劉 穎，黃艷艷，詹宇威，詹 鋒

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性自身免疫性炎癥疾病，其典型特征是滑膜炎、關(guān)節(jié)破壞和全身性炎癥。RA不僅影響了患者的日常生活，而且還給家庭和社會帶來了沉重負擔(dān)[1-3]。B7/CD28共刺激通路是主要的T細胞共刺激途徑之一，在多種自身免疫性疾病中發(fā)揮作用，能夠影響共刺激信號分子之間的相互作用和細胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。細胞毒性淋巴細胞抗原4免疫球蛋白(cytotoxic T lymphocyte antigen-4 immunolobulin，CTLA-4Ig)是一種融合蛋白，由CTLA-4與IgG Fc段基因重組而成，能夠通過與B7結(jié)合來阻斷B7/CD28共刺激通路，從而誘導(dǎo)T細胞失能[4]，目前已用于自身免疫性疾病和排斥反應(yīng)的研究中，并取得了顯著成效[5-6]。該研究在構(gòu)建RA小鼠模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用CTLA4-Ig阻斷B7/CD28以探討其在RA中的作用，以期為臨床診療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物DBA/1小鼠40只，雄性，6～8 周齡，體質(zhì)量18～20 g，由海南醫(yī)學(xué)院實驗動物中心飼養(yǎng)于SPF環(huán)境，溫度為(20±3) ℃，相對濕度為45%，明暗交替12 h/12 h，期間自由飲水飲食。本實驗通過海南省人民醫(yī)院動物倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 主要材料CTLA4-Ig購自美國BD Pharmingen公司，Ⅱ型膠原、弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑購自美國 Chondrex 公司，ELISA檢測試劑盒購自南京建成生物研究所，HE染色試劑盒購自北京索萊寶生物公司，TRAP染色試劑盒購自美國Sigma公司，TRIzol試劑盒購自南京諾維贊生物公司，Prime ScriptTMRT reagent Kit和SYBR Premix Ex TaqTMII購自日本Takara公司，BCA蛋白檢測試劑盒、ECL化學(xué)發(fā)光液和免疫組織化學(xué)染色試劑盒購自上海碧云天生物研究所，抗體骨保護素(osteoprotegerin，OPG)、核因子κB受體活化因子(receptor activator of NF-κB，RANK)、核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)、p65、p-p65、p-IκBα、IκBα以及核因子κB(nuclear factor κB，NF-κB)均購自英國Abcam公司，肌動蛋白(β-actin)和辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG購自北京中杉金橋生物公司。其他試劑均為國內(nèi)市售分析純。

1.3 方法

1.3.1小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型的制備 采用Ⅱ型膠原誘導(dǎo)法建立小鼠CIA模型，用固定器固定小鼠尾根部，取100 μl濃度為1 mg/ml的混合牛Ⅱ型膠原和弗氏完全佐劑的乳化劑，在小鼠尾根部處皮下進針注射，進行初次免疫；在第一次免疫后21 d，將100 μl濃度為1 mg/ml的混合牛Ⅱ型膠原與弗氏不完全佐劑的乳化劑再次于小鼠尾根部皮下進針注射，進行二次免疫。

1.3.2小鼠分組與治療 40只DBA/1小鼠采用隨機數(shù)字表法分為4組，包括正常對照組、模型組、CTLA4-Ig低劑量組和CTLA4-Ig高劑量組，除正常對照組外，其余三組小鼠均制備膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型。在二次免疫結(jié)束后第0、5、10天，CTLA4-Ig低劑量組和CTLA4-Ig高劑量組的小鼠分別以50、100 mg/kg的劑量進行腹腔注射CTLA4-Ig溶液，同時，給予正常對照組和模型組的小鼠腹腔注射等量生理鹽水。

1.3.3足腫脹度測量與關(guān)節(jié)炎評分 在二次免疫結(jié)束后第0、10、20天，采用游標(biāo)卡尺測定各組小鼠的同側(cè)后足掌厚度，每次重復(fù)測量3次。同時，二次免疫結(jié)束后第0、5、10、15、20天進行關(guān)節(jié)炎評分，評分標(biāo)準(zhǔn)為：0分，正常，無紅腫；1分，小趾關(guān)節(jié)輕微腫脹，有紅斑；2分，趾關(guān)節(jié)、足趾中度腫脹；3分，踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹，紅腫明顯；4分，包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪嚴(yán)重腫脹，四肢評分和計為關(guān)節(jié)炎指數(shù)。

1.3.4ELISA法檢測各組小鼠血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)和白細胞介素-17(interleukin-17，IL-17)的水平 在二次免疫結(jié)束后第20天，測量完足腫脹度和關(guān)節(jié)炎評分后，通過各組小鼠眼球取血，收集2 ml血液，室溫靜置2 h，再以3 000 r/min離心10 min，留取上清液，保存于-80 ℃冰箱。ELISA法分別檢測各組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17的水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。

1.3.5Micro-CT掃描小鼠膝關(guān)節(jié) 采血結(jié)束后脫頸處死各組小鼠，取兩側(cè)膝關(guān)節(jié)，剔除周圍軟組織，使用高分辨顯微 CT SkyScan 1076 對小鼠膝關(guān)節(jié)進行掃描，獲得圖片后，CT Analyzer軟件分析骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)，包括骨密度(bone mineral density，BMD)、骨小梁厚度(trabecular thickness，Tb.Th)、骨體積(bonevolume，BV)和骨體積分數(shù)(bone volume fraction，BV/TV)。

1.3.6HE染色觀察組織病理形態(tài)學(xué)改變 將分離的各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織置于4%多聚甲醛，于室溫下固定24 h后，放入10% EDTA溶液(pH=8.0)中脫鈣1個月。梯度乙醇溶液脫水后，常規(guī)石蠟包埋，并切成5 μm厚的切片，進行HE染色。通過二甲苯脫蠟和梯度乙醇溶液脫水，加入蘇木精染色5 min，0.1%氨水中分色數(shù)秒鐘，放入伊紅染液中染色2 min，切片經(jīng)乙醇溶液脫水、二甲苯透明后，滴加中性樹膠進行封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理形態(tài)學(xué)改變。

1.3.7TRAP染色檢測各組小鼠膝關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞區(qū)破骨細胞表達 取制備的各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織切片，置于60 ℃烘箱中烘烤30 min，經(jīng)過脫蠟脫水后，加入2.5%的戊二醛于4 ℃固定10 min，雙蒸水清洗干凈，加入TRAP染液，置于暗盒中，37 ℃避光孵育1 h，雙蒸水清洗后，蘇木精復(fù)染2 min，自然條件下晾干，中性樹膠進行封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察并計數(shù)破骨細胞數(shù)目，TRAP陽性細胞染色呈紫紅色。

1.3.8實時熒光定量PCR 取各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織敲碎，加預(yù)冷的TRIzol試劑研磨，提取總RNA。利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)， 獲得cDNA，通過實時熒光定量PCR實驗檢測組織中骨保護素(osteoprotegerin，OPG)、核因子κB受體活化因子(receptor activator of NF-κB，RANK)、核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL) mRNA表達情況，具體按照SYBR Premix Ex TaqTMII說明書操作，以GAPDH為內(nèi)參基因。擴增條件為：95 ℃ 3 min；95 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s，40個循環(huán)。引物由上海生工生物工程公司合成，序列見表1。2-ΔΔCt法來計算各基因mRNA的相對表達量。

表1 各基因引物序列

1.3.9 Western blot法檢測各蛋白相對表達量取各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織敲碎并研磨，加入RIPA裂解液提取組織總蛋白，BCA法定量。取等量各組蛋白樣品上樣，通過10% SDS-PAGE凝膠分離蛋白質(zhì)，電轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上，置于5%脫脂奶粉室溫封閉2 h后，TBST洗膜，接著加入稀釋后的OPG、RANK、RANKL、p65、p-p65、p-IκBα、IκBα抗體(1 ∶1 000稀釋)以及內(nèi)參β-actin抗體(1 ∶5 000稀釋)，置于搖床上4 ℃下孵育過夜；第2天，TBST洗膜，加入對應(yīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫下于搖床上繼續(xù)孵育1 h，TBST再次洗膜，滴加ECL化學(xué)發(fā)光液顯色曝光，凝膠成像系統(tǒng)拍照，Image Pro Plus軟件分析各條帶灰度值，計算各蛋白相對表達量。

1.3.10免疫組織化學(xué)染色 取制備的各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織切片，將切片分別用梯度乙醇溶液和二甲苯進行脫蠟脫水處理，接著置于檸檬酸鹽緩沖液(95 ℃)煮沸15 min以修復(fù)抗原，加入3%H2O2去除內(nèi)源性過氧化物酶后，5%山羊血清室溫封閉2 h，將切片與抗體NF-κB(1 ∶200稀釋)在4 ℃下共同孵育過夜；第2天，PBS沖洗切片，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG(1 ∶1 000稀釋)，在室溫下孵育1 h，PBS沖洗后，DAB顯色液，蘇木精復(fù)染，中性樹膠進行封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織中的陽性表達情況，胞質(zhì)染成黃色至棕色即為陽性，隨機選擇6個視野，Image-Pro Plus軟件統(tǒng)計陽性表達面積。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠足腫脹度與關(guān)節(jié)炎評分比較小鼠初次免疫后21 d時開始發(fā)病，CIA模型成功率達到93.33%，篩選各組具有相似病程的小鼠各8只進行后續(xù)的研究。通過檢測各組小鼠足腫脹度發(fā)現(xiàn)，二次免疫后小鼠開始發(fā)病，四組小鼠足腫脹之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=346.72)，在第10、20 天時，模型組小鼠足腫脹較正常對照組增加(P<0.01)，而與模型組比較，CTLA4-Ig高劑量組小鼠足腫脹降低(P<0.01)。四組小鼠關(guān)節(jié)炎評分結(jié)果表明，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=234.02)，與正常對照組比較，模型組小鼠在二次免疫后關(guān)節(jié)炎評分升高(P<0.01)，經(jīng)過CTLA4-Ig高劑量治療后，小鼠的關(guān)節(jié)炎評分較模型組下降(P<0.01)；而CTLA4-Ig低劑量組和模型組小鼠的足腫脹和關(guān)節(jié)炎評分之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖1。

圖1 各組小鼠不同時間點足腫脹厚度和關(guān)節(jié)炎評分統(tǒng)計與正常對照組比較：**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01

2.2 各組小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平比較ELISA法檢測結(jié)果顯示TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17在不同組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=402.45、512.07、398.77、402.72)，與正常對照組比較，模型組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平均增加(P<0.01)；與模型組比較，CTLA4-Ig低劑量組和CTLA4-Ig高劑量組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平均減少(P<0.01)，見表2。

表2 各組小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平比較

2.3 各組小鼠Micro-CT掃描結(jié)果Micro-CT掃描各組小鼠膝前關(guān)節(jié)顯示：正常對照組小鼠關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整，骨質(zhì)表面光滑，關(guān)節(jié)間隙正常；模型組可觀察到關(guān)節(jié)明顯受損，骨質(zhì)表面凹凸不平；經(jīng)過CTLA4-Ig高劑量治療的小鼠關(guān)節(jié)骨質(zhì)表面凹凸不平的現(xiàn)象較模型組有了明顯改善，骨破壞程度減小，而相較于模型組，CTLA4-Ig低劑量治療的小鼠關(guān)節(jié)受損程度也稍有改善，但沒CTLA4-Ig高劑量組明顯，見圖2。四組小鼠的BMD、Tb.Th、BV及BV/TV差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=376.92、56.33、102.49、230.54)，與正常對照組比較，模型組小鼠BMD降低(P<0.01)，Tb.Th、BV及BV/TV也下降(P<0.01)；而相較于模型組，經(jīng)過CTLA4-Ig高劑量治療的小鼠，BMD增高，同時，Tb.Th、BV及BV/TV也升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而CTLA4-Ig低劑量治療的小鼠，BMD、Tb.Th、BV及BV/TV變化較模型組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖3。

圖2 Micro-CT掃描各組小鼠膝前關(guān)節(jié)A:正常對照組; B: 模型組; C: CTLA4-Ig低劑量組; D: CTLA4-Ig高劑量組

圖3 各組小鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)檢測A:正常對照組; B: 模型組; C: CTLA4-Ig低劑量組; D: CTLA4-Ig高劑量組；與正常對照組比較：**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01

2.4 各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織病理改變HE染色結(jié)果顯示，正常對照組小鼠膝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整，無滑膜增生變厚和炎性細胞浸潤現(xiàn)象；模型組小鼠膝關(guān)節(jié)面破壞，關(guān)節(jié)間隙變窄或消失，滑膜增生，并伴隨大量炎性細胞浸潤；CTLA4-Ig低劑量組和CTLA4-Ig高劑量組小鼠膝關(guān)節(jié)面破壞程度較模型組均有所減輕，CTLA4-Ig高劑量組小鼠滑膜組織輕度炎癥，有少量炎癥細胞浸潤，組織病變改善較CTLA4-Ig低劑量組更為明顯，見圖4。

圖4 各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織病理變化 HE×100A:正常對照組; B: 模型組; C: CTLA4-Ig低劑量組; D: CTLA4-Ig高劑量組

2.5 各組小鼠膝關(guān)節(jié)破骨細胞活化狀態(tài)比較TRAP染色檢測結(jié)果顯示，四組TRAP陽性細胞數(shù)目差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=267.43)，正常對照組小鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)可見很少量紫紅染色，TRAP陽性表達水平低；模型組可見較多紫紅染色，TRAP陽性細胞數(shù)目較正常對照組增加(P<0.01)，說明有大量成熟破骨細胞存在；CTLA4-Ig低劑量組和CTLA4-Ig高劑量組仍可見紫紅染色，與模型組比較，CTLA4-Ig低劑量組TRAP陽性細胞數(shù)目有所減少但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，CTLA4-Ig高劑量組TRAP陽性細胞數(shù)目減少(P<0.01)，見圖5。

圖5 各組小鼠破骨細胞數(shù)目 TRAP×200A:正常對照組; B: 模型組; C: CTLA4-Ig低劑量組; D: CTLA4-Ig高劑量組；與正常對照組比較：**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01

2.6 各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織OPG、RANK、RANKL mRNA和蛋白表達變化實時熒光定量PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，四組小鼠膝關(guān)節(jié)組織OPG、RANK、RANKL的mRNA和蛋白表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=88.45、57.94、74.42；F=62.48、34.50、52.66)，與正常對照組比較，模型組小鼠膝關(guān)節(jié)組織中OPG mRNA和蛋白相對表達量下調(diào)，RANK、RANKL mRNA和蛋白相對表達量均上調(diào)(P<0.01)；與模型組比較，CTLA4-Ig高劑量組OPG mRNA和蛋白相對表達量上調(diào)，同時，RANK、RANKL mRNA和蛋白相對表達量下調(diào)(P<0.01)；而CTLA4-Ig低劑量組和模型組OPG、RANK及RANKL mRNA和蛋白表達之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖6、7。

圖6 實時熒光定量PCR檢測膝關(guān)節(jié)組織OPG、RANK、RANKL mRNA表達A:正常對照組; B: 模型組; C: CTLA4-Ig低劑量組; D: CTLA4-Ig高劑量組；與正常對照組比較：**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01

圖7 Western blot檢測膝關(guān)節(jié)組織OPG、RANK、RANKL 蛋白表達A：正常對照組；B：模型組；C：CTLA4-Ig低劑量組；D：CTLA4-Ig高劑量組；與正常對照組比較：**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01

2.7 各組小鼠膝關(guān)節(jié)組織NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達檢測Western blot檢測結(jié)果顯示，四組小鼠膝關(guān)節(jié)組織p-p65、p-IκBα蛋白表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=37.65、27.82)，模型組小鼠膝關(guān)節(jié)組織中p-p65、p-IκBα蛋白相對表達量較正常對照組升高(P<0.01)；與模型組比較，CTLA4-Ig高劑量組p-p65、p-IκBα蛋白相對表達量下降(P<0.01)；而CTLA4-Ig低劑量組和模型組p-p65、p-IκBα蛋白相對表達量之間以及各組p65與IκBα蛋白相對表達量之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖8。免疫組織化學(xué)染色實驗結(jié)果顯示，四組小鼠膝關(guān)節(jié)組織NF-κB陽性表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=172.46)，正常對照組小鼠膝關(guān)節(jié)組織中未見明顯染色，NF-κB陽性表達率低；模型組內(nèi)可見明顯的黃棕色染色區(qū)域，NF-κB陽性表達率較正常對照組升高(P<0.01)；與模型組比較，CTLA4-Ig低劑量組和CTLA4-Ig高劑量組染色均變少變淺，NF-κB陽性表達率降低(P<0.01)，見圖9。

圖8 Western blot檢測膝關(guān)節(jié)組織NF-κB信號通路蛋白表達A：正常對照組；B：模型組；C：CTLA4-Ig低劑量組；D：CTLA4-Ig高劑量組；與正常對照組比較：**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01

3 討論

T細胞上的CD28與輔助細胞上的B7(CD80、CD86)的相互作用是調(diào)節(jié)T細胞活化的重要第二信號-協(xié)同刺激信號之一。B7/CD28相互作用可降低T細胞活化的閾值，增強抗原刺激細胞因子的產(chǎn)生，T細胞的克隆擴增以及T細胞向效應(yīng)細胞的分化。在自身免疫性疾病的進展中，T細胞的募集是該過程中的一個重要現(xiàn)象，這些T細胞可以識別更多的抗原決定簇[7]。阻斷CD28可能會阻止天然T細胞的進一步募集和激活，并干擾表位擴散的過程。CTLA4-Ig是由CTLA-4細胞外功能區(qū)和人IgG1Fc段組成的融合蛋白，其通過阻斷共刺激分子CD28和CD80/CD86活化T細胞的第二刺激信號，從而抑制T細胞活化，目前，其作為一種生物制劑，已在國內(nèi)外研究中廣泛運用。采用CTLA4- Ig可成功預(yù)防或治療多種自身免疫性疾病及腫瘤，這種治療方法已被廣泛用于阻斷T細胞上CD28與APC上的配體CD80或CD86的結(jié)合，從而抑制了B7/CD28共刺激信號通路。Romo-Tena et al[8]報道指出CTLA4-Ig在鼠狼瘡腎炎的治療中具有良好效果；Bassi et al[9]研究發(fā)現(xiàn)在DN大鼠模型中，CTLA4-Ig能夠修復(fù)足細胞結(jié)構(gòu)與細胞活性，并對抗高糖環(huán)境、減少蛋白尿，以改善腎臟血液灌注現(xiàn)象。此外，CTLA-4 Ig已被證明具有治療多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的效果，并且耐受性良好，免疫原性低[10]，但其作用功效和耐受性的潛在機制仍有待充分闡明。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)100 mg/kg CTLA4-Ig治療RA小鼠后，其足腫脹和關(guān)節(jié)炎評分均下降，骨組織破壞得到明顯緩解。由此進一步說明了通過CTLA4-Ig阻斷B7/CD28共刺激通路可達到治療小鼠RA的效果。

隨著RA的發(fā)生發(fā)展，促炎性介質(zhì)如TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17由駐留在關(guān)節(jié)中的炎性細胞所釋放，驅(qū)使各種炎性細胞滲入關(guān)節(jié)，加劇了促炎性物質(zhì)的分泌。而這些促炎性物質(zhì)能夠激活成纖維樣滑膜細胞，導(dǎo)致滑膜增生，而激活的成纖維樣滑膜細胞分泌局部血管生長因子導(dǎo)致內(nèi)皮細胞活化并刺激血管生成，從而間接誘導(dǎo)破骨細胞分化來加速骨吸收，降解關(guān)節(jié)軟骨組織[11]。此外，活化的巨噬細胞和破骨細胞通過產(chǎn)生金屬蛋白酶也促進了骨骼和軟骨的降解。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過CTLA4-Ig治療后，RA小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平均降低，說明炎癥反應(yīng)得到抑制。同時，高劑量CTLA4-Ig(100 mg/kg)作用下破骨細胞數(shù)目明顯減少，OPG表達升高而RANK、RANKL表達下降。OPG、RANK與RANKL均是破骨細胞分化的關(guān)鍵細胞因子，參與調(diào)節(jié)破骨細胞分化過程。OPG可抑制破骨細胞的生成與骨吸收，而RANK與RANKL結(jié)合可促進破骨細胞活化[12]。

在炎癥信號傳導(dǎo)途徑中，已有多項研究[13]表明NF-κB介導(dǎo)了RA的炎癥反應(yīng)，該通路的激活將導(dǎo)致大量促炎介質(zhì)釋放進而觸發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，加速RA惡化。本研究結(jié)果顯示，在RA小鼠中NF-κB表達增加，p-p65、p-IκBα蛋白表達升高，經(jīng)過高、低劑量CTLA4-Ig治療后NF-κB表達降低，且在高劑量CTLA4-Ig治療下p-p65、p-IκBα蛋白表達下降。由此可見，低劑量CTLA4-Ig作用下可能對RA小鼠NF-κB相關(guān)通路作用效果不顯著，只是影響了該通路中的部分靶標(biāo)，或者有其他分子機制參與其中。而相對較高劑量CTLA4-Ig能夠抑制NF-κB信號通路的激活，可以推斷出CTLA4-Ig可能通過抑制NF-κB炎癥信號通路來減輕RA的炎性進程。