā)酵飼料的基礎(chǔ)飼糧（F0 組），基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1994）[12]營(yíng)養(yǎng)需要配制；試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加10%（F10 組）、15%（F15 組）、20%（F20 組）和25%（F25 組）濕態(tài)發(fā)酵飼料的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期42 d，發(fā)酵飼料由廣西大富華農(nóng)牧飼料有限公司提供。基礎(chǔ)日糧組成見表1，營(yíng)養(yǎng)水平見表2。

表1 基礎(chǔ)日糧組成(風(fēng)干基礎(chǔ)，%)

表2 飼糧發(fā)酵前后營(yíng)養(yǎng)水平比較（風(fēng)干基礎(chǔ)，%）

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間肉仔雞自由采食、充足飲水，免疫接種（見表3）、光照、通風(fēng)均按照廣西富鳳農(nóng)牧集團(tuán)飼養(yǎng)管理規(guī)程進(jìn)行。

表3 富鳳三黃雞育雛期基礎(chǔ)免疫程序

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能

每日觀察并記錄各組投料、剩料量，計(jì)算每只雞的平均日采食量，每日填寫飼養(yǎng)日記。

于1日齡和42日齡每個(gè)重復(fù)進(jìn)行個(gè)體空腹稱重，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期內(nèi)的采食量，計(jì)算各組的平均體重（ABW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）。

1.3.2 血清生化、抗氧化指標(biāo)、AI-H5-11、AI-H5-12、AI-H9N2、AI-H7N9、ND抗體的檢測(cè)

42日齡雞空腹，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，每只翅下靜脈抽血5 mL，靜置30 min，用離心機(jī)4 000 r/min離心5 min分離血清，置于干冰中保存?zhèn)溆谩?/p>

采用ELLSA 測(cè)定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、免疫球蛋白G(IgG）、免疫球蛋白A(IgA）、免疫球蛋白M(IgM）、尿素氮（UN）、丙二醛（MDA）含量、總抗氧化能力（T-AOC）以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活力。

AI-H5-11、AI-H5-12、AI-H9N2、AI-H7N9、ND抗體檢測(cè)方法如下：于微量血凝板的每行每孔加入生理鹽水50 μL，每行第1孔加入待檢血清50 μL，用微量移液器混勻后吸出50 μL加入第2孔，混勻后吸出50 μL加入第3孔，以此類推，稀釋至第11孔，吸取50 μL棄去。第12孔不加血清。每行1～12孔加入濃度為4個(gè)血凝單位的抗原，每孔50 μL；每行1～12孔加入1%紅細(xì)胞，輕輕振蕩，37 ℃下作用15-20 min，判定血凝抑制效價(jià)。

1.3.3 免疫器官指數(shù)

42日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取健康雞1只，屠宰后分離脾臟、胸腺和法氏囊并稱重，測(cè)定免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（mg/g）=免疫器官重/活體重

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理與分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件的oneway ANOVA 進(jìn)行顯著性分析，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，以P<0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以P<0.01為差異極顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段生長(zhǎng)性能的影響（見表4）

表4 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段生長(zhǎng)性能的影響

由表4 可知，與F0 組相比，F(xiàn)10、F15、F20、F25 組體重、平均日增重均有所提高，但差異不顯著（P>0.05）；平均日采食量各組均顯著提高（P<0.05），其中F25組最高；料重比F20組最低（P<0.05）。

2.2 濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段免疫器官指數(shù)的影響（見表5）

表5 濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段免疫器官指數(shù)的影響（mg/g）

由表5 可知，隨著濕態(tài)發(fā)酵飼料添加比例的提高，各組胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)有升高的趨勢(shì)，這說(shuō)明濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)機(jī)體的免疫機(jī)能有一定的增強(qiáng)作用。

2.3 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段抗體水平的影響（見表6）

表6 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段抗體水平的影響（Log2）

由表6 可知，F(xiàn)20 組抗體水平均高于F0 組，其中F20組ND抗體水平及F25組AI-H7N9抗體水平較F0組差異顯著（P<0.05），較高的抗體水平也能對(duì)雛雞提供更好的臨床保護(hù)。

2.4 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段血清生化指標(biāo)的影響（見表7）

表7 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段血清生化指標(biāo)的影響

由表7 可知，隨著濕態(tài)發(fā)酵飼料添加量的增加，各組血清生化指標(biāo)變化很大。與F0 組相比，其中F20、F25 組ALB 差異極顯著提高（P<0.01），其余各檢測(cè)項(xiàng)目也有類似情況。

2.5 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段血清抗氧化指標(biāo)的影響（見表8）

表8 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞階段血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表8可知，F(xiàn)15、F20、F25組MDA含量顯著降低（P<0.05）；F20 組的SOD 含量顯著高于F0 組（P<0.05）；F25 組的GSH-Px、CAT、T-AOC 含量顯著高于F0組（P<0.05）。

3 討論

3.1 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞育雛期生長(zhǎng)性能的影響

生長(zhǎng)性能反映著雞群的營(yíng)養(yǎng)和健康狀況。有研究表明：飼料發(fā)酵后乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌的數(shù)量增加極顯著，發(fā)酵將大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)降解為小分子物質(zhì)利于消化吸收，彌補(bǔ)了三黃雞育雛期消化系統(tǒng)發(fā)育不完善的問(wèn)題，阻礙了沙門氏菌等有害菌的定植[13]，對(duì)雛雞有促生長(zhǎng)作用[14]；飼料發(fā)酵產(chǎn)生的有益小分子酸的含量顯著提高，降低pH[15]，抑制有害菌的生長(zhǎng)，改善腸道健康[16]；酸香的氣味可以提高采食量[17]。本試驗(yàn)結(jié)果與以往研究結(jié)果相似，添加濕態(tài)發(fā)酵飼料可以顯著提高平均日采食量，F(xiàn)20、F25組料重比顯著降低（P<0.05）。

3.2 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞育雛期免疫功能的影響

脾臟（外周免疫器官）是血管通路上的重要過(guò)濾器官，含有大量的淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答的重要部位；胸腺、法氏囊（中樞免疫器官），二者是T、B 淋巴細(xì)胞發(fā)育、分化和成熟的主要場(chǎng)所[18]。一般認(rèn)為免疫器官指數(shù)的變化可間接表明機(jī)體的免疫狀況。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與F0 組相比，F(xiàn)20、F25 組法氏囊指數(shù)顯著增高（P<0.05）；F20 組胸腺指數(shù)顯著高于F0 組（P<0.05）；F20組ND 抗體水平顯著高于F0 組（P<0.05）；F25 組AIH7N9 的抗體水平顯著高于F0 組（P<0.05），具有促進(jìn)作用，對(duì)畜禽阻擋病菌入侵發(fā)揮重要作用[19]，這與Naji等[20]、Wu等[21]的研究結(jié)果相似。

免疫球蛋白在血液中的含量是反映機(jī)體免疫功能的重要標(biāo)志。IgG是動(dòng)物血清中含量最高的免疫球蛋白，是體液免疫應(yīng)答最主要的抗體，能夠持續(xù)地發(fā)揮抗病毒、抗毒素以及抗菌的免疫學(xué)活性，多在動(dòng)物機(jī)體自然感染或者人工免疫后產(chǎn)生；IgM 含量較少，是動(dòng)物機(jī)體接觸抗原后產(chǎn)生的最早的免疫球蛋白，主要由B淋巴細(xì)胞和脾臟產(chǎn)生；IgA在血清中含量較少，其主要參與黏膜免疫[22]。本試驗(yàn)表明，與F0 組相比，F(xiàn)20、F25 組血清中IgM、IgG 含量極其顯著的提高（P<0.01），IgA的含量顯著增加（P<0.05）。綜合分析，本試驗(yàn)中添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞雛雞產(chǎn)生的免疫性能優(yōu)于F0 組，明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫性能和抗病力，提高雛雞對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力，與徐輝等[23]、阮棟等[24]、張寶榮等[25]、劉淑嬌等[26]研究結(jié)果一致。血清IgM和IgG水平的升高也可能與發(fā)酵過(guò)程中形成的小肽[27]或者益生菌刺激與活化腸黏膜有關(guān)的淋巴組織誘發(fā)其生成淋巴細(xì)胞來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答有關(guān)[28]。

3.3 添加濕態(tài)發(fā)酵飼料對(duì)三黃雞育雛期血清生化和抗氧化指標(biāo)的影響

血清白蛋白和總蛋白等指標(biāo)可以反映動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)利用情況和氨基酸的代謝水平[29]。總蛋白和白蛋白的含量與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況、蛋白質(zhì)的代謝密切相關(guān)，其含量的增加，表明肝臟中蛋白質(zhì)的代謝水平增強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加濕態(tài)發(fā)酵飼料可以提高肉雞血清GLO、TP和ALB水平，表明發(fā)酵飼料可以使機(jī)體代謝活動(dòng)旺盛，促進(jìn)蛋白質(zhì)的沉積。這與胡虹等[30]、劉輝等[31]的研究結(jié)果一致。

機(jī)體總抗氧化能力降低常常導(dǎo)致各種疾病的產(chǎn)生[32]。SOD能將超氧陰離子自由基O2-·快速轉(zhuǎn)化為分子氧和過(guò)氧化氫[33]，是動(dòng)物體內(nèi)清除自由基的第一道防線；GSH-Px和CAT轉(zhuǎn)化為水和氧氣[34]，是動(dòng)物體內(nèi)清除自由基的第二道防線。T-AOC 含量上升表明機(jī)體整體抗氧化能力提高[35]。生物體內(nèi)的脂質(zhì)和自由基會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng)生成MDA，MDA 會(huì)對(duì)線粒體關(guān)鍵酶的活性、線粒體呼吸鏈復(fù)合物造成影響。MDA的含量越高說(shuō)明細(xì)胞的損傷程度越高，抗氧化能力越弱[36]。

F15、F20、F25 組中T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT的含量均高于F0 組，各組MDA 含量均低于F0 組，說(shuō)明總抗氧化能力顯著提高，這與Li等[37]研究結(jié)果相似。

4 結(jié)論

①育雛期三黃雞添加濕態(tài)發(fā)酵飼料，可提高雛雞的采食量，提高蛋白質(zhì)的代謝水平，降低料重比。

②育雛期三黃雞添加濕態(tài)發(fā)酵飼料，可使法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著提高；免疫球蛋白顯著提高；ND、AI-H7N9的抗體水平顯著提升，明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫性能和抗病力，提高雛雞對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力。

③育雛期三黃雞添加濕態(tài)發(fā)酵飼料，可使總抗氧化能力顯著提高。