杜明儀 余培瓊 盧少芬 龍海燕 張琦 梁熒

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展,輸血醫(yī)學(xué)在治療過(guò)程也發(fā)揮了重要的作用,應(yīng)用日趨廣泛,使用生理鹽水與洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行混懸,保存期至多為24 h,而患者有急需時(shí)還需要采用預(yù)約制度,這在很大程度上也限制了洗滌紅細(xì)胞的使用,不僅會(huì)耽誤患者的最佳治療時(shí)間,而且在急需用血時(shí)也加重了血站的工作量［1］。我國(guó)在2012 年重新制定和實(shí)施的《全血成分血質(zhì)量要求》以及血站操作技術(shù)詳細(xì)流程中都明確規(guī)定使用紅細(xì)胞保存液制備的懸浮細(xì)胞可以放置在2～6℃低溫冰箱中進(jìn)行保存,保存期限≤5 周［2］。如果全血在密閉系統(tǒng)中進(jìn)行充分洗滌再與紅細(xì)胞保存液進(jìn)行混懸后,洗滌紅細(xì)胞的保存期就可以延長(zhǎng)到5 周,與懸浮紅細(xì)胞的保存期限基本一致,這就為MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞制備提供了依據(jù),同時(shí)也能大大減輕臨床血站的工作壓力,患者有急需時(shí)可以迅速調(diào)動(dòng)血庫(kù)滿足臨床需要［3］。血站將人體乳糜血分為不同程度,去除血漿后將生理鹽水與洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行混懸,減少血液資源的浪費(fèi),提高制備效率,但是血液中的主要成分是紅細(xì)胞,如果乳糜程度較高,會(huì)對(duì)紅細(xì)胞產(chǎn)生造成很大程度的影響,制備時(shí)去除乳糜顆粒也會(huì)損傷紅細(xì)胞,因此本研究探討不同程度的脂肪血制備洗滌紅細(xì)胞的可行性,現(xiàn)將相關(guān)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料 萬(wàn)瑞血球計(jì)數(shù)儀；萬(wàn)瑞半自動(dòng)生化分析儀；游離紅總蛋白試劑盒,722 光柵分光光度；無(wú)菌接駁機(jī)；大容量低溫離心機(jī)；分漿夾；低溫操作臺(tái)；五聯(lián)洗滌套裝：生理鹽水、紅細(xì)胞保存液、一次性使用塑料血袋,均經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)審批合格,放置于2～6℃低溫冰箱中進(jìn)行保存［4］。

1.2 血液分類 隨機(jī)抽取人體脂肪血標(biāo)本56 份,檢測(cè)MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞制備前的脂肪血中的乳糜指數(shù),乳糜指數(shù)越大血液乳糜程度越重［5］,根據(jù)乳糜指數(shù)不同分為對(duì)照組(正常全血)、輕度乳糜組(乳糜指數(shù)≤2)、中度乳糜組(2＜乳糜指數(shù)≤5)、重度乳糜組(乳糜指數(shù)＞5),每組14 份。

1.3 制備方法 將體采科采集的全血放置于大容量低溫離心機(jī)中離心并分離出懸浮紅細(xì)胞,在細(xì)胞保存期限內(nèi)均可以制備MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞。通過(guò)無(wú)菌接管機(jī)將五聯(lián)洗滌套裝的無(wú)菌生理鹽水與懸浮紅細(xì)胞連接并在密閉系統(tǒng)中洗滌3 次,這種做法能夠有效去除98%以上的血漿、90%以上的白細(xì)胞和血小板,同時(shí)還能夠去除在保存過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸、鉀、氨等代謝產(chǎn)物,保留了80%以上的紅細(xì)胞,最后加入到紅細(xì)胞保存液中混勻即可,并留標(biāo)本置于低溫冰箱進(jìn)行保存［6］。

1.4 檢測(cè)方法 在儲(chǔ)存2、7、14、21、28、35 d 時(shí)測(cè)定制備洗滌紅細(xì)胞混懸液中的血細(xì)胞比容、游離Hb濃度、總Hb 濃度、計(jì)算儲(chǔ)存期末溶血率,并且記錄分析四組不同儲(chǔ)存時(shí)間紅細(xì)胞溶血率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞儲(chǔ)存期末各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比 對(duì)照組總Hb濃度為(195.8±8.6)g/L,血細(xì)胞比容為(0.54±0.02),游離Hb濃度為(0.68±0.11)g/L,儲(chǔ)存期末溶血率為(0.16±0.03)%；輕度乳糜組總Hb 濃度為(192.4±10.5)g/L,血細(xì)胞比容為(0.52±0.04),游離Hb濃度為(0.73±0.15)g/L,儲(chǔ)存期末溶血率為(0.18±0.05)%；中度乳糜組總Hb 濃度為(180.3±10.4)g/L,血細(xì)胞比容為(0.47±0.06),游離Hb 濃度為(1.24±0.18)g/L,儲(chǔ)存期末溶血率為(0.24±0.06)%；重度乳糜組總Hb 濃度為(169.5±10.7)g/L,血細(xì)胞比容為(0.41±0.05),游離Hb濃度為(1.48±0.25)g/L,儲(chǔ)存期末溶血率為(0.48±0.13)%。對(duì)照組與輕度乳糜組MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞儲(chǔ)存期末總Hb 濃度、血細(xì)胞比容、游離Hb 濃度、儲(chǔ)存期末溶血率比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。中度乳糜組和重度乳糜組的總Hb 濃度、血細(xì)胞比容均低于對(duì)照組和輕度乳糜組,游離Hb 濃度、儲(chǔ)存期末溶血率均高于對(duì)照組和輕度乳糜組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 四組MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞儲(chǔ)存期末各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比 ()

表1 四組MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞儲(chǔ)存期末各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)比 ()

注：與對(duì)照組對(duì)比,aP＜0.05 ；與輕度乳糜組對(duì)比,bP＜0.05

2.2 四組不同儲(chǔ)存時(shí)間紅細(xì)胞溶血率 隨著儲(chǔ)存時(shí)間增加,四組紅細(xì)胞溶血率升高,且同儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)照組、輕度乳糜組、中度乳糜組、重度乳糜組紅細(xì)胞溶血率逐漸升高。見(jiàn)表2。

表2 四組不同儲(chǔ)存時(shí)間紅細(xì)胞溶血率(%)

3 討論

脂肪血也稱為乳糜血,人類攝入脂肪含量較高的食物,如肥肉、花生、油條等,脂肪就會(huì)進(jìn)入血液形成乳糜微粒,血漿呈現(xiàn)渾濁狀,近年來(lái)血站采集乳糜血的量呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì),收集乳糜血液量占總采集量的5%～6%,盡管血站定期都會(huì)進(jìn)行獻(xiàn)血知識(shí)的宣傳,但是為了能夠確保血液供應(yīng)量充足,權(quán)衡利弊后一般不臨時(shí)淘汰,容易打擊獻(xiàn)血者的積極性,且給血液采集工作增加了難度［7］。研究表明乳糜血如果輸入人體會(huì)產(chǎn)生很多不良影響,例如導(dǎo)致受血者出現(xiàn)發(fā)熱、脂肪栓塞、神經(jīng)水腫等,而且重度乳糜血會(huì)增加紅細(xì)胞膜的脆性,呈現(xiàn)牛奶狀,分離血液成分也相當(dāng)困難,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不利于篩查病毒抗體、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)等,因此在臨床實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中,尤其是血液供應(yīng)緊張的情況下,高效利用脂肪血具有重要的意義［8］。

研究表明,在利用制備脂肪血時(shí)需要去除大量白細(xì)胞,靜置離心后就可以明顯觀察到乳糜顆粒上浮,在底部血液中殘存量較少,因此制備洗滌紅細(xì)胞時(shí)需要使用生理鹽水將其充分洗滌干凈,離心后完全去除乳糜顆粒和其他代謝產(chǎn)物。紅細(xì)胞保存液混懸洗滌紅細(xì)胞在我國(guó)廣泛應(yīng)用于保存新鮮血液,MAP 液的組成成分包括葡萄糖、磷酸鹽、氯化鈉、枸櫞酸、枸櫞酸鈉以及甘露醇等,葡萄糖和甘露醇的生理作用是為洗滌后的紅細(xì)胞提供能量,改善pH 值,降低溶血率［9］。本實(shí)驗(yàn)采取不同濃度的脂肪血制備洗滌紅細(xì)胞,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中是否會(huì)造成紅細(xì)胞的損傷以及對(duì)于紅細(xì)胞質(zhì)量的影響才是應(yīng)該關(guān)注的重點(diǎn)。而溶血?jiǎng)t是檢查紅細(xì)胞儲(chǔ)存過(guò)程中質(zhì)量的重要指標(biāo),當(dāng)紅細(xì)胞膜破損后,Hb逸出是血液儲(chǔ)存過(guò)程中最容易發(fā)生的現(xiàn)象,對(duì)于受血者的生命安全構(gòu)成了威脅［10］。我國(guó)全血質(zhì)量要求中明確規(guī)定MAP 混懸洗滌紅細(xì)胞溶血率應(yīng)該控制在紅細(xì)胞總質(zhì)量的0.8%之內(nèi),隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng),儲(chǔ)存期末的溶血率也逐漸上升,血細(xì)胞比容以及總Hb 濃度都有小范圍的上升幅度。而且乳糜程度的提高也會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存期末溶血率上升,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以明顯看出不同乳糜程度、儲(chǔ)存時(shí)間均會(huì)影響洗滌紅細(xì)胞儲(chǔ)存期末溶血率［11］。

綜上所述,使用輕中度乳糜血制備洗滌紅細(xì)胞乳糜指數(shù)明顯低于重度乳糜血,儲(chǔ)存期末溶血率以及其他各項(xiàng)指標(biāo)也符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),臨床使用后注入人體未見(jiàn)明顯不良反應(yīng),紅細(xì)胞保存液混懸洗滌紅細(xì)胞保存期限有效延長(zhǎng),血站可以根據(jù)臨床實(shí)際用血量適時(shí)調(diào)整血液庫(kù)存量,滿足臨床需求,縮短急需用血患者等待的時(shí)間,但是本實(shí)驗(yàn)也存在一定程度大的局限性,如樣本量較小,可能會(huì)存在實(shí)驗(yàn)誤差,因此需要加大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。