李 婷,鄒秋萍,毛澤偉,吳石麗,何紅平,李艷平

(云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,昆明 650500)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種發(fā)生在直腸和結(jié)腸黏膜的慢性炎癥性疾病,病因未明,反復(fù)發(fā)作是其典型特征,對(duì)患者的生活造成極大的困擾,被WTO 列為難治癥之一,近年來UC 的發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì)[1-3]。UC 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及患者的遺傳、免疫系統(tǒng)和環(huán)境因素之間的相互作用[4]。其中,慢性炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答紊亂是造成UC 的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié),而腸道內(nèi)菌群紊亂又是造成炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答改變的重要因素[5]。近年來,越來越多的研究表明腸道菌群失調(diào)與UC 的發(fā)生密切相關(guān)[6-7],主要表現(xiàn)為患者局部微脈管系統(tǒng)損傷,產(chǎn)生趨化因子,引起白細(xì)胞游出,從而擴(kuò)大炎癥反應(yīng),這使得上皮屏障破壞,腸道中有害菌產(chǎn)物進(jìn)入血液系統(tǒng)導(dǎo)致發(fā)病[8]。

三點(diǎn)金(Desmodium triflorum(L.)DC.)為豆科山螞蝗屬多年生植物,又名斑鳩窩,遍地金錢,在多種少數(shù)民族醫(yī)學(xué)著作中記載它的全草可以用來治療各種炎癥包括急性腸炎、大葉性肺炎、感冒發(fā)燒、咳嗽和肝炎[9]。本課題組前期的研究從云南省昆明市嵩明縣的豆科山螞蝗屬植物三點(diǎn)金中分離純化得到12 個(gè)化合物,包括牡荊素、異牡荊素、刺芒柄花素、毛蕊異黃酮等一系列黃酮及其苷類化合物。這些黃酮類化合物在抗炎方面表現(xiàn)出顯著的作用。如Yang 等[10]發(fā)現(xiàn)刺芒柄花素是通過上調(diào)Nrf2 的表達(dá)而起到抑制潰瘍性結(jié)腸炎的作用。Chao 等[11]發(fā)現(xiàn)毛蕊異黃酮可通過抑制NF-κB 通路和JNK 通路活化抑制小鼠巨噬細(xì)胞炎性因子的產(chǎn)生。上述研究表明刺芒柄花素和毛蕊異黃酮可能對(duì)UC 也有一定的治療作用。因此,本研究探討了是否是通過三點(diǎn)金總黃酮及其兩個(gè)單體化合物的干預(yù)起到了對(duì)UC 小鼠的改善作用及腸道菌群失衡的調(diào)節(jié)作用,為民族藥三點(diǎn)金總黃酮及其兩個(gè)單體化合物作為UC 治療藥物提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)C57BL/6 雄性小鼠購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(30 只,6 周齡,體重18～20 g)[SCXK(湘)2019-0004]。在SPF 級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng),晝夜節(jié)律12 h/12 h,實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。動(dòng)物飼養(yǎng)使用標(biāo)準(zhǔn)鼠飼料和水,飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房[SYXK(滇)K2017-0005]。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)審查通過(IACUC-06202006)并遵循3R 原則。

1.2 主要試劑與儀器

刺芒柄花素(南京源植生物科技有限公司,批號(hào):20180801)；毛蕊異黃酮(南京源植生物科技有限公司,批號(hào):20170926),純度均大于95%；DSS(美國(guó)MP 公司,批號(hào)SR01606)；IL-1β、IL-6 ELISA 試劑盒(杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司,批號(hào)A201B90612 和A20600643)；DNA 提取試劑盒(美國(guó)Omega Bio-Tek 公司)；GeneJET 膠回收試劑盒(美 國(guó) Thermo Scientific 公 司)；Phusion?High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer(美國(guó)New England Biolabs 公司)。分析天平AR224CN(常州奧豪斯儀器有限公司)；超低溫冰箱(美國(guó)Thermo Scientific 公司)；酶標(biāo)儀SPARK 10M(瑞士TECAN公司)；Ion S5TMXL(美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組

將動(dòng)物隨機(jī)分為正常組(N1)、模型組(M1)、三點(diǎn)金總黃酮組(TF1)(500 mg/kg)、毛蕊異黃酮組(F1)(100 mg/kg)和刺芒柄花素組(F2)(100 mg/kg),每組6 只。

1.3.2 三點(diǎn)金總黃酮的制備

在課題組前期工作的基礎(chǔ),將民族藥用植物三點(diǎn)金的地上部分(1 kg)干燥后粉碎,用70%丙酮在室溫下超聲提取,提取液減壓濃縮得到總浸膏。所得浸膏用蒸餾水混懸,用石油醚萃取除去葉綠素,水相經(jīng)乙酸乙酯萃取,萃取物濃縮后經(jīng)大孔吸附樹脂柱,依此用水,90%,100%甲醇-水進(jìn)行洗脫,90%甲醇-水洗脫部分減壓濃縮,經(jīng)三氯化鐵反應(yīng)鑒定90%甲醇-水洗脫部分富含黃酮類成分,即為三點(diǎn)金總黃酮。

1.3.3 造模方法及藥物干預(yù)

參照參考文獻(xiàn)[12]的造模方法及通過預(yù)實(shí)驗(yàn)實(shí)踐后,將小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周,正常組和模型組灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液、3 個(gè)給藥組TF1、F1 及F2 組灌胃給予相應(yīng)濃度的藥物,連續(xù)給藥11 d,從第1 天開始,除正常組外,其余各組小鼠的飲用水更換為3% DSS 水溶液連續(xù)8 d,第9 天將3% DSS 水溶液更換為飲用水至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.3.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

(1)UC 小鼠的觀察與評(píng)分

參照參考文獻(xiàn)[13]中的方法,在實(shí)驗(yàn)期間,每天觀察小鼠的體征狀態(tài)并記錄體重。通過小鼠的腹瀉及便血情況得出小鼠DAI 評(píng)分,判斷潰瘍性結(jié)腸炎模型是否構(gòu)建成功。DAI 評(píng)分=(體重下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù))/3。DAI 的具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表1。

表1 DAI 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Score criteria of DAI

(2)結(jié)腸病理切片觀察腸黏膜損傷程度

造模結(jié)束后,頸椎脫臼法處死小鼠,立即解剖,取小鼠結(jié)腸中段約1 cm 左右,于4%多聚甲醛中浸泡48 h 固定,脫水,石蠟包埋,制片(4 μm 厚),HE染色。參照參考文獻(xiàn)[14]中的方法進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分,如表2 所示。

表2 病理切片評(píng)分Table 2 Score of pathological section

(3)動(dòng)物取血及血清處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天,取眼眶血,3000 r/min,4℃離心10 min,收集上清。于-80℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩０碋LISA 試劑盒說明書測(cè)定各組血清中IL-1β、IL-6含量。

1.3.5 小鼠糞便樣本采集

在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1 d,確認(rèn)模型成功后,用左手抓取小鼠,促使小鼠應(yīng)激性排便,右手持無菌EP 管保證相對(duì)無菌環(huán)境下收集小鼠糞便。糞便收集結(jié)束后標(biāo)記樣本,置于冰盒中,及時(shí)放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?避免反復(fù)凍融。

1.3.6 糞便DNA 提取和PCR 擴(kuò)增純化

用DNA 提取試劑盒提取糞便中的總DNA 并檢測(cè)其提取質(zhì)量。以帶有barcode 序列的515F 和806R 為引物,以細(xì)菌16S rRNA 基因的V4 可變區(qū)序列為靶標(biāo)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增,使用1×TAE 濃度2%的瓊脂糖膠電泳純化PCR 產(chǎn)物,剪切回收目標(biāo)條帶,使用GeneJET 膠回收試劑盒回收產(chǎn)物。

1.3.7 文庫構(gòu)建和上機(jī)測(cè)序

使用Ion Plus Fragment Library Kit 48 rxns 試劑盒進(jìn)行文庫的構(gòu)建,經(jīng)Qubit 定量和文庫檢測(cè)合格后,使用Ion S5TMXL 進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。測(cè)序分析內(nèi)容包括:測(cè)序數(shù)據(jù)處理、OTU 聚類和物種注釋、樣品復(fù)雜度分析、多樣品比較分析及評(píng)估樣品中細(xì)菌菌群的豐富度和均勻度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 軟件處理數(shù)據(jù)。結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用單因素方差分析方法(ANOYA)分析,以P＜0.05 表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。使用Graphpad Prism7 軟件制圖。

2 結(jié)果

2.1 一般體征及DAI 評(píng)分結(jié)果

正常組小鼠精神狀態(tài),毛發(fā)色澤,進(jìn)食及大便性狀均正常；模型組小鼠造模后第3 天,開始出現(xiàn)體重下降,精神萎靡,稀便并夾帶膿血,第5 天體重明顯下降,便血嚴(yán)重；TF1、F1 及F2 組在給藥后,雖然也有稀便,血便情況,體重也呈下降趨勢(shì),但相比于模型組,均有不同程度的改善(圖1A)。

從實(shí)驗(yàn)開始至結(jié)束,每天固定時(shí)間觀察小鼠糞便以進(jìn)行DAI 評(píng)分。TF1、F1 及F2 組的小鼠在給藥后的第5 天,稀便,血便情況有所改善,第8 天出現(xiàn)活動(dòng)增加,食量增加,其毛發(fā)、腹瀉、大便性狀等情況均有所改善,DAI 評(píng)分顯著降低(圖1B)。

圖1 各組小鼠體重變化和DAI 評(píng)分的影響(,n=6)Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Compared with control group,## P ＜0.01.Compared with model group,*P ＜0.05,**P＜0.01.Figure 1 Effect of weight change and DAI score in each group

2.2 HE 染色及病理組織學(xué)評(píng)分

正常組小鼠上皮組織完整,可見明顯的隱窩及杯狀細(xì)胞,無炎癥細(xì)胞侵入。模型組小鼠上皮組織損傷嚴(yán)重,隱窩變形,杯狀細(xì)胞丟失,黏膜及黏膜下層有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。而三點(diǎn)金總黃酮組、毛蕊異黃酮組及刺芒柄花素組組織學(xué)炎癥程度減輕,結(jié)腸隱窩結(jié)構(gòu)變形不明顯。病理組織學(xué)評(píng)分顯示,與模型組相比,三點(diǎn)金總黃酮組和毛蕊異黃酮組評(píng)分顯著降低(P＜0.01)且改善效果優(yōu)于刺芒柄花素組(P＜0.05)(見圖2A、2B)。

圖2 各組小鼠結(jié)腸HE 染色及評(píng)分結(jié)果(HE 染色)(,n=6)Notes.(A),Control group.(B),Model group.(C),Calycosin group.(D),Formononetin group.(E),Total flavones of Desmodium triflorum group.Compared with control group,##P＜0.01.Compared with model group,*P＜0.05,**P＜0.01.Figure 2 Colon HE staining and scoring results of mice in each group(HE staining)

2.3 血清炎癥因子檢測(cè)結(jié)果

模型組小鼠血清中IL-1β、IL-6 水平相較于正常組顯著升高(P＜0.01),給藥組IL-1β、IL-6 的水平有不同程度的降低,且毛蕊異黃酮組的效果優(yōu)于三點(diǎn)金總黃酮組和刺芒柄花素組(見圖3)。

圖3 各組小鼠血清中IL-1β、IL-6 水平比較(,n=6)Notes.Compared with control group,##P＜0.01.Compared with model group,**P＜0.01.Figure 3 Comparison of IL-1β and IL-6 levels in serum of mice in each group

2.4 小鼠腸道菌群測(cè)序結(jié)果

2.4.1 測(cè)序樣本質(zhì)量檢測(cè)

由圖4A 可見小鼠糞便中OTU 數(shù)隨測(cè)序量不斷增加,最后趨于平穩(wěn),達(dá)到飽和狀態(tài),表明樣品測(cè)序質(zhì)量符合要求。等級(jí)豐度曲線能夠反映物種的豐富度和均勻度。結(jié)果表明,5 組樣品的曲線最后都趨于平穩(wěn),表明物種分布均勻(圖4B)。其中正常組的等級(jí)豐度在400～580 之間,經(jīng)DSS 誘導(dǎo)后,各組小鼠腸道菌群的物種總數(shù)降低,模型組的等級(jí)豐度在350～450 左右,經(jīng)給藥治療后,TF1 組的等級(jí)豐度在500～750 之間,表明其腸道菌群的多樣性明顯提高；F1 組的等級(jí)豐度在400～550 之間,其微生物種群豐度趨向正常組,然而單體F2 組的等級(jí)豐度在300～400 之間,并未有顯著提高,且略低于模型組。

圖4 樣品稀釋曲線和豐度分布曲線Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Figure 4 Sample dilution curve and rank abundance curve

2.4.2 小鼠腸道菌群多樣性分析

Observed species 和Shannon 指數(shù)是評(píng)價(jià)結(jié)腸菌群多樣性的重要指數(shù),其數(shù)值越高表明樣品物種豐富度越高。由圖5A 可見,相比于模型組,F1、F2 組觀察到的物種差異顯著,表明毛蕊異黃酮和刺芒柄花素顯著改變了小鼠的腸道微生物的多樣性。由圖5B 可見,相比于正常組,模型組腸道菌群多樣性降低。相較于模型組,TF1 組腸道菌群多樣性明顯升高,且恢復(fù)到正常組水平；F1 組呈略微升高的狀態(tài),但是F2 組對(duì)于腸道菌群多樣性沒有起到改善作用,表明三點(diǎn)金總黃酮對(duì)于腸道菌群多樣性的改善作用優(yōu)于其兩個(gè)單體化合物。

圖5 各組菌群多樣性情況Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Figure 5 Diversity of each group

2.4.3 小鼠腸道菌群的整體變化

韋恩圖分析可提供各組間菌群OTU 數(shù)量及其種類交叉情況,主成分分析(PCA)檢測(cè)樣本間菌群豐度整體差異。結(jié)果表明,正常組、模型組、F1、F2以及TF1 組共有的OTU 數(shù)為453 個(gè)(圖6A)。與模型組相比,F1 處理組顯著性增加了OTU 數(shù)量但仍然略低正常組；F2 組減少了OTU 數(shù)量；TF1 組顯著性增加OTU 的數(shù)量且比正常組的更為豐富。由PCA 結(jié)果表明,各組間樣本均能明顯區(qū)分,說明小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了一定的變化。給藥組腸道菌群結(jié)構(gòu)與模型組相比發(fā)生了一定偏移,值得注意的是F1 和TF1 組有向正常組回歸的趨勢(shì),然而刺芒柄花素并沒有這個(gè)趨勢(shì)(圖6B)。說明毛蕊異黃酮和三點(diǎn)金總黃酮能一定程度上促進(jìn)腸道菌群多樣性及結(jié)構(gòu)的恢復(fù),而刺芒柄花素對(duì)于腸道菌群多樣性及結(jié)構(gòu)沒有起到恢復(fù)的作用,則可能主要是通過降低致病菌的數(shù)量而起到治療UC 的作用。

圖6 腸道菌群整體輪廓變化韋恩圖和PCA 分析Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Figure 6 Venn and PCA analysis of changes in the overall profile of intestinal flora

2.4.4 小鼠腸道菌群物種差異分析

在科水平上,Muribaculaceae和毛螺菌科(Lachnospiraceae)是正常組的優(yōu)勢(shì)菌株,其相對(duì)豐度分別為28.52%和19.35%；模型組中擬桿菌科(Bacteroidaceae),韋榮球菌科(Erysipelotrichaceae),瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)以及毛螺菌科系優(yōu)勢(shì)菌株,相對(duì)豐度分別為22.84%,16.39%,11.48%和10.74%。與正常組相比,模型組中Muribaculaceae(7.66%)和毛螺菌科(10.74%)的相對(duì)豐度顯著的降低,而條件致病菌擬桿菌科的豐度(22.84%)比正常組(2.26%) 極大地升高。F1 組中桿菌科(Enterobacteriaceae),擬桿菌科以及毛螺菌科則為主要的優(yōu)勢(shì)菌株,其相對(duì)豐度分別為23.54%,18.80%,以及12.46%,其中毛螺菌科的相對(duì)豐度較模型組非常接近,但致病菌群螺桿菌科(Helicobacteraceae)的相對(duì)豐度(0.78%)相較于正常組(2.49%)和模型組(2.09%)發(fā)生了顯著性地降低。F2 組桿菌科和擬桿菌科為其優(yōu)勢(shì)菌群,相對(duì)豐度分別為43.50%和13.53%,其中擬桿菌科的豐度與F1 處理組較為接近,且致病菌群螺桿菌科的相對(duì)豐度(0.43%)相較于F1 組進(jìn)一步的降低。TF1組中Muribaculaceae,毛螺菌科以及擬桿菌科為其優(yōu)勢(shì)菌群,相對(duì)豐度分別為13.81%,20.18%以及11.12%,與以上各組相比,Muribaculaceae和毛螺菌科再次成為優(yōu)勢(shì)菌群(與正常組一致),這表明總黃酮對(duì)于結(jié)腸炎小鼠腸道微生物的調(diào)節(jié)和恢復(fù)有較好的作用(見圖7A)。

屬水平上,有益菌乳酸菌屬(Lactobacillus)為正常組優(yōu)勢(shì)菌群,相對(duì)豐度為15.55%,而模型組該屬則降低為1.97%,取而代之的條件致病菌擬桿菌(Bacteroides)的豐度則極為提升,為22.84%,說明在結(jié)腸炎模型組中,有益菌極大的減少,機(jī)會(huì)致病菌大量增殖。通過F1、F2、TF1 處理后,條件致病菌擬桿菌雖然仍然為3 個(gè)組中的優(yōu)勢(shì)菌群,但是其相對(duì)豐度(18.80,13.52,11.12)相比模型組均有顯著性地降低,同時(shí)F1 與TF1 處理組中,乳酸菌屬的相對(duì)豐度也比模型組(1.97%)分別提升了約2～3 倍(4.06%和6.28%)(見圖7B)。

圖7 科水平和屬水平小鼠腸道微生物的富集Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Figure 7 Enrichment of intestinal microflora in mice at family level and genus level

進(jìn)一步對(duì)種水平上對(duì)機(jī)會(huì)致病菌擬桿菌和大腸桿菌的分析發(fā)現(xiàn)F1、F2 以及TF1 處理組可以顯著降低其豐度(見圖8)。

圖8 機(jī)會(huì)致病菌擬桿菌在小鼠腸道微生物中的富集Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Figure 8 Enrichment of Bacteroides acidifaciens in intestinal microflora of mice

2.4.5 LefSe 分析

LefSe 分析可結(jié)合非參數(shù)檢驗(yàn)和線性判別來確定豐度較高的微生物。由圖9 可看出,正常組顯著最高的是Muribaculaceae科和厚壁菌門(Firmicutes),模型組是擬桿菌科和擬桿菌屬,F1 處理組顯著最高的是腸桿菌科(Enterobacteriaceae)和大腸桿菌(Escherichia coli),F2 處理組顯著最高的是變形菌門 (Proteobacteria)、變形菌(Gammaproteobacteria)、腸桿菌科和腸桿菌目(Enterobacterales)；TF1 處理組顯著最高的是梭菌綱(Clostridia)和梭菌目(Clostridiales)。結(jié)果表明,經(jīng)三點(diǎn)金總黃酮、毛蕊異黃酮和刺芒柄花素可能是通過改變菌群的結(jié)構(gòu)組成而發(fā)揮作用。

圖9 線性判別分析效應(yīng)大小識(shí)別細(xì)菌的不同豐度Notes.N1,Control group.M1,Model group.F1,Calycosin group.F2,Formononetin group.TF1,Total flavones of Desmodium triflorum group.Figure 9 Linear discriminant analysis effect size to identify different abundances of bacteria

3 討論

近年來,隨著膳食結(jié)構(gòu)和環(huán)境的變化,UC 發(fā)病率在全球呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì),以歐洲和北美最高,嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量[15]。臨床上,雖然5-氨基水楊酸和皮質(zhì)類固醇等藥物可抑制炎癥,一些免疫調(diào)節(jié)劑和抗生素可用于治療類固醇耐藥或依賴的患者,但價(jià)格昂貴及治療后的繼發(fā)感染、敏感性降低和副作用大等安全性問題使得醫(yī)生和UC 患者難以接受,嚴(yán)重影響UC 的治療效果[16]。近年來研究表明,多種黃酮類化合物如毛蕊異黃酮,黃芩素,刺芒柄花素等對(duì)炎性腸病有一定的改善作用[10,17-18]。本研究通過對(duì)DSS 誘導(dǎo)的UC 小鼠的體重、結(jié)腸組織病理及血清中IL-1β 和IL-6 因子水平的檢測(cè),表明三點(diǎn)金總黃酮,毛蕊異黃酮及刺芒柄花素均可以抑制小鼠的體重下降、DAI 評(píng)分的增高；通過HE 染色及病理組織學(xué)評(píng)分得出三點(diǎn)金總黃酮和毛蕊異黃酮的改善效果優(yōu)于刺芒柄花素；然而對(duì)于IL-1β、IL-6 水平的抑制效果,則毛蕊異黃酮的效果優(yōu)于三點(diǎn)金總黃酮和刺芒柄花素,綜上結(jié)果表明毛蕊異黃酮對(duì)于UC 小鼠的治療作用優(yōu)于三點(diǎn)金總黃酮和刺芒柄花素。

腸道菌群與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,越來越多的學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),腸道菌群紊亂可能是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生、發(fā)展的始動(dòng)因素[19]。腸道正常菌群在腸道免疫系統(tǒng)的組成和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝,腸道微生態(tài)平衡等多方面起到十分重要的作用。Nishikawa 等[20]和吳瑞麗等[21]發(fā)現(xiàn)UC 患者人群的腸道菌群數(shù)量和結(jié)構(gòu)多樣性明顯低于健康人群。梁淑文等[22]通過比較UC 與健康組的腸道菌群,發(fā)現(xiàn)UC 活動(dòng)期優(yōu)勢(shì)菌乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌、真桿菌、消化球菌的菌群數(shù)量顯著減少,而條件致病菌如大腸桿菌,小梭菌菌群等數(shù)量顯著增加。以上研究表明腸道細(xì)菌多樣性降低、菌群結(jié)構(gòu)的破壞以及致病菌的增加等導(dǎo)致的腸道菌群失衡在UC 中起著重要的作用。黃酮類天然產(chǎn)物被證明能夠抑制細(xì)菌生物膜的形成、抑制細(xì)菌的能量代謝,抑制或殺死某些共生菌和病原體,減少細(xì)菌產(chǎn)生的毒素如硫化氫和脂多糖,進(jìn)而改善腸道的生態(tài)平衡,起到改善潰瘍性結(jié)腸炎的作用[23]。

本研究探討了三點(diǎn)金總黃酮,毛蕊異黃酮及刺芒柄花素對(duì)UC 小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示,三點(diǎn)金總黃酮和毛蕊異黃酮能夠改善和部分恢復(fù)菌群多樣性,但是刺芒柄花素對(duì)菌群多樣性卻沒有改善作用。徐豪明[24]的研究證實(shí)在TNBS 誘導(dǎo)腸炎小鼠腸道菌群中,條件致病菌擬桿菌和產(chǎn)酸擬桿菌的相對(duì)豐度明顯升高,而經(jīng)5-氨基水楊酸干預(yù)之后均顯著下降。從目前的結(jié)果來看,總黃酮的效果總體上優(yōu)于其兩個(gè)單體化合物,這很可能系協(xié)同效果所致。刺芒柄花素沒有提高物種多樣性,但是可能從降低條件致病菌擬桿菌而發(fā)揮作用。

綜上所述,三點(diǎn)金總黃酮,毛蕊異黃酮以及刺芒柄花素對(duì)UC 有一定的治療作用且毛蕊異黃酮優(yōu)于三點(diǎn)金總黃酮和刺芒柄花素,然而對(duì)于恢復(fù)腸道菌群多樣性和改善腸道菌群結(jié)構(gòu)來看,三點(diǎn)金總黃酮的效果總體上優(yōu)于其兩個(gè)單體化合物,這為UC治療藥物的研究提供了參考依據(jù)。