易 飛 張 軍 蔣莎莎 何 琴
成都市第三人民醫(yī)院1藥學(xué)部,2腫瘤科,成都 610031
2011年發(fā)布的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)藥事管理規(guī)定》中指出:倡導(dǎo)醫(yī)療機(jī)構(gòu)根據(jù)臨床需要建立靜脈用藥調(diào)配中心(室),危害藥品靜脈用藥應(yīng)當(dāng)實(shí)行集中調(diào)配供應(yīng)。此處危害藥品一般指細(xì)胞毒性藥品。細(xì)胞毒性藥品是指在生物學(xué)方面具有危害性的藥物,多為抗癌藥物。這類藥品通過(guò)皮膚接觸或吸入等方式攝入低劑量就能造成包括泌尿、肝腎系統(tǒng)的毒害,還可能致畸或損害生育功能[1]。目前有50余種細(xì)胞毒性藥物用于腫瘤的臨床治療[2],但該50余種細(xì)胞毒性藥物并未包括抗腫瘤中成藥注射劑。抗腫瘤中成藥注射劑應(yīng)該按照一般靜脈用藥配置,還是細(xì)胞毒性藥物配置,目前還沒(méi)有依據(jù)。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中藥治療腫瘤疾病的注射劑品種共計(jì)16個(gè)[3],其中四川省可掛網(wǎng)采購(gòu)的有6個(gè)品種,包括艾迪注射液、康萊特注射液、鴉膽子油乳注射液、康艾注射液(用于抗腫瘤或增效放、化療作用)以及復(fù)方苦參注射液和參芪扶正注射液(用于抗腫瘤輔助治療)。其中艾迪注射液、鴉膽子油乳注射液、康艾注射液及復(fù)方苦參注射液靜脈輸注前需要進(jìn)行稀釋配置。
毒性程度怎樣的藥品需要進(jìn)行靜脈用藥集中調(diào)配,目前尚無(wú)客觀標(biāo)準(zhǔn),也無(wú)評(píng)價(jià)規(guī)范。參照醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)-體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)操作流程及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4],藥物配置時(shí)對(duì)人體接觸部位的直接毒性可類比于醫(yī)療器械(如乳膠手套)表面接觸部位的直接毒性。乳膠手套的直接細(xì)胞毒性是用其浸提液測(cè)試細(xì)胞的直接毒性,一般使用MTT法,其特點(diǎn)是快速靈敏,試驗(yàn)周期短[5]。但在“醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)-體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)操作流程及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)”中,還可用細(xì)胞相對(duì)增殖率來(lái)進(jìn)行細(xì)胞毒性分級(jí),其中0級(jí)/≥100%為無(wú)細(xì)胞毒性;1級(jí)/80%~99%為輕微細(xì)胞毒性;2級(jí)/50%~79%為輕度細(xì)胞毒性;3級(jí)/30%~49%為中度細(xì)胞毒性;4級(jí)/0~29%為重度細(xì)胞毒性[6]。無(wú)細(xì)胞毒性可參照一般靜脈用藥配置;輕微及輕度細(xì)胞毒性可使用第1類生物安全柜進(jìn)行靜脈用藥配置;中度細(xì)胞毒性及重度細(xì)胞毒性可使用第2類生物安全柜進(jìn)行靜脈用藥配置[7]。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)測(cè)定艾迪注射液、鴉膽子油乳注射液、康艾注射液及復(fù)方苦參注射液的細(xì)胞相對(duì)增殖率,鑒定此4種常用抗腫瘤中成藥的直接細(xì)胞毒性,以指導(dǎo)是否需要用生物安全柜進(jìn)行靜脈配置。
鴉膽子油乳注射液(沈陽(yáng)藥大雷允上藥業(yè)有限責(zé)任公司)、艾迪注射液(貴州益佰制藥股份有限公司)、康艾注射液(長(zhǎng)白山制藥股份有限公司)及復(fù)方苦參注射液(山西振東制藥股份有限公司)均參照藥品說(shuō)明書(shū)中建議配置的濃度范圍設(shè)置稀釋濃度區(qū)間。中成藥注射液為復(fù)合物,其稀釋濃度均為溶液體積配比。其中鴉膽子油乳注射液稀釋的體積配比梯度為10/250 mL,15/250 mL,20/250 mL,25/250 mL,30/250 mL;艾迪注射液稀釋的體積配比梯度為56/500 mL,63/500 mL,71/500 mL,83/500 mL,100/500 mL,125/500 mL;康艾注射液稀釋的體積配比梯度為40/500 mL,60/500 mL,80/500 mL,100/500 mL,120/500 mL;艾迪注射液稀釋的體積配比為20/200 mL。
小鼠成纖維細(xì)胞L929:購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù),是L母細(xì)胞亞克隆,系W.R.Earle于1940年采取連續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)建立的最早細(xì)胞株之一。L細(xì)胞株來(lái)自100天雄性C3H/An小鼠正常成纖維細(xì)胞。
酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(PerkinElmer),96孔酶標(biāo)板(costar),CO2恒溫孵箱(Thermo),無(wú)菌超凈臺(tái)(Heal Force),體外培養(yǎng)用玻璃器皿(HyClone)。
CCK8試劑(biosharp),細(xì)胞培養(yǎng)液(HyClone),新鮮胎牛血清(四季青)等。
將制備好的細(xì)胞懸液接種于96孔板內(nèi),待細(xì)胞著床后加入供試液,于37℃ 5% CO2孵箱中培養(yǎng)48 h,然后加入CCK8試劑。繼續(xù)在37℃ 5% CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)1 h。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀采用雙波長(zhǎng)的方法測(cè)定光密度,通過(guò)與對(duì)照組的比較得到實(shí)驗(yàn)組的增殖率。各對(duì)照組均為不加藥物處理組,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均平行設(shè)置6個(gè)復(fù)孔。
相對(duì)空白對(duì)照組,鴉膽子油乳注射液稀釋體積比為10/250 mL及15/250 mL時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率在80%~99%區(qū)間,為輕微細(xì)胞毒性;藥品稀釋體積比為20/250 mL、25/250 mL及30/250 mL時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率在50%~79%區(qū)間,為輕度細(xì)胞毒性。見(jiàn)表1。
相對(duì)空白對(duì)照組,艾迪注射液稀釋體積比為56/500 mL及63/500 mL時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率在80%~99%區(qū)間,為輕微細(xì)胞毒性;藥品稀釋體積比為71/500 mL、83/500 mL、100/500 mL及125/500 mL時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率在50%~79%區(qū)間,為輕度細(xì)胞毒性。見(jiàn)表2。
相對(duì)空白對(duì)照組,康艾注射液稀釋體積比為40/500 mL、60/500 mL、80/500 mL及100/500 mL時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率≥100%,無(wú)細(xì)胞毒性;藥品稀釋體積比為120/500 mL時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率在80%~99%區(qū)間,為輕微細(xì)胞毒性。見(jiàn)表3。
相對(duì)空白對(duì)照組,復(fù)方苦參注射液稀釋體積比為20/200 ml時(shí),細(xì)胞相對(duì)增殖率在30%~49%區(qū)間,為中度細(xì)胞毒性。見(jiàn)表4。
表1 鴉膽子油乳注射液各稀釋體積比的吸光度值及細(xì)胞相對(duì)增殖率
表2 艾迪注射液各稀釋體積比的吸光度值及細(xì)胞相對(duì)增殖率
表3 康艾注射液各稀釋體積比的吸光度值及細(xì)胞相對(duì)增殖率
表4 復(fù)方苦參注射液稀釋體積比的吸光度值及細(xì)胞相對(duì)增殖率
本研究以各藥品說(shuō)明書(shū)建議的稀釋體積比設(shè)實(shí)驗(yàn)組,相對(duì)空白對(duì)照組,復(fù)方苦參注射液的細(xì)胞相對(duì)增殖率在30%~49%區(qū)間;鴉膽子油乳注射液、艾迪注射液的細(xì)胞相對(duì)增殖率在50%~99%區(qū)間;康艾注射液大部分的細(xì)胞相對(duì)增殖率≥100%;提示康艾注射液40~60 mL配置到250~500 mL液體中,細(xì)胞相對(duì)增殖率顯示為輕微或無(wú)細(xì)胞毒性;其作為一個(gè)益氣扶正、增強(qiáng)免疫功能的藥物,可以進(jìn)行一般靜脈用藥配置。鴉膽子油乳注射液說(shuō)明書(shū)建議配置方法為10~30 mL加入滅菌生理鹽水250 mL;艾迪注射液說(shuō)明書(shū)建議配置方法為50~100 mL,加入生理鹽水或5%~10%葡萄糖注射液400~450 mL中;該2種藥品細(xì)胞相對(duì)增殖率均顯示低濃度時(shí)為輕微細(xì)胞毒性,稍高濃度為輕度細(xì)胞毒性,建議可使用第1類生物安全柜進(jìn)行靜脈用藥配置。復(fù)方苦參注射液說(shuō)明書(shū)建議藥品稀釋體積比為20/200 mL,細(xì)胞相對(duì)增殖率顯示為中度細(xì)胞毒性,建議可使用第2類生物安全柜進(jìn)行靜脈用藥配置。
CCK8法測(cè)定細(xì)胞相對(duì)增殖率只是檢測(cè)抗腫瘤中成藥的直接細(xì)胞毒性,而評(píng)價(jià)一個(gè)藥物生物學(xué)方面的危害除了直接細(xì)胞毒性外,評(píng)價(jià)皮膚接觸或吸入等方式攝入低劑量所造成的毒害,以及致畸性或?qū)ιδ艿膿p害可能更有價(jià)值;這些方面的評(píng)價(jià)需要進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,但目前醫(yī)藥行業(yè)內(nèi)均無(wú)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范,有待進(jìn)一步通過(guò)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探討。