鐘青華，楊 松，孟 靈，任 祥，林偉弟，嚴(yán) 森，蔣學(xué)余

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.岳陽市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 岳陽 414000)

神經(jīng)病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)是疼痛的一類，這種疼痛是因為周圍神經(jīng)系統(tǒng)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)的抑或是繼發(fā)性的損害、功能障礙導(dǎo)致的，神經(jīng)病理性疼痛的病理特征主要為自發(fā)性的、持續(xù)的抑或是多變性的疼痛、痛覺過敏以及痛覺超敏[1-2]。在1996年疼痛就被認(rèn)為是五大生命體征之一[3]。

頸椎病屬于骨病、筋病的范疇，由寒邪收引、濕邪重濁或熱邪等導(dǎo)致肌肉筋經(jīng)弛緩而引起。頸項部的經(jīng)脈氣血運行不暢、筋脈攣縮弛緩失張；年老者肝腎精血虧虛，正氣不足，督脈空虛，筋骨失養(yǎng)；長期伏案工作、跌撲損傷，均可導(dǎo)致經(jīng)脈氣血運行不利，氣血搏阻筋骨肌肉之間而發(fā)病。頸夾脊穴位于督脈之旁開0.5寸，針刺激發(fā)經(jīng)氣，可以疏通督脈、足太陽經(jīng)的經(jīng)氣來調(diào)和陰陽，活血通絡(luò)，臟腑協(xié)調(diào)，濡養(yǎng)腦髓，扶正祛邪并緩解頸項部的臨床癥狀。研究表明針刺的鎮(zhèn)痛效果是顯著的，而針刺在外周和中樞水平對神經(jīng)病理性疼痛的鎮(zhèn)痛機(jī)制主要為外周機(jī)制的外周敏化、離子通道的表達(dá)、感覺性去神經(jīng)支配和交感神經(jīng)芽生、Aβ纖維出芽、表型的變化；脊髓的中樞敏化、膠質(zhì)細(xì)胞的活化；脊髓上中樞機(jī)制；中樞去抑制的脊髓水平與脊髓上水平；促炎細(xì)胞因子；痛覺受體表達(dá)的上調(diào)等方面[4]。

本研究著重脊髓機(jī)制的中樞敏化與膠質(zhì)細(xì)胞活化，通過結(jié)扎右側(cè)C7脊神經(jīng)制備神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠，觀察電針對模型大鼠脊髓背角谷氨酸受體N-甲基-D-天冬門氨酸(N-methyl-d-aspartate,NMDA)、氨基-3-羧基-5-甲基異唑-4-丙酸(Alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid,AMPA)及膠質(zhì)細(xì)胞上單核細(xì)胞趨化蛋白-1受體(C-C chemokine receptor type 2,CCR2)、趨化因子C-X3-C-基元受體1(C-X3-C-primitive receptor 1,CX3CR1)趨化因子受體表達(dá)的影響，探討電針對神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠鎮(zhèn)痛的作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康的雄性成年SD大鼠72只，體重200～250 g，飼養(yǎng)地均在湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，動物許可證號：SYXK(滬)2017-0002，飼養(yǎng)溫度24～26 ℃，濕度50%～70%。所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為六組，每組12只。本研究經(jīng)過湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗福利倫理會審批并通過，批準(zhǔn)號：SLBH201910140006。

1.2 主要試劑與設(shè)備 Prime ScriptTMRT reagent Kit(for real time)、SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ (Tli RNaseH Plus)(日本寶生物工程公司)，焦碳酸乙二酯(DEPC)(西格瑪奧德里奇上海貿(mào)易公司)，TRIzol Reagent (INVITROGEN公司)，氯仿、異丙醇、乙醇(國藥集團(tuán))，Richard-Allan ScientificTMNeg-50TM冷凍包埋劑(Thermo)，黏附載玻片(世泰)，多聚甲醛(國藥集團(tuán))，PBS(吉諾生物)，Triton X-100(生工)，BSA(Bioshorp)，F(xiàn)BS(Gibco)，Alexa Fluor 488標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)、Alexa Fluor 555標(biāo)記驢抗小鼠IgG (H+L)、Alexa Fluor 488標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)、Alexa Fluor 555標(biāo)記驢抗兔IgG(H+L)、PVP封片液(碧云天)。熒光定量PCR儀96lightcycler(羅氏)，低溫高速離心機(jī)(大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司)，-80 ℃冰箱(海爾公司)，冰凍切片機(jī)、激光共聚焦顯微鏡(Leica 公司),SDZ-H型電子針療儀、28號0.5寸不銹鋼毫針(華佗牌)。

1.3 模型制備 神經(jīng)病理性疼痛模型建立：大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)麻醉大鼠后，俯臥位，以第2胸椎棘突為標(biāo)記，以C7為中心，常規(guī)備皮消毒后，于大鼠后正中線做一長約3.5 cm的正中切口，暴露并咬除左側(cè)C6/C7關(guān)節(jié)突，部分咬除左側(cè)C6橫突，分離并暴露左側(cè)C6、C7脊神經(jīng)并結(jié)扎C7背根神經(jīng)節(jié)遠(yuǎn)端神經(jīng)根，結(jié)扎松緊度以倒置顯微鏡觀察神經(jīng)表面動脈受壓但仍有血流通過為宜，然后逐層縫合切口。假手術(shù)組的操作與手術(shù)組的相同，但不結(jié)扎C7背根神經(jīng)節(jié)遠(yuǎn)端神經(jīng)根。

神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型制備同時結(jié)合鞘內(nèi)置管：用10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射大鼠麻醉，沿大鼠頸后中線縱向切開皮膚和皮下筋膜后，向兩邊鈍性分離肌肉，再用咬骨鉗去除頸椎棘突，并且咬開頸椎椎板，看到清亮液體流出時，撕開硬脊膜，然后經(jīng)過小腦延髓池，將PE-10管插入蛛網(wǎng)膜下腔到L5-L6節(jié)段處，為防止術(shù)中血凝塊堵塞管口，封閉PE-10管外口，需要用微量注射器緩慢推入10 μl的0.9%氯化鈉溶液，并將露出在皮外的PE-10管固定在頸部皮膚，最后再逐層縫合切口，并用青霉素腹腔注射來預(yù)防感染，手術(shù)后觀察2～3 d，并且剔除C7范圍神經(jīng)功能損傷者。本實驗所有手術(shù)過程均由同一人操作，以保證組間平衡和可比性。

1.4 干預(yù)方法 空白組：正常的SD大鼠并喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料。模型組：復(fù)制大鼠模型并結(jié)合鞘內(nèi)置管，喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，術(shù)后第7天開始，同時間點按照電針組進(jìn)行綁縛。假手術(shù)組：喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，同模型組相同的手術(shù)過程，鞘內(nèi)置管但不結(jié)扎神經(jīng)，術(shù)后第7天開始，同時間點按照電針組進(jìn)行綁縛。電針組：復(fù)制大鼠模型并結(jié)合鞘內(nèi)置管，喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，術(shù)后第7天開始，每天將大鼠俯臥位綁縛于鼠板上，給予電針頸夾脊穴干預(yù)(針柄連接華佗牌SDZ-H型電子針療儀，調(diào)整電針波形為疏密波，密波頻率50 Hz，疏波頻率10 Hz，早上9：00開始電針治療)，每次 20 min，1次/d，連續(xù)干預(yù)14 d。根據(jù)中國針灸學(xué)會實驗針灸委員會制定的動物針灸穴位圖譜進(jìn)行穴位定位，雙側(cè)的C6、C7夾脊穴：位于大鼠頸椎棘突間旁開約 0.5 cm處。針具及手法：選用華佗牌28號0.5寸不銹鋼毫針，直刺約0.3～0.6 cm，并予以輕捻轉(zhuǎn)提插行針。L-α-氨基乙二酸(L-α-aminoadipate,LAA)組：復(fù)制大鼠模型并鞘內(nèi)置管，喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，術(shù)后第7天開始每天鞘內(nèi)注射膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑LAA，5 nmol/次，1次/d，持續(xù)14 d，同時按照電針組進(jìn)行綁縛。LAA+電針組：復(fù)制大鼠模型并鞘內(nèi)置管，喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，術(shù)后第7天開始每天鞘內(nèi)注射LAA，5 nmol/次，1次/d，持續(xù)14 d，同時間節(jié)點按照電針組進(jìn)行電針頸夾脊穴治療。

1.5 標(biāo)本采集 所有的動物實驗結(jié)束后，對大鼠實施功能學(xué)指標(biāo)檢測，并稱取大鼠體重，禁食不禁水24 h，大鼠10%水合氯醛腹腔麻醉后，剪開胸腔并暴露心臟，從心尖插入灌注針直至左心室后用止血鉗固定針尖，并剪開右心耳，形成灌注液排出管道，從左心室快速灌注37 ℃ 0.9%氯化鈉溶液，直到從右心耳流出的液體為無色、大鼠肝臟色淡、腸管腫脹時，需要停止灌流。然后將灌流器的導(dǎo)管小心移至4%多聚甲醛中，此時需要注意不要產(chǎn)生氣泡，再進(jìn)行灌流。如果看到大鼠四肢突然緊張，尾部卷曲，說明達(dá)到固定效果。灌流大約5 min，灌流液用量約150 ml左右結(jié)束。取出脊髓腰段膨隆部，在上肢近心端向下5 cm處為中點，將此點上下各 3 cm椎骨剪斷，再剝離肌肉，咬平棘突，用彎剪把骨質(zhì)最薄的棘突旁骨片剪開，再用細(xì)針輕輕把神經(jīng)分離剪斷，用止血鉗夾住兩旁椎骨，并夾碎。取出C7處上下2 cm的脊髓節(jié)段用于相關(guān)指標(biāo)檢測。

1.6 檢測指標(biāo)與方法

1.6.1 采用Real-time PCR檢測大鼠脊髓背角NMDA、AMPA受體的表達(dá)：Total RNA的提取和鑒定方法為，取30～50 mg組織樣本，加入1 ml Trizol，60 Hz，30 s，0 Hz，10 s勻漿3次，室溫裂解5 min；加入1/5 Trizol體積的氯仿，劇烈振蕩15 s，待溶液充分乳化無分相現(xiàn)象，在室溫靜置5 min；12000 g，4 ℃離心15 min；小心取出離心管，吸取上清液轉(zhuǎn)移至另一RNase free EP管中；加入等體積的異丙醇，上下顛倒充分混勻后，在室溫靜置10 min；12000 g，4 ℃離心10 min，棄去上清；75%乙醇1 ml洗滌，12000 g，4 ℃離心5 min，棄去乙醇；室溫干燥2～3 min，加入20 μl滅菌DEPC水溶解沉淀，用手指尖輕彈EP管底部至完全溶解。測定RNA樣品濃度。OD260/OD280=1.91，提取的RNA純度高，無蛋白質(zhì)和DNA的殘余。

cDNA合成：0.2 ml的RNase free EP管中配制混合液，冰上操作。37 ℃，15 min，85 ℃，5 s，4 ℃，60 min得到的cDNA加入30 μl的ddH2O稀釋備用?？芍苯佑糜?nd-Strand cDNA的合成或PCR擴(kuò)增，-20 ℃保存。PCR擴(kuò)增時cDNA的推薦最大使用量為1 μl。

定量PCR反應(yīng)：PCR管中配制PCR反應(yīng)混合液，冰上操作。首先混勻，每個樣品做3個重復(fù)對照。然后設(shè)定兩步法PCR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)程序：第一步為預(yù)變性，Reps：1，95 ℃,30 s；第二步為PCR反應(yīng)，Reps：40，95 ℃，5 s,60 ℃,30～34 s；Dissociation Stage，上機(jī)擴(kuò)增檢測，最后利用2-△△Ct法計算相對表達(dá)量。

1.6.2 采用免疫熒光法檢測各組大鼠脊髓背角CXC3R1、CCR2的表達(dá):用組化筆在玻片上圈起組織；用PBS浸潤組織；4%多聚甲醛處理(室溫)10 min；PBS漂洗，5 min，3遍；0.5%Txiton X-100處理(室溫)5 min；TBST漂洗，5 min，3遍；封閉(室溫)1 h；孵育一抗(用0.1% BSA/TBST配)4 ℃孵育過夜；0.1%BSA/TBST漂洗，5 min，3遍；孵育熒光二抗(用含0.1%BSA的TBST配)RT孵育1～2 h；0.1%BSA/TBST漂洗，5 min，3遍；DAPI，5 min；PBS漂洗，5 min，3遍；為了玻片保存時間更久，用帶抗淬滅劑的封片劑封片，鏡下觀察并且在熒光顯微鏡下拍照。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，組間對比采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD比較，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠脊髓背角NMDA、AMPA表達(dá)比較 假手術(shù)組與空白組相比較，大鼠脊髓背角的NMDA、AMPA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與假手術(shù)組相比，模型組脊髓背角NMDA、AMPA表達(dá)均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；電針組、LAA組、LAA+電針組大鼠的脊髓背角NMDA、AMPA表達(dá)較模型組表達(dá)均降低(P<0.05)；與電針組相比，LAA組、LAA+電針組大鼠的脊髓背角NMDA、AMPA表達(dá)均降低(P<0.05)；相較于LAA組，LAA+電針組的大鼠脊髓背角NMDA、AMPA表達(dá)均下降(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠脊髓背角NMDA、AMPA表達(dá)比較

2.2 各組大鼠脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)比較 假手術(shù)組與空白組相比，大鼠脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與假手術(shù)組相比，模型組脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；電針組、LAA組、LAA+電針組大鼠脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)較模型組均降低(P<0.05)；與電針組大鼠脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)相比，LAA組、LAA+電針組均降低(P<0.05)；相較于LAA組，LAA+電針組大鼠脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)均下降(P<0.05)。見表2(圖1、2)。

表2 各組大鼠脊髓背角CCR2、CX3CR1表達(dá)比較

圖1 各組大鼠脊髓背角CCR2免疫熒光圖(50 μm)

圖2 各組大鼠脊髓背角CX3CR1免疫熒光圖(50 μm)

3 討 論

《足臂十一脈灸經(jīng)》第一次描述了“夾脊”，而后《素問·刺瘧》：“十二瘧者……又刺項以下夾脊者必已”；《素問·綴刺論》：“邪客于手足太陽絡(luò)……立己?！薄短亍返诙怼读烤Y剌》：“刺之從項始數(shù)脊椎……刺之旁三痏立己”；楊上善對其補充：“脊有廿一椎……各剌三痏也”。最早說明了夾脊穴大約分寸與距離的是《后漢書》所載的《華倫別傳》[5]。夾脊穴有狹義、廣義之分，狹義的夾脊穴有34穴，范圍是第一胸椎到第五腰椎；廣義的夾脊穴有56穴，除了第一胸椎到第五腰椎段，還包含了頸椎段與八髎穴。頸夾脊穴即為C1～C7，脊正中旁開0.5寸，共14穴。頸椎病屬于骨病、筋病的范疇。主要因為寒邪收引或濕邪重濁，亦或是熱邪等導(dǎo)致肌肉筋經(jīng)弛緩而引起。頸項部的經(jīng)脈氣血運行不暢、筋脈攣縮弛緩失張；年老者肝腎精血虧虛，正氣不足，督脈空虛，筋骨失養(yǎng)；長期伏案工作、跌撲損傷，均可導(dǎo)致經(jīng)脈氣血運行不利，氣血搏阻筋骨肌肉之間而發(fā)病。而頸夾脊穴位于督脈之旁開0.5寸，當(dāng)針刺后，經(jīng)氣得以激發(fā)，可以疏通督脈、足太陽經(jīng)的經(jīng)氣來調(diào)和陰陽，活血通絡(luò)，臟腑協(xié)調(diào)，濡養(yǎng)腦髓，扶正祛邪并緩解頸項部的臨床癥狀[6-9]。當(dāng)針刺頸夾脊穴的時候，針尖可以直刺至頸椎橫突后結(jié)節(jié)以及小關(guān)節(jié)囊，此時會激發(fā)經(jīng)氣到達(dá)病變的部位，這就符合“經(jīng)脈所過，主治所及”的針刺治療原則。

脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的激活是由于炎癥、外周神經(jīng)損傷、骨癌、脊神經(jīng)結(jié)扎或截斷、脊髓外傷等諸多致病因素所致[10]。脊髓背角的膠質(zhì)細(xì)胞活化后會釋放一系列的疼痛增強物質(zhì)，并傳遞痛覺傷害，介導(dǎo)痛覺過敏[11]。研究表明電針通過抑制頸部肌肉痙攣、減輕炎性物質(zhì)的浸潤、促進(jìn)循環(huán)、消除局部血腫、升高痛閾值、抑制痛覺信息的傳導(dǎo)、修復(fù)損傷的神經(jīng)根等這一系列反應(yīng)發(fā)揮作用的[12-13]。電針通過再生修復(fù)損傷脊髓神經(jīng)元，恢復(fù)脊髓神經(jīng)元的功能，阻止星形膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)性、反饋性地增生，最終可以阻礙膠質(zhì)瘢痕的生成[14-15]；并抑制脊髓背角神經(jīng)元突觸可塑性變化的形成，以減弱脊髓背角神經(jīng)元的敏感化，最終達(dá)到鎮(zhèn)痛的作用[16]。電針通過抑制一氧化氮表達(dá)與一氧化氮合酶釋放而抑制帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛大鼠的腦星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活[17]；或抑制脊髓損傷區(qū)AMPA受體亞基GluR1的表達(dá),進(jìn)而促使急性糖尿病模型大鼠脊髓前角損傷的神經(jīng)修復(fù)，進(jìn)而增加脊髓谷氨酸轉(zhuǎn)運體蛋白質(zhì)的表達(dá)[18-19]。電針可通過抑制脊髓內(nèi)趨化因子CX3CL1表達(dá)，抑制脊髓組織中促炎性因子腫瘤壞死因子-α、白介素-1β和白介素-6表達(dá)[20-21]，并調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路，改善完全弗氏佐劑所致炎性痛癥狀，抑制脊髓的FKN表達(dá)，最后發(fā)揮鎮(zhèn)痛的效應(yīng)[22-23]。電針可以抑制p38絲裂原活化蛋白激酶、轉(zhuǎn)錄激活子3信號通路與RGs內(nèi)衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞活性，減少促炎細(xì)胞因子的釋放，降低衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞之間的信息交流，最終達(dá)到緩解大鼠頸部切口痛的目的[24]。諸多研究表明可以運用電針并聯(lián)合應(yīng)用膠質(zhì)細(xì)胞拮抗劑來達(dá)到增強電針鎮(zhèn)痛的效應(yīng)[25-26]。

NP在外周敏化、中樞敏化兩個作用方面主要是通過神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元之間的相互作用，趨化因子、生長因子、促炎細(xì)胞因子等表達(dá)，來產(chǎn)生疼痛并且維持疼痛的發(fā)生的。中樞敏化是神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生與維持的關(guān)鍵機(jī)制之一，神經(jīng)病理性疼痛的基礎(chǔ)興奮性氨基酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，包括谷氨酸和天門冬氨酸，當(dāng)周圍神經(jīng)損傷后，可以激活脊髓興奮性谷氨酸受體。NMDA和AMPA受體是谷氨酸的離子型受體。興奮性氨基酸在中樞敏化和脊髓傳導(dǎo)轉(zhuǎn)化方面起到關(guān)鍵作用，脊髓傳入神經(jīng)末梢后釋放谷氨酸，繼而激活谷氨酸釋放NMDA受體和非NMDA受體，當(dāng)NMDA受體激活，可以促使神經(jīng)元持續(xù)性興奮,并使得神經(jīng)元的突觸活動頻率增加，自發(fā)或誘發(fā)神經(jīng)元放電增多、感受相應(yīng)地擴(kuò)大[27-28]。谷氨酸在靜息電位下主要存在于神經(jīng)末梢的突觸囊泡內(nèi)，而谷氨酸受體通道因為與鎂離子進(jìn)行結(jié)合而被阻滯；當(dāng)傷害性刺激出入時，神經(jīng)末梢去極化時釋放到突觸間隙，作用于突觸后膜的特異性受體，引起鈣離子內(nèi)流，并觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)激活蛋白激酶A、蛋白激酶C等Ca敏感性信號的級聯(lián)反應(yīng)，然后促進(jìn)傳遞傷害性信息介質(zhì)的生成，并激活神經(jīng)型一氧化氮合酶系統(tǒng)和產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，最終誘導(dǎo)脊髓中樞神經(jīng)通路的興奮信號激活[29-31]。

趨化因子及其受體對多種細(xì)胞內(nèi)激酶的激活，并進(jìn)一步磷酸化離子通道和受體來增強神經(jīng)元的興奮性或突觸傳遞，并激活相應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體，激活胞內(nèi)信號通路參與細(xì)胞遷移、增殖及炎癥結(jié)構(gòu)相似的小分子分泌蛋白[32]。外周及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多種趨化因子及其受體，通過神經(jīng)元和非神經(jīng)元細(xì)胞之間的相互作用、增強神經(jīng)炎癥。趨化因子有CC、CXC、C以及CX3C這四個亞家族[33]，趨化因子Fractalkine(CX3CL1)簡稱FNK，歸屬于四個亞家族的CX3C亞家族，是小膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中活化的調(diào)節(jié)因子。趨化因子的受體有CCR、CXCR、CX3CR以及XCR這四種，七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體CX3CR1主要表達(dá)在外周血白細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的小膠質(zhì)細(xì)胞，CX3CL1在小膠質(zhì)細(xì)胞中特殊的受體表達(dá)信號則是CX3CR。全長的CX3CL1表達(dá)在初級傳入末梢以及脊髓神經(jīng)元上，而剪切后的CX3CL1作用于它的唯一受體，小膠質(zhì)細(xì)胞上CX3CR1。CC亞族趨化因子配體21(CCL21)表達(dá)于神經(jīng)元，作用于小膠質(zhì)細(xì)胞上的CXCR3受體[34]。CC亞族趨化因子配體2(CCL2)屬于CC趨化因子家族,CCL2能夠識別多個受體，CCR2也可以被多個趨化因子識別，但是在小鼠組織內(nèi),對比結(jié)合與CCL7的結(jié)合，CCR2特異性結(jié)合CCL2的親和力是其10倍[35]。CCL2從初級神經(jīng)傳入末梢神經(jīng)后，釋放在作用于小膠質(zhì)細(xì)胞上的CCR2受體后，在胞內(nèi)產(chǎn)生p38磷酸化，促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞激活，然后釋放促炎性細(xì)胞因子和生長因子，最終誘發(fā)神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生；而促炎性細(xì)胞因子正反饋作用于小膠質(zhì)細(xì)胞釋放CCL2；CCL2也在星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)并釋放，作用于神經(jīng)元上的CCR2受體[36]，使細(xì)胞內(nèi)ERK磷酸化，并激活星形膠質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)促炎因子的合成及其釋放，促炎因子又反作用促進(jìn)CCL2的分泌。腫瘤壞死因子-α可以刺激其與應(yīng)激活化蛋白激酶(SAPK)這一通路，刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞再次釋放 CCL2，CCL2和炎性因子作用于神經(jīng)元，通過增加興奮性突觸傳遞使中樞敏化，易化神經(jīng)病理性疼痛；CCR2的激活同時也可使p-ERK活化，促使神經(jīng)元釋放CCL2，并且參與神經(jīng)病理性疼痛。趨化因子也參與調(diào)節(jié)谷氨酸NMDA受體、AMPA受體的功能。CCL2與神經(jīng)元上的CCR2結(jié)合，參與了突觸前神經(jīng)末梢遞質(zhì)釋放和谷氨酸受體活性的調(diào)節(jié)，導(dǎo)致興奮性突觸傳遞增強活化NMDA和AMPA受體[37]；同時也可直接作用在 GABAA受體，抑制GABA電流。綜上，本研究選取谷氨酸受體NMDA、AMPA，及膠質(zhì)細(xì)胞活化受體CCR2、CX3CR1作為研究對象，探究電針對其影響及作用機(jī)制。

本研究通過神經(jīng)病理性疼痛大鼠的建立，探究電針頸夾脊穴對此模型大鼠谷氨酸受體NMDA、AMPA及膠質(zhì)細(xì)胞活化受體CCR2、CX3CR1的影響發(fā)現(xiàn)，電針組與LAA組相比NMDA差異無統(tǒng)計學(xué)意義，電針組與LAA組相比AMPA有所降低，說明CCL2/ CCR2、CX3CL1/CX3CR1參與了谷氨酸受體活性的調(diào)節(jié),且LAA抑制CCL2、CX3CL1與神經(jīng)元上的CCR2、CX3CR1結(jié)合；電針與LAA抑制谷氨酸受體NMDA表達(dá)無差異可能受到實驗差異的影響，而電針可抑制谷氨酸受體NMDA、AMPA的表達(dá)，其作用機(jī)制與LAA類似，但仍然需要進(jìn)一步實驗探究。LAA+電針組較LAA組、電針組的NMDA、AMPA活化水平顯著降低，說明LAA與電針具有協(xié)同性，并抑制NMDA、AMPA的活化，但LAA與電針之間的相互作用仍需進(jìn)一步研究探討。電針組、LAA組、LAA+電針組較模型組CCR2、CXCR1表達(dá)量均降低，LAA組、LAA+電針組與電針組相比CCR2、CXCR1表達(dá)量均降低，LAA+電針組相較于LAA組的CCR2、CXCR1表達(dá)量下降，以上進(jìn)一步說明電針抑制CCR2、CXCR1的活化，阻止CCL2、CX3CL1與其受體CCR2、CX3CR1的結(jié)合。

綜上所述，電針頸夾脊穴可抑制神經(jīng)病理性疼痛大鼠CCR2、CX3CR1活化，影響CCL2、CX3CL1及其受體CCR2、CX3CR1的結(jié)合，并降低谷氨酸受體NMDA、AMPA活化，抑制了膠質(zhì)細(xì)胞的活化及中樞敏化，進(jìn)而減少促炎性細(xì)胞因子和生長因子釋放，減少神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生。