孔垂皓，孫 磊,2，趙 煥，趙宏蘇，張培良，吳德玲，黃圣卓，許鳳清

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 中藥飲片制造新技術(shù)安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230012；2.浙江康恩貝制藥股份有限公司，浙江 杭州 310052；3.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所，海南 ?？?571101)

鳳丹皮為芍藥科植物鳳丹(Paeoniaostii)的干燥根皮，為牡丹皮藥材的主要來源[1]。安徽銅陵為>鳳丹皮的主要栽培產(chǎn)區(qū)，鳳凰山所出者以皮厚、木心小、香氣足、療效好而享有道地藥材之美譽(yù)。鳳丹皮為清熱涼血、活血化瘀之要藥，其富含酚類和蒎烷類的單萜成分[2]。 內(nèi)生真菌作為植物體內(nèi)與宿主共生的微生物類群，與宿主協(xié)同進(jìn)化，參與植物生理作用和聯(lián)合代謝，在維持植物生長發(fā)育中起著關(guān)鍵作用。內(nèi)生真菌能夠促進(jìn)宿主植物生長和抗逆性以及產(chǎn)生與宿主植物相同或相近的代謝產(chǎn)物，是藥材形成道地性的關(guān)鍵因子。本實(shí)驗(yàn)前期對(duì)鳳丹皮不同生長期內(nèi)生真菌多樣性研究中，分離并鑒定了9屬13種內(nèi)生真菌[3]，并運(yùn)用生物發(fā)酵工程對(duì)Aspergillussp.MBL1612、Aspergillussp和Fusariumoxysporum3株菌株的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行化學(xué)成分研究[4-6]?，F(xiàn)對(duì)Fusariumacutatum的次生代謝產(chǎn)物的分離和鑒定工作進(jìn)行報(bào)道。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑 捷歐路JNM-ECP 600 MHz型核磁共振波譜儀：日本電子株式會(huì)社；Agilent 1260 Infinity 2液相色譜系統(tǒng)：美國Agilent公司；SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)：蘇州凈化設(shè)備有限公司；Milli-Q一體式超純水處理器：美國Merck公司；ZF-1型三用紫外分析儀：上海馳唐電子有限公司；LE104E型萬分之一電子天平:瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)；低溫冰箱(50 L)：海信集團(tuán)有限公司；生化培養(yǎng)箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；YMC-Pack ODS-A色譜柱(粒徑5 μm，孔徑12 nm，長250 mm，寬10.0 mm)：日本株式會(huì)社；Sephadex LH-20(50 μm)：美國通用電氣公司；反相材料Rp-18(40～75 μm)：日本富士硅化學(xué)株式會(huì)社；柱色譜硅膠(200～300目)和GF254薄層色譜用硅膠板：青島海洋化工廠；甲醇、乙腈(色譜純)：美國TEDIA公司；其他試劑均為分析純；水為超純水；顯色劑為10%硫酸-乙醇溶液(105 ℃加熱顯色)。

1.2 菌株來源 新鮮鳳丹皮塊根于2017年采集于安徽省銅陵市鳳凰山鐵山村鳳丹皮種植基地，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為芍藥科芍藥屬PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang的新鮮植株。菌株按文獻(xiàn)[3]進(jìn)行分離純化，由上海生工生物工程有限公司進(jìn)行分子鑒定，經(jīng)基因測(cè)序?qū)Ρ群箬b定為Fusariumacutatum(GenBank: AY213653)，現(xiàn)保存于安徽中醫(yī)藥大學(xué)天然藥物化學(xué)研究室(樣本憑證號(hào)m 20)。

1.3 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar, PDA)培養(yǎng)基 每升培養(yǎng)基中含去皮馬鈴薯200 g、磷酸二氫鉀3 g、蛋白胨1 g、葡萄糖20 g、維生素B 110 mg、硫酸鎂1.5 g，最后加入氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH值至5.5～6.0。每300 mL加1.8 g瓊脂粉。將PDA培養(yǎng)基放入500 mL錐形瓶中，用鋁箔封口，高壓滅菌30 min，趁熱導(dǎo)入已滅菌的冷卻干燥培養(yǎng)皿中，凝固冷卻，備用。大米固體培養(yǎng)基：取100 g大米，倒入120 mL超純水于500 mL錐形瓶中，封口。放入高壓蒸汽滅菌鍋120 ℃滅菌30 min，備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 固體發(fā)酵 將保存于-18 ℃冰箱的斜面培養(yǎng)基的F.acutatum接種于PDA平板，在恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)6 d，待菌種長至約2/3平板，觀察菌落形態(tài)，挑選無污染且長勢(shì)良好的平板，用接種環(huán)挑取菌落周圍新長出的菌絲，接種于多個(gè)PDA平板中，培養(yǎng)8 d，待菌種鋪滿整個(gè)平板時(shí)，將其用打孔器制成直徑約6 mm的圓片，接種于已滅菌的大米培養(yǎng)基，28 ℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 d，共計(jì)75瓶。

2.2 發(fā)酵產(chǎn)物的提取與分離 將內(nèi)生真菌F.acutatum的發(fā)酵產(chǎn)物，依次用1.5倍容積的乙酸乙酯和甲醇浸漬提取3次，每次48 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮后得到乙酸乙酯部位浸膏約300 g，甲醇部位浸膏88 g。

取乙酸乙酯萃取部位300 g，經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯)進(jìn)行洗脫，經(jīng)薄層色譜法(thin layer chromatography, TLC)檢識(shí)合并得到8個(gè)流分E1—E8。取甲醇萃取部位88 g，經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇)洗脫，經(jīng)TLC檢識(shí)合并得到7個(gè)流Fr.1—Fr.7。

將流分E2依次經(jīng)硅膠柱色譜[V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=9∶1]、Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]得到化合物7；將流分E3依次經(jīng)硅膠柱色譜[V(石油醚)∶V(丙酮)=9∶1]、Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]得到化合物14(14 mg)和15(280 mg)；將流分E4經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]洗脫，經(jīng)TLC檢識(shí)合并得到4個(gè)流分E4.1—E4.4。將流分E4.4重結(jié)晶后得到化合物6(31 mg)；將流分E4.3經(jīng)反相ODS柱色譜[V(甲醇)∶V(水)=40∶ 60→80∶20]洗脫，經(jīng)TLC檢識(shí)后將60%洗脫部位經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]純化后得到化合物2(8 mg)，將80%洗脫部位經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]得到流分E4.3.1—E4.3.3，再將流分E4.3.1重結(jié)晶得到化合物10(12 mg)，將流分E4.3.3經(jīng)制備液相[V(乙腈)∶V(水)=98∶2，流速3 mL/min，檢測(cè)波長210 nm，保留時(shí)間47.5 min]得到化合物8(9 mg)；取流分E5經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]，經(jīng)TLC檢識(shí)合并得到4個(gè)流分E5.1—E5.4，流分E5.2經(jīng)硅膠柱色譜[V(石油醚)∶V(丙酮)=9∶1→5∶1]得到2份白色固體，經(jīng)重結(jié)晶后得到化合物4(26 mg)和3(15 mg)；流分E5.4經(jīng)反相ODS柱色譜[V(甲醇)∶V(水)=30∶70→50∶50]洗脫得到無色晶體，再經(jīng)制備液相柱色譜[V(甲醇)∶V(水)=35∶65，流速3 mL/min，檢測(cè)波長280 nm，保留時(shí)間28.4 min]得到化合物5(6 mg)；將流分E7依次經(jīng)硅膠柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=19∶1]、Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]、制備液相[V(乙腈)∶V(水)=90∶10，流速2 mL/min，檢測(cè)波長210 nm，保留時(shí)間32 min]得到化合物9(5 mg)；將流分Fr.2依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1]、反相ODS柱色譜[V(甲醇)∶V(水)=40∶60→85∶15]洗脫，將85%洗脫部位經(jīng)硅膠柱色譜[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=19∶1]得到化合物11(7 mg)，剩余流分經(jīng)制備液相[V(乙腈)∶V(水)=85∶15，流速3 mL/min，檢測(cè)波長210 nm，保留時(shí)間14.5 min]得到化合物1(12 mg)；流分Fr.4經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)柱色譜重結(jié)晶后得到化合物13(10 mg)；流分Fr.7甲醇溶解過濾后經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)柱色譜，重結(jié)晶后得到化合物12(58 mg) 。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1為黃色粉末(氯仿)；10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS:m/z681.2[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-3′)，6.59(1H，d，J=8.5 Hz，H-2′)，6.48(1H，s，H-4)，5.28(1H，d，J=1.4 Hz，H-5′)，4.37(1H，dd，J=4.0，1.9 Hz，H-5)，3.79(3H，s，H-12)，3.65(3H，s，H-12′)，2.84、2.37(1H each，H-7)，2.16、1.98(1H each，H-6)，2.38(2H，m，H-7′)，2.32(1H，m，H-6′)，2.08(3H，s，Me-3)，1.93(3H，s，Me-5′)，0.93(3H，d，J=6.4 Hz，Me-3′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：159.89(s，C-1)，118.62(s，C-2)，148.55(s，C-3)，108.99(d，C-4)，156.87(s，C-4a)，67.05(d，C-5)，23.13(t，C-6)，24.39(t，C-7)，178.71(s，C-8)，100.52(s，C-9)，187.48(s，C-9a)，104.84(s，C-9b)，83.94(s，C-10)，171.25(s，C-11)，53.60(q，C-12)，21.10(q，Me-3)，161.79(s，C-1′)，110.31(d，C-2′)，139.99(d，C-3′)，114.67(s，C-4′)，155.51(s，C-4′a)，69.49(d，C-5′)，27.86(d，C-6′)，32.81(t，C-7′)，177.73(s，C-8′)，100.23(s，C-9′)，187.82(s，C-9′a)，106.88(s，C-9′b)，82.13(s，C-10′)，170.64(s，C-11′)，53.33(q，C-12′)，17.09(q，Me-3′)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]中報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為neosartorin。

化合物2為黃色油狀物，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z241.2 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.12(1H，t，J=7.2 Hz，H-10)，2.04(2H，m，H-9)，1.62、1.55(3H each，s，H-12，-15)，1.40(1H，t，J=8.4 Hz，H-8)，1.18(3H，s，H-13)，1.09(3H，s，H-14)，0.97(1H，d，J=6.6 Hz，H-1)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：131.62(s，C-11)，124.61(d，C-10)，81.29(s，C-3)，74.88(s，C-7)，54.26(d，C-6)，44.29(d，C-2)，40.51(t，C-8)，40.41(t，C-4)，26.09(q，C-13)，25.73(q，C-12)，24.96(q，C-14)，24.33(t，C-5)，22.69(t，C-9)，17.69(q，C-15)，14.62(q，C-1)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為cyclonerodiol。

化合物3為白色粉末(甲醇)；10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z654.4[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)3個(gè)N-MeVal片段質(zhì)子信號(hào)δ：4.55(3H，m，H-2)，2.29(3H，m，H-3)，1.06(3H×3，m，H-4a)，0.90(3H×3，m，H-4b)，3.14、3.12、3.11(3H each，s，N-Me)；2個(gè)Hiv片段質(zhì)子信號(hào)δ：5.14(2H，m，H-2′)，2.29(2H，m，H-3′)，0.98(3H×4，m，H-4′a,-4′b)；Hmp片段質(zhì)子信號(hào)δ：5.27(1H，d，J=6.6 Hz，H-2″)，2.00(1H，m，H-3″)，1.46、1.19(1H each，m，H-4″)，0.92(3H，m，H-5″)，0.96(3H，d，J=6.0 Hz，Me-3″)；13C NMR(600 MHz，CDCl3)3個(gè)N-MeVal片段碳信號(hào)δ：170.38(s×3，C-1)，63.36、63.30、63.15(d each，C-2)，28.05、27.98、27.93(d each，C-3)，20.50、20.44、20.44(q each，C-4a)，19.55、19.44、19.33(q each，C-4b)，33.27、33.07、33.07(d each，N-Me)；2個(gè)Hiv片段碳信號(hào)δ：169.3(s×2，C-1′)，75.92、75.78(d each，C-2′)，30.01(d ×2，C-3′)，18.75、18.73(q each，C-4a′)，18.60(q ×2，C-4b′)；Hmp片段碳信號(hào)δ：169.3(s，C-1″)，74.40(d，C-2″)，36.17(d，C-3″)，25.49(t，C-4″)，11.38(q，C-5″)，14.67(q，Me-3″)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故化合物3鑒定為enniatin H。

化合物4為白色無定型粉末(氯仿)；10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z262.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.24(4H，m，H-12，-13，-15，-16)，7.17(1H，m，H-14)，5.52(1H，d，J=7.2 Hz，H-3)，4.87(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，3.34(1H，dd，J=15.0,5.4 Hz，H-10a)，2.93(1H，dd，J=15.0,12.0 Hz，H-10b)，2.99(3H，s，Me-4)，1.94(1H，m，H-7)，0.80(3H，d，J=6.6 Hz，H-9)，0.41(3H，d，J=6.6 Hz，H-8)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：170.04(s，C-3)，169.78(s，C-2)，136.68(s，C-11)，128.92(d×2，C-12，-16)，128.65(d×2，C-13，-15)，126.89(d，C-14)，75.69(d，C-6)，57.22(d，C-3)，34.83(t，C-10)，32.29(q，Me-4)，29.82(d，C-7)，18.43(q，C-9)，17.45(q，C-8)。上述核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道數(shù)據(jù)一致，鑒定該化合物4為(3R,6R)-4-Methyl-6-(1-methylethyl)-3-phenylmethylperhy-dro-1,4-oxazine-2,5-dione。

化合物5為白色針狀結(jié)晶(甲醇)；10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z195.1 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.38(1H，dd，J=7.2,1.2 Hz，H-4)，6.68(1H，dd，J=7.2 Hz，H-5)，6.60(1H，br s，H-8)，2.36(3H，d，J=1.2 Hz，Me-3)，2.10(3H，br s，Me-7)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：169.51(s，C-9)，164.30(s，C-2)，158.60(s，C-6)，143.62(s，C-7)，141.30(d，C-4)，128.08(s，C-3)，120.11(d，C-8)，107.27(d，C-5)，16.72(q，Me-3)，13.60(q，Me-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]中g(shù)ibepyrone D的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為gibepyrone D。

化合物6為白色粉末(氯仿)，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z153.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.26(1H，dq，J=6.7，1.3 Hz，H-4)，6.96(1H，d，J=6.7 Hz，H-7)，2.52(3H，s，H-2′)，2.19(3H，d，J=1.3 Hz，Me-3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：191.37(s，C-1′)，161.31(s，C-2)，153.32(s，C-6)，137.98(d，C-4)，131.94(s，C-3)，107.17(d，C-5)，25.83(q，C-2′)，17.49(q，Me-3)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，故鑒定化合物6為gibepyrone F。

化合物7為白色針狀結(jié)晶(甲醇)，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z397.3 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.57(1H，dd，J=5.6，2.5 Hz，H-7)，5.38(1H，m，H-6)，5.23(1H，dd，J=15.6，7.6 Hz，H-23)，5.20(1H，dd，J=15.6，9.0 Hz，H-22),3.61(1H，m，H-3)，1.04(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.95(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.84(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.63(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：141.36(s，C-8)，139.80(s，C-5)，135.58(d，C-22)，132.00(d，C-23)，119.61(d，C-6)，116.31(d，C-7)，70.47(d，C-3)，55.76(d，C-14)，54.58(d，C-17)，46.27(d，C-9)，42.85(d，C-13)，42.85(d，C-24)，40.81(t，C-4)，40.43(d，C-20)，39.10(t，C-16)，38.39(t，C-1)，37.05(s，C-10)，33.10(d，C-25)，32.00(t，C-2)，28.30(t，C-12)，23.01(q，C-21)，21.13(t，C-15)，21.11(t，C-11)，19.96(q，C-26)，19.66(q，C-27)，17.62(q，C-28)，16.50(q，C-19)，12.06(q，C-18)。上述核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，鑒定化合物7為麥角甾醇。

化合物8為白色針狀結(jié)晶(甲醇)，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z429.3 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.51(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，6.24(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，5.21(1H，dd，J=15.4，7.8 Hz，H-23)，5.15(1H，dd，J=15.4，9.0 Hz，H-22)，3.94(1H，m，H-3)，1.00(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.91(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.88(3H，s，H-19)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.82(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：135.43(d，C-6)，135.22(d，C-22)，132.33(d，C-23)，130.77(d，C-7)，82.17(s，C-5)，79.44(s，C-8)，66.49(d，C-3)，56.22(d，C-17)，51.70(d，C-14)，51.11(d，C-9)，44.58(s，C-13)，42.79(d，C-24)，39.73(d，C-20)，39.36(t，C-12)，36.98(t，C-4)，36.95(s，C-10)，34.71(t，C-1)，33.08(d，C-25)，30.13(t，C-2)，28.65(t，C-16)，23.41(t，C-11)，21.13(t，C-15)，20.89(q，C-21)，19.95(q，C-27)，19.65(q，C-26)，18.18(q，C-19)，17.57(q，C-28)，12.88(q，C-18)。上述核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，鑒定化合物8為ergosterol peroxide。

化合物9為白色針狀結(jié)晶(甲醇)，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z431.3 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.23(1H，m，H-7)，5.21(1H，dd，J=15.4，7.4 Hz，H-23)，5.18(1H，dd，J=15.4，8.3 Hz，H-22)，3.94(1H，m，H-3)，3.53(1H，br s，H-6)，1.06(3H，s，H-19)，1.03(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.93(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.85(3H，s，H-26)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.64(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.61(s，C-8)，135.29(d，C-22)，131.29(d，C-23)，119.34(d，C-7)，74.40(s，C-5)，72.03(d，C-6)，65.88(d，C-3)，55.21(d，C-17)，54.07(d，C-14)，42.89(s，C-13)，42.17(d，C-9)，41.90(d，C-24)，40.08(t，C-4)，39.92(t，C-12)，38.86(d，C-20)，36.55(s，C-10)，32.36(t，C-1)，32.36(d，C-25)，31.07(t，C-2)，27.62(t，C-16)，22.49(t，C-15)，21.23(t，C-11)，20.88(q，C-21)，19.65(q，C-27)，19.36(q，C-26)，17.60(q，C-19)，17.18(q，C-28)，11.97(q，C-18)。上述核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致，鑒定化合物9為(20S, 22E, 24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇。

化合物10為白色粉末(氯仿)，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z309.2[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.18(1H，m，H-9)，7.15(1H，m，H-8)，6.49(1H，m，H-7)，6.46(1H，m，H-10)，2.59(2H，t，J=7.4 Hz，H-5)，2.58(2H，t，J=7.4 Hz，H-12)，2.34(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，1.60(6H，m，H-3，-4，-13)，1.32(8H，m，H-14，-15，-16，-17)，0.91(3H，t，J=7.4 Hz，H-18)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：200.17(s，C-11)，200.02(s，C-6)，178.26(s，C-1)，138.92(d，C-9)，138.84(d，C-8)，136.05(d，C-10)，135.97(d，C-7)，41.25(t，C-12)，41.07(t，C-5)，33.71(t，C-2)，28.99(t，C-13)，28.97(t，C-4)，28.84(t，C-3)，26.14(t，C-16)，24.61(t，C-14)，23.91(t，C-15)，22.36(t，C-17)，13.95(q，C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]中的數(shù)據(jù)很相似，唯一不同的是化合物10少了一個(gè)甲氧基的碳信號(hào)，且1位的羰基碳信號(hào)向低場位移了4.1×10-6m，推測(cè)原來1位的甲氧基由羥基取代[17]，因此化合物10結(jié)構(gòu)鑒定為(7E,9E)-6,11-dioxononadeca-7,9-dienoic acid。

化合物12為白色固體(甲醇)，10%硫酸-乙醇顯色為黑色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z340[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.11(1H，d，J=3.6 Hz，H-1)，4.48(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.84(1H，br d，J=11.5 Hz)，3.77(2H，m)，3.64(3H，m)，3.34(2H，m)，3.27(3H，m)，3.12(1H，t，J=8.5 Hz，H-3′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：96.85(d，C-1)，92.63(d，C-1′)，76.74(d，C-5)，76.62(d，C-3)，74.94(d，C-5′)，73.53(d，C-3′)，72.50(d，C-4)，71.65(d，C-4′)，70.51(d，C-2)，70.38(d，C-2′)，61.53(d，C-6)，61.42(t，C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]基本一致，故鑒定化合物12為α-D-吡喃葡萄糖基-(1→1′)-3′-氨基-3′-去氧-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13為白色固體(甲醇)，10%硫酸-乙醇顯色為黑色斑點(diǎn)。ESI-MS：m/z179.1[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，CD3OD)羥基質(zhì)子信號(hào)組δ：6.14(1H，d，J=4.8 Hz)，4.85(1H，t，J=3.0 Hz)，4.70(1H，d，J=5.5 Hz，OH-1)，4.57(1H，d，J=4.8 Hz)，4.39(1H，d，J=6.7 Hz)；4.29(1H，dd，J=6.8，5.6 Hz，H-1)，3.53(1H，ddd，J=11.5，5.4，2.3 Hz，H-6a)，3.49(1H，ddd，J=11.5，2.4，2.2 Hz，H-6b)，3.39、3.36、3.04、2.98(1H each，m，H-3，-4，-2，-5)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：92.10(d，C-1)，72.96(d，C-3)，72.24(d，C-2)，71.82(d，C-4)，70.46(d，C-5)，61.10(t，C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]中化合物coyolosa比較，與其單元結(jié)構(gòu)核磁數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物13為α-D-alloypyranose。

化合物14為無色針晶(二氯甲烷)，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z:435.4[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.32(1H，dt，J=6.1，2.0 Hz)，5.12(1H，dd，J=15.6，9.0 Hz)，4.98(1H，dd，J=15.6，9.0 Hz)，3.51(1H，m)，1.00(3H，s，H-19)，0.89(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.78(3H，t，J=7.4 Hz，H-29)，0.84、0.82(3H each，d，J=6.8 Hz，H-26，-27)，0.68(3H，s，H-18)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.29(t，C-1)，31.69(t，C-2)，71.90(d，C-3)，42.40(t，C-4)，141.63(s，C-5)，121.87(d，C-6)，31.97(t，C-7)，31.97(t，C-8)，50.02(d，C-9)，36.26(s，C-10)，21.29(t，C-11)，39.76(t，C-12)，42.30(s，C-13)，56.04(d，C-14)，25.47(t，C-15)，28.99(t，C-16)，56.94(d，C-17)，12.23(q，C-18)，19.06(s，C-19)，40.56(d，C-20)，21.29(q，C-21)，138.41(d，C-22)，129.36(d，C-23)，51.36(d，C-24)，29.76(d，C-25)，19.01(q，C-26)，18.83(q，C-27)，24.44(t，C-28)，13.12(q，C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道一致，故鑒定化合物14為豆甾醇。

化合物15為無色針晶(二氯甲烷)；10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z:437.4[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.33(1H，dt，J=6.0，1.8 Hz)，3.47(1H，m，H-3)，0.99(3H，s，H-19)，0.91(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.83(3H，t，J=7.2 Hz，H-29)，0.84、0.82(3H each，d，J=6.6 Hz，H-26，-27)，0.67(3H，s，H-18)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：140.77(s，C-5)，121.73(d，C-6)，71.63(d，C-3)，56.78(d，C-14)，56.107(d，C-17)，50.15(d，C-9)，45.86(d，C-24)，42.24(s，C-13)，42.32(t，C-4)，39.79(t，C-12)，37.27(t，C-1)，36.52(s，C-10)，36.16(d，C-20)，33.96(t，C-22)，31.92(t，C-2，-7)，31.68(d，C-8)，29.17(d，C-25)，28.26(t，C-16)，26.10(t，C-23)，24.32(t，C-15)，23.08 (t，C-28)，21.09(t，C-11)，19.83(q，C-26)，19.41(q，C-27)，19.05(q，C-19)，18.79(q，C-21)，11.99(q，C-29)，11.87(q，C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道一致，故鑒定化合物15為β-谷甾醇。

4 結(jié)論

從鳳丹皮內(nèi)生真菌F.acutatum的大米固體發(fā)酵物中分離得到15個(gè)化合物，主要為甾醇類、α-吡喃酮衍生物、噁嗪二酮衍生物、環(huán)肽等。麥角甾醇類成分在抗氧化、抗菌、抗腫瘤、抗補(bǔ)體以及減少心腦血管疾病的發(fā)生方面發(fā)揮著積極的作用，同時(shí)作為一類重要的醫(yī)藥化工原料，用于可的松及激素黃體酮的等甾醇類藥物的生產(chǎn)。研究利用大米為培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌株，得到的次生代謝物中以麥角甾醇及其衍生物為主，然而早在2005年，Gopalakrishnan等[23]對(duì)鷹嘴豆中分離得到的該菌株的液體發(fā)酵物中分離得到8-O-methyl-fusarubin,提示其次生代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)條件密切相關(guān)，后續(xù)的研究工作應(yīng)著重于優(yōu)選該菌株的培養(yǎng)條件，以期獲得結(jié)構(gòu)單一的目標(biāo)化合物，合理開發(fā)利用該菌株。