魏 婧，李彥靈，劉 艷，楚雨汝，宋 庸，王 璐，錢慧琴

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 三全學(xué)院,新鄉(xiāng) 453000)

線葉旋覆花(Inulalineariifolia)為菊科旋覆花屬草本植物,其地上部分是中藥金沸草的主要原料,具降氣、消痰、行水之效,用于治療外感風(fēng)寒、痰飲蓄結(jié)、咳喘痰多、胸膈痞滿等病癥[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明,線葉旋覆花的揮發(fā)油具有較顯著的抗炎和抗腫瘤的作用,這對于抗炎、抗腫瘤藥的臨床研發(fā)具有重大意義[2-4]。

《中華人民共和國藥典》、《中藥大辭典》和《中華本草》對線葉旋覆花均有記載,但記載的入藥部位卻并不統(tǒng)一[1,5-6]。其中,《中華人民共和國藥典》和《中華本草》記載的藥用部位均為地上部分,即莖葉和花,而《中藥大辭典》記載的藥用部位僅為莖葉。由于入藥部位不統(tǒng)一,線葉旋覆花在臨床應(yīng)用和科學(xué)研究上比較混亂[7],但是目前關(guān)于莖葉和花中揮發(fā)性成分差異的研究鮮有報(bào)道。鑒于此,本工作采用頂空-氣相色譜-質(zhì)譜法分析線葉旋覆花莖葉和花中的揮發(fā)性成分差異,旨在為明確線葉旋覆花的入藥部位提供基礎(chǔ)資料。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

7890B-7000C 型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,配7697A 型頂空自動(dòng)進(jìn)樣器;FA2004 型電子天平;FW-100型高速萬能粉碎機(jī);101型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

試驗(yàn)用水為純凈水;線葉旋覆花樣品采集于南陽市桐柏縣,經(jīng)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院三全學(xué)院閆福林教授鑒定。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 頂空條件

平衡溫度120 ℃;平衡時(shí)間30 min。

1.2.2 色譜條件

DB-5色譜柱(60 m×0.25 mm,0.25μm);柱升溫程序:初始柱溫35 ℃,保持5 min;以10 ℃·min－1速率升溫至200 ℃,保持10 min;以20 ℃·min－1速率升溫至280 ℃,保持10 min;進(jìn)樣口溫度300 ℃;進(jìn)樣量1μL;載氣為氦氣,純度99.99%;分流進(jìn)樣,分流比為50∶1;流量1.0 mL·min－1;質(zhì)譜檢測器傳輸線溫度300 ℃。

1.2.3 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源;電離能量70 e V;離子源溫度230 ℃,四極桿溫度150 ℃;掃描方式SCAN,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z)20～550;溶劑延遲時(shí)間4.0 min。

1.3 試驗(yàn)方法

將采集的線葉旋覆花按照莖葉和花的順序裁剪,分別用水清洗干凈,吸水紙吸取表面水分,置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中,于50℃干燥24 h。將干燥后的樣品粉碎,過孔徑為0.25 mm 篩網(wǎng),所得粉末分別裝入密封袋中,于－4 ℃冷凍保存,備用。分取線葉旋覆花莖葉和花的粉末各0.02 g置于20 mL頂空瓶中,按照儀器工作條件測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜行為

按照試驗(yàn)方法分析線葉旋覆花莖葉和花中的揮發(fā)性成分,總離子流色譜圖見圖1。

圖1 線葉旋覆花不同入藥部位中揮發(fā)性成分的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatograms of volatile components from different medicine parts of Inula lineariifolia

2.2 不同部位揮發(fā)性成分分析

根據(jù)檢出組分的保留時(shí)間和質(zhì)譜碎片離子等信息,利用質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST14.lib檢索,并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行譜圖解析,確定各揮發(fā)性成分的名稱和其所屬種類,并利用峰面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對含量(用%表示),結(jié)果見表1。

由表1可知,從線葉旋覆花莖葉和花中共鑒定出揮發(fā)性成分68種,分為九大類,包括烯烴類(27種)、醛類(12種)、醇類(5種)、酸類(5種)、烷烴類(7種)、芳香烴類(3種)、酯類(3種)、酮類(2種)和其他類揮發(fā)性成分(4種),說明線葉旋覆花所含揮發(fā)性成分的組成較為復(fù)雜。

表1 線葉旋覆花不同入藥部位中揮發(fā)性成分信息及其相對含量Tab.1 Information and relative content of volatile components from the different medicine parts of Inula lineariifolia

表1(續(xù))

對線葉旋覆花莖葉以及花中的揮發(fā)性成分種類及相對含量進(jìn)行總結(jié)。結(jié)果顯示,從線葉旋覆花莖葉和花中鑒定出的揮發(fā)性成分種類和相對含量存在較大差異。從線葉旋覆花莖葉中共鑒定出46種化合物,占總揮發(fā)性成分的71.11%,包括烯烴類化合物13種(18.11%)、酸類化合物5種(17.32%)、醇類化合物4 種(12.16%)、醛類化合物9 種(8.76%)、烷烴類化合物7種(4.05%)、芳香烴類化合物2種(0.41%)、酯類化合物3種(0.80%)、酮類化合物2種(0.32%)和其他化合物1 種(9.18%),其中相對含量大于5.00%的揮發(fā)性成分有乙酸(14.44%)、2-甲氧基-3-烯丙基苯酚(9.18%)、巴倫西亞橘烯(6.72%)、桉葉油醇(5.88%),共占總揮發(fā)性成分的36.22%。從花中鑒定出30 種揮發(fā)性成分,占其總揮發(fā)性成分的99.98%,包括烯烴類化合物18種(52.67%)、醇類化合物2 種(29.35%)、醛類化合 物5 種(11.50%)、芳香烴類化合物2 種(2.07%)和其他類化合物3 種(4.39%),其中 相對含量大于5.00%的成分有桉葉油醇(28.41%)、γ-橄檻烯(8.41%)、巴倫西亞橘烯(6.30%)、(－)-人參萜烯(5.73%)、7-表-香草酚-5-烯(5.25%)、瑟林-4,11-二烯(5.05%),占揮發(fā)性成分總量的59.15%。此外,線葉旋覆花中烯烴類成分的含量差異較大,總相對含量是莖葉中的2～3倍。值得注意的是線葉旋覆花中烯烴類成分均是以異戊二烯為單位的化合物,說明得到烯烴類成分屬于萜烯類成分。萜烯類化合物具有抗炎、抗腫瘤和神經(jīng)保護(hù)生物活性[8],對阿爾茲海默病、癌癥和心血管疾病等慢性疾病具有潛在的治療作用[9-11],這是線葉旋覆花發(fā)揮抗炎、抗腫瘤等作用的物質(zhì)基礎(chǔ),而兩個(gè)入藥部位的萜烯類化合物相對含量均較高。因此,在進(jìn)行相關(guān)治療時(shí),線葉旋覆花的花、莖葉均可入藥。

對莖葉、花中共有揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,線葉旋覆花莖葉和花中有8種共有揮發(fā)性成分,包括α-蒎烯、D-檸檬烯、巴倫西亞橘烯、(－)-人參萜烯、異戊醛、正己醛、桉葉油醇、鄰-異丙基苯,莖葉和花中的相對含量分別為0.11%,0.28%,6.72%,2.73%,0.74%,3.65%,5.88%,0.17%和2.08%,1.32%,6.30%,5.73%,2.52%,0.97%,28.41%,1.15%,不同部位的共有揮發(fā)性成分相對含量差異較大,相對含量大于5.00%的成分為巴倫西亞橘烯和桉葉油醇,前者在不同入藥部位的相對含量相差不大,后者在花中的相對含量為莖葉中的4～5倍。桉葉油醇在呼吸道疾病、胰腺炎、結(jié)腸損傷、心血管和神經(jīng)退行性疾病的治療中具有鎮(zhèn)痛、抗炎和抗氧化的活性[12-15];巴倫西亞橘烯可通過抑制NF-κB活性起抗炎作用[16];α-蒎烯能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞,如肝癌細(xì)胞[17]周期阻滯和凋亡;D-檸檬烯對Aβ42蛋白的神經(jīng)毒性具有一定減緩作用,有望成為治療阿爾茲海默病的藥物[18]。對莖葉、花中特有揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,線葉旋覆花莖葉中特有成分有38種,相對含量大于2.00%的揮發(fā)性成分有2-甲氧基-3-烯丙基苯酚、乙酸、3-硝基-2-丁醇、(－)-香樹烯?；ㄖ刑赜谐煞钟?2種,相對含量大于2.00%的成分包括γ-橄檻烯、瑟林-4,11-二烯、7-表-香草酚-5-烯、2-甲基丁醛、異丁醛、硼烷二甲基硫醚絡(luò)合物、2-亞甲基-4,8,8-三甲基-4-乙烯基-雙環(huán)[5.2.0]正壬烷、β-廣霍香烯、γ-松油烯、雙-外-α-雪松烯和異松油烯。其中香樹烯和γ-橄檻烯對金黃色葡萄球菌有抑制作用[19-20],γ-橄檻烯還對大腸桿菌和白色念珠菌有一定的抑制作用。綜上可看出,線葉旋覆花不同入藥部位在揮發(fā)性成分的種類和相對含量上存在較大差異,但其成分均表現(xiàn)出抗炎、抗腫瘤的藥理作用,說明線葉旋覆花的莖葉和花均具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

本工作采用頂空-氣相色譜-質(zhì)譜法分析線葉旋覆花莖葉和花中揮發(fā)性成分,以保留時(shí)間和質(zhì)譜碎片離子定性,以面積歸一化法定量,并分析了莖葉和花中鑒定出的成分的種類及相對含量,可為線葉旋覆花莖葉和花中揮發(fā)性成分的開發(fā)提供一定理論指導(dǎo)。